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ラットの脳卒中後うつ病を誘導するための中大脳動脈閉塞技術
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ここでは、内部頚動脈を介して中大脳動脈を閉塞させることによってラットに脳卒中後うつ病を誘導するプロトコールを提示する。私達は誘発された抑うつ気分を確認し、評価するために Porsolt 強制水泳テストおよびスクロースの好みテストを使用する。
Transcript
我々のプロトコルは、脳卒中後うつ病の発症のメカニズムを研究し、より効率的な治療法を見つけるのを助けるためにラットの新しい内側脳動脈閉塞技術を提案する。私たちの技術の主な利点は、体重変化、脳浮腫、梗塞量の変動を減らし、処置関連死を最小限に抑える能力です。オスの300〜350グラムのスプレイグ・ドーリーラットの尾ピンチに対する応答の欠如を確認した後、動物を摂氏37度の加熱プレートに置き、直腸プローブを使用してコア体温を監視します。
動物の目に軟膏を塗布し、首から髪を剃ります。次いで、70%アルコールクロルヘキシジンで露出した皮膚を消毒し、標準的な技術に従って閉塞を行う前に無菌外科用ドレープでラットを覆う。神経学的重症度スコアを得るために、閉塞したラットを平らな表面に置き、動物が自由に動き出すことを可能にする。
1分後、ネズミを尻尾で後ろ向きにそっと引っ張り、動物の歩行反応を等級付けします。梗塞の体積を測定するには、調製された染色された脳スライスを1,600インチの解像度で1,600ドットでスキャンし、トリミングしてすべての画像のスケールを標準化します。次に、標準化された画像を適切な画像解析ソフトウェアプログラムにロードし、トレースツールを使用して、マークされたパーラの面積を6つの連続した2ミリメートルスライスで測定し、梗塞サイズを脳全体のスライス全体の割合として決定します。
手術後30~33日後、動物を個々のケージの中の閉鎖的で静かで軽く制御された部屋に移し、1%スクロース溶液100ミリリットルを含むボトルを各ケージに24時間入れます。翌日、ボトルと飲食水を12時間取り除きます。剥奪期間の終わりに、1%スクロース溶液の100ミリリットルを含むボトル1本と、各ケージに100ミリリットルの水道水を含むボトル1本を4時間置きます。
次に、消費したスクロース溶液と水の体積を記録し、各動物のスクロース好みに対する親和性の計算を可能にする。ポルソルトの強制泳ぎ試験では、手術後30~33日後、摂氏25度の80センチメートルを含む垂直プレキシガラスシリンダーに各ラットを15分間置きます。習慣期の終わりに、ラットが摂氏32度で加熱されたエンクロージャで15分間乾燥してから、動物を自宅のケージに戻します。
翌日、ラットを最後の5分間シリンダーに戻し、5分間のテストを記録して、その期間中の不動の総持続時間を計算できるようにします。組織学的分析は、シャム対照群の動物と比較した場合のMCAO後の総脳容積に対する割合として統計的に有意な梗塞容積を明らかにする。統計的に有意な脳浮腫は、偽の対照群と比較して実験動物でも観察される。
MCAO動物は、手術後50分、24時間、7日間でシャム作動動物と比較して神経学的性能が低い。MCAOラットはまた、スクロースの量が大幅に少なく、ポルトー塩の強制泳ぎ検査中に、シャム操作動物と比較してより長い不動を示す。これは行動性脳卒中研究のための重要なモデルであり、将来の治療法を評価したり、治療物質の有効性に関する重要な前臨床データを提供するためのツールとして役立つ可能性があります。
Tags
行動、課題147、虚血性脳卒中、脳卒中失語症うつ病、ラットモデル、中大脳動脈閉塞、梗塞量、脳浮腫、Porsolt 強制水泳試験、スクロース嗜好試験Related Videos
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