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Une technique d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne pour induire la dépression post-AVC chez les rats
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Summary May 22nd, 2019
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Ici, nous présentons un protocole pour induire la dépression post-AVC chez les rats en occluant l’artère cérébrale moyenne via l’artère carotide interne. Nous utilisons le test de natation forcée Porsolt et le test de préférence de saccharose pour confirmer et évaluer les ambiances dépressives induites.
Transcript
Notre protocole propose une nouvelle technique médiale d’occlusion de l’artère cérébrale chez les rats pour aider à étudier le mécanisme du développement de dépression post-AVC et pour trouver une thérapie plus efficace. Le principal avantage de notre technique est sa capacité à réduire la variabilité des changements de poids, de l’oedème cérébral et du volume infarctus, et à minimiser les décès liés à la procédure. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement de la queue chez un rat Sprague Dawley mâle de 300 à 350 grammes, placez l’animal sur une plaque chauffante de 37 degrés Celsius et utilisez une sonde rectale pour surveiller la température corporelle centrale.
Appliquer de la pommade sur les yeux de l’animal et raser les cheveux du cou. Ensuite, désinfectez la peau exposée avec 70 pour cent de chlorhexidine d’alcool, et couvrez le rat avec le drapé chirurgical stérile avant d’effectuer l’occlusion selon les techniques standard. Pour obtenir le score de gravité neurologique, placez un rat occlus sur une surface plane et laissez l’animal se déplacer librement.
Après une minute, tirez doucement le rat vers l’arrière par la queue et classez la réponse de démarche de l’animal. Pour mesurer le volume infarctus, numérisez les tranches de cerveau tachées préparées à une résolution de 1 600 par 1 600 points par pouce et recadrer et normalisez l’échelle pour toutes les images. Ensuite, chargez les images normalisées dans un logiciel approprié d’analyse d’image et utilisez un outil de traçage pour mesurer la zone de la pâleur marquée en six tranches consécutives de deux millimètres pour déterminer la taille infarctuse en pourcentage de la tranche entière du cerveau.
30 à 33 jours après l’opération, transférez les animaux dans une pièce fermée, calme et contrôlée par la lumière dans des cages individuelles, et placez une bouteille contenant 100 millilitres de solution de saccharose de 1 % dans chaque cage pendant 24 heures. Le lendemain, retirer les bouteilles ainsi que la nourriture et l’eau potable pendant 12 heures. À la fin de la période de privation, placez une bouteille contenant 100 millilitres de solution de saccharose de 1 % et une bouteille contenant 100 millilitres d’eau du robinet dans chaque cage pendant quatre heures.
Ensuite, enregistrez le volume de la solution saccharose et de l’eau consommée pour permettre le calcul de l’affinité avec la préférence saccharose pour chaque animal. Pour le test de natation forcée de Porsolt, 30 à 33 jours après l’opération, placez chaque rat dans un cylindre vertical en plexiglas contenant 80 centimètres d’eau de 25 degrés Celsius pendant 15 minutes. À la fin de la période d’accoutumabilité, laisser sécher le rat pendant 15 minutes dans l’enclos chauffé à 32 degrés Celsius avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine.
Le lendemain, remettre le rat au cylindre pendant cinq dernières minutes, en enregistrant le test de cinq minutes pour permettre le calcul de la durée totale de l’immobilité pendant cette période. L’analyse histologique révèle un volume d’infarctus statistiquement significatif en pourcentage du volume total du cerveau post-MCAO par rapport aux animaux du groupe témoin factice. Un oedème cérébral statistiquement significatif est également observé chez les animaux expérimentaux par rapport au groupe témoin factice.
Les animaux de MCAO démontrent des performances neurologiques inférieures comparées aux animaux simulés à 50 minutes, 24 heures, et sept jours après chirurgie. Les rats MCAO consomment également une quantité significativement plus faible de saccharose et présentent une immobilité plus longue pendant les tests de natation forcée de Porsalt par rapport aux animaux opérés par feinte. Il s’agit d’un modèle important pour les études comportementales sur les accidents vasculaires cérébraux et pourrait servir d’outil pour évaluer les thérapies futures ou fournir des données précliniques critiques sur l’efficacité des substances thérapeutiques.
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