Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Nano-formülasyonları endotoksin tespiti Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) deneyleri kullanarak
Chapters
Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Endotoxins mühendislik Nanomalzemeler içinde tespiti nanomedicine alanında büyük zorluklardan biri temsil eder. Burada, nano tanecikleri potansiyel endotoksin kirlenme tahmin etmek için üç farklı biçimlerinin LAL oluşan çerçeve açıklar bir örnek çalışma mevcut.
Transcript
Bu yöntem nano ilaçların güvenliği hakkında tıbbi alanda cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin avantajları standart olmasıdır, ve ürünlerin değerlendirilmesi için dünya çapında kullanılan, nano ilaçlar için. Prosedürün tanıtımı, Barry Neun, Nano Teknoloji Karakterizasyon Laboratuvarı'nda olacak.
Kalibrasyon standardı nahazırlık için 900 mikrolitre limulus amebocyte lysate veya LAL sınıfı su kullanın. Ve kontrol standart endotoksin 100 mikrolitre, gerektiği kadar ara seyreltme hazırlamak için, mililitre başına bir endotoksin birimi konsantrasyonu ile bir kalibrasyon standardı hazırlanmasını sağlamak için. Sonra 900 lal sınıf su mikrolitre kullanarak, ve mililitre kalibrasyon standardı başına bir endotoksin birim 100 mikrolitre, mililitre başına 0.1 endotoksin birimi konsantrasyonu ile ikinci bir kalibrasyon standardı hazırlamak.
Daha sonra iki daha düşük kalibrasyon standardı hazırlamak için seri on kat seyreltme tekrarlayın. Mililitre başına 0001 ile bir endotoksin ünitesi arasında değişen toplam dört kalibrasyon standardı elde etmek için. Mililitre kalite kontrolü başına 05 endotoksin birimi hazırlamak için, kontrol standart endotoksin çözeltisinin mililitre başına bir endotoksin ünitesinin 50 mikrolitresini, 950 mikrolitre LAL sınıfı su ile birleştirir.
Yazılımda sonraki araç ayarlarını seçin ve şablonu oluşturun. Veri topla'yı seçin ve genel sekmeye test kimliği ve veri grubunu girin. Donanım sekmesinin altında, enstrüman türünü ve LAL yöntemini seçin ve ekranda bir seri numarası, sistem kimliği ve seri bağlantı noktası bilgilerinin göründüğünü doğrulayın.
Cihaz seçimini ve cihazla iletişimi onaylamak için iki kez tamam'ı tıklatın ve örnek kimliği örneklerin test edeceği sırayla girin. Ardından negatif denetim standart eğrisini girmek ve örnekleri test etmek için varsayılan düğmeleri kullanın. Yinelenen önceden etiketlenmiş cam tüplere uygun negatif kontrol kalibrasyon standartlarını ve kalite kontrolünü ekleyin.
Ve ilk test aşağılık IÇIN LAL uygun hacmi ekleyin. Kısa bir süre aşağılık girdap ve alet atlıkarınca uygun test yuvaları içine şişe yerleştirin. Numuneleri yüklemeden önce, test nano malzemenin gösterildiği gibi maksimum geçerli seyreltme içinde birkaç seyreltme gerçekleştirin.
İnhibisyon geliştirme kontrolü mililitre başına 05 endotoksin birimi hazırlamak için, kontrol standart endotoksin çözeltisinin mililitre başına bir endotoksin biriminin 25 mikrolitrebirleştirmek, belirli bir seyreltme test nano malzemenin 475 mikrolitre ile. Girdap tan sonra, uygun yenilik geliştirme kontrollerini ve çivilenmemiş çalışma örneklerini cihaza yükleyin. Sonra aliquot unspiked ve önceden etiketli tüpler içine belirli bir seyreltme çivili nano malzemeler.
Girdap önce, ve alet atlıkarınca içine yükleme. Bir Jel-Pıhtı LAL gerçekleştirmek için, dört lambda son konsantrasyoniçin kontrol standart endotoksin hazırlamak, ve standart 100 mikrolitre birleştirmek, su 100 mikrolitre ile, ya da test örneği kontrol standart endotoksin iki lambda nihai konsantrasyon elde etmek için. Her lambda seyreltme için Lizin 100 mikrolitre ekleyin.
Girdap tüpler kısaca, ve bir saat için 37 derece santigrat su banyosu içine tüplerin raf yerleştirin. Kuluçka sonunda, tüpleri düzgün bir hareketle ters çevirin ve sonuçları sıkı bir pıhtı için artı kullanarak elle kaydedin ve pıhtı veya gevşek pıhtı için eksi. Bu temsili analizde, PEGylated lipozomal doksorubisin seyreltme beş kromojenik LAL ile müdahale, ancak bu girişim yüksek seyreltme üstesinden gelindi.
Formülasyon bulanıklık ve kromojenik LAL'de 50 ve 500 seyreltmelerde test edildiğinde ve seyreltme beşinde, bulanıklalalırken %50 ile %200 arasındaydı. Seyreltme faktörüne göre ayarlandığında, sonuçlar her iki denemede de sanrılar arasında tutarlıydı. Ayrıca, sonuçlar üç kompozisyon biçimleri arasında tutarlı idi.
Her numunenin kendi seyreltme aralığına sahip olduğunu, her LAL biçiminin doksin ve lysate'de kendi kontrol standardını kullandığını ve seyreltmeleri hazırlamak için kullanılan tüplerin her LAL denemesi için farklı bir reaksiyon gerçekleştirdiğini unutmayın. Bu işlem için malzeme ile ilgili ek soruları cevaplamak için can gibi diğer yöntemler geliştirildikten sonra, bu teknik dikişler ve nano tıp alanında, nano teknoloji insanlarda formüle edilen ilaçların tıbbi uygulamaları keşfetmek için önünü açtı ve dahil ancak insan olmayan primatlar, tavşanlar, köpekler ve sıçanlar ile sınırlı olmamak üzere klinik modeller. Doksin ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve kişisel koruyucu ekipman takmak gibi önlemlerin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
Tags
Biyomühendislik sayı 143 endotoksin nano tanecikleri LAL tahlil girişim spike kurtarma pyrogenicity kirlenmeRelated Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
