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스나이퍼-Cas9를 사용 하 여 대상에서 감독된 진화를 통해 대상에 활동의 손실 없이 CRISPR Cas9의 영향을 최소화 하
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Using Sniper-Cas9 to Minimize Off-target Effects of CRISPR-Cas9 Without the Loss of On-target Activity Via Directed Evolution
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스나이퍼-Cas9를 사용 하 여 대상에서 감독된 진화를 통해 대상에 활동의 손실 없이 CRISPR Cas9의 영향을 최소화 하

DOI:
10.3791/59202-v

•

11:37 min

•

February 26, 2019

•

, , ,
1ToolGen

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
  • 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
  • 06:17RNP Delivery
  • 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
  • 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
  • 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
  • 10:37Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

여기, 우리 CRISPR-Cas9-대상 활동의 손실 없이 더 높은 특이성을 달성 하기 위해 최적화 하는 프로토콜을 제시. 우리는 원하는 특성을 가진 돌연변이 Cas9를 찾을 수 라고 스나이퍼-화면 감독된 진화 접근을 사용 합니다. 스나이퍼-Cas9와 잘린된 단일 가이드 RNAs는 ribonucleoprotein 형태로 배달 높은 특이성을 달성 하기 위한 잘 알려진 전략 이다.

Tags

CRISPR-Cas9Off-target EffectsDirected EvolutionSniper-Cas9On-target ActivitySpecificityLibrary ScreeningTherapeutic DevelopmentCas9 VariantsY-type Cas9ElectroporationCompetent Cells

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