This content is Free Access.
Chapters
- 00:04Title
- 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
- 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
- 06:17RNP Delivery
- 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
- 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
- 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
- 10:37Conclusion
כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי למטב את CRISPR-Cas9 כדי להשיג הם ברמת פירוט גבוהה ללא אובדן פעילות--היעד. אנו משתמשים בגישה אבולוציה מכוונת נקרא צלף מסך כדי למצוא. את המוטציה Cas9 עם התכונות הרצויות. צלף-Cas9 היא תואמת RNAs יחיד-מדריך קטום ו משלוח בתבנית ribonucleoprotein, ידועים אסטרטגיות להשגת specificities גבוהה יותר.
