Påvisning af Endotoxin i Nano-formuleringer bruger Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Denne metode kan hjælpe med at besvare på det medicinske område om sikkerheden af nanomedicin. Fordelene ved denne teknik er, at det er standard, og bruges over hele verden til evaluering af produkter, Til nano medicin. Demonstration af proceduren, vil blive Barry Neun, på Nano Technology Karakterisering Lab.

Til kalibreringsstandardforberedelse anvendes 900 mikroliter limulus amebocyt lysat eller LAL-vand. Og 100 mikroliter af kontrolstandardenoksin, der skal forberede så mange mellemliggende fortyndinger som nødvendigt for at muliggøre fremstilling af en kalibreringsstandard med en koncentration af en endoksinenhed pr. milliliter. Derefter ved hjælp af 900 mikroliter lal-kvalitet vand, og 100 mikroliter af den ene endoksin enhed pr milliliter kalibrering standard, forberede en anden kalibrering standard, ved en koncentration på 0,1 endotoxin enhed per milliliter.

Gentag derefter den serielle tidobbelte fortynding for at forberede to lavere kalibreringsstandarder. For at opnå i alt fire kalibreringsstandarder, der spænder fra 0001 til en endoksinenhed pr. milliliter. For at forberede en 05 endotoksin enhed pr. milliliter kvalitetskontrol, kombinerer 50 mikroliter af den ene endoksin enhed pr milliliter kontrol standard endoksin opløsning, med 950 mikroliter af LAL grade vand.

Næste i softwaren skal du vælge instrumentindstillingerne, og oprette skabelonen. Vælg Indsamle data, og angiv test-id’et og datagruppen under fanen Generelt. Vælg instrumenttypen og LAL-metoden under fanen Hardware, og kontroller, at der vises et serienummer, system-id’et og de serielle portoplysninger på skærmen.

Klik på okay to gange for at bekræfte instrumentets valg og kommunikationen med instrumentet, og indtast eksempel-id’et i samme rækkefølge, som prøverne vil blive testet. Brug derefter standardknapperne til at angive standardkurven for negativ kontrol og teste prøver. Der tilsættes en passende mængde negative kontrolkalibreringsstandarder og kvalitetskontrol i dublerede formærkede glasrør.

Og tilføje den passende mængde LAL til den første test modbydelige. Vortex den modbydelige kort, og placere hætteglasset i de relevante test slots i instrumentet karrusel. Før prøverne indlæses, udføres der flere fortyndinger af testnanomaterialet inden for den maksimale gyldige fortynding som påvist.

For at forberede en 05 endotoksinenhed pr. milliliter hæmningsforbedringskontrol skal der kombineres 25 mikroliter af den ene endoksinenhed pr. milliliter kontrolstandardenoksinopløsning med 475 mikroliter af testnanomaterialet ved en given fortynding. Efter vortexing indlæses de relevante styringskontroller til innovationsforbedring og de uspikerede undersøgelsesprøver i instrumentet. Derefter aliquot uspiked og de spidse nano materialer på en bestemt fortynding i præmærkede rør.

Før vortexing, og lastning i instrumentet karrusel. For at udføre en Gel-Clot LAL, forberede kontrol standard endoksin til en endelig koncentration af fire lambda, og kombinere 100 mikroliter af standard, med 100 mikroliter vand, eller prøve for at opnå en endelig koncentration af kontrol standard endoksin to lambda. Tilsæt 100 mikroliter lysin til hver lambda fortynding.

Vortex rørene kort, og placere rack af rør i en 37 grader Celsius vandbad i en time. Ved slutningen af inkubationen, invertere rørene med en jævn bevægelse, og manuelt registrere resultaterne ved hjælp af plus for en fast blodprop, og minus for ingen blodprop, eller en løs blodprop. I denne repræsentative analyse forstyrrede PEGylated liposomal doxorubicin krokron LAL ved fortynding fem, men denne interferens blev overvundet ved højere fortyndinger.

Spike opsving var mellem 50 og 200%, når formuleringen blev testet ved fortyndinger 50 og 500 i turbiditet og kromogen LAL, samt ved fortynding fem, i turbiditet LAL. Når justeret af udvanding faktor, resultaterne var konsekvent mellem vrangforestillinger i begge essays. Desuden var resultaterne konsistente mellem de tre essayformater.

Husk, at hver prøve har sit eget sortiment af fortyndinger, hver LAL format bruger sin kontrol standard i doxin og lysate, og at rørene bruges til at forberede fortyndinger, og til at udføre en reaktion på forskellige for hver LAL essay. Til denne procedure andre metoder som Kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål om materiale Efter dens udvikling banede denne teknik vejen for suturer og inden for nanomedicin, for at udforske de medicinske anvendelser af nanoteknologi formulerede lægemidler hos mennesker og kliniske modeller, herunder men ikke begrænset til ikke-menneskelige primater, kaniner, hunde og rotter. Glem ikke, at arbejde med doxin kan være yderst farligt, og de forholdsregler, såsom at bære personlige værnemidler, bør altid tages, mens du udfører denne procedure.