Facial Nerve Kirurgi i rat model til undersøgelse axonal hæmning og regenerering

Denne protokol kan hjælpe forskere studere resultater efter facial nerve skade og metoder til at forbedre regenerering på tværs af mange forskellige parametre. Den største fordel ved denne teknik er, at rottens anatomi giver nem adgang til ansigtsnerven, og dens store skala giver os mulighed for at studere alle de relevante skadesmønstre. Anvendelserne af denne teknik strækker sig mod rehabilitering af patienterne efter facial nerveskade.

Som det regenerative potentiale giver rotten en reproducerbar og præcis eksperimentel model. Og denne metode kan give indsigt i kirurgiske og medicinske behandlinger for facial nerve parese eller lammelse. Og det kan oversættes til andre hoved og hals modeller eller andre perifere nerver.

Det kan være en udfordring at arbejde under et mikroskop ved hjælp af begge hænder. Jeg anbefaler at øve ved hjælp af kikkert version under mikroskopet, før du forsøger en facial nerve dissektion. Efter at have bekræftet en manglende reaktion på tå knivspids, anvende salve til øjnene af rotten og barbere det kirurgiske område.

Etablere en metode til rotte identifikation og placere en rulle gaze under halsen. Desinficere den eksponerede hud med tre vekslende chlorhexidin og 70% ethanol scrubs og placere rotten under et stereomikroskop. Manipuler det ipsilaterale øre i en forreste-bageste retning for at bestemme den naturlige foldning af postauricular hud.

Brug en nummer 15 klinge til at gøre en to til tre millimeter snit i postauricular krølle. Planlægningen og placeringen af snittet er de mest kritiske skridt til at sikre pålidelig identifikation af ansigtsnerven og samtidig minimere sårstørrelsen. Afstumpet dissekere gennem den umiddelbare subkutane fascia og placere en mikro-Weitlaner retractor at øge væv eksponering.

Identificer den forreste digastric muskel, da den bevæger sig i en ringere-til-overlegen retning mod sin indsættelse langs kraniet base. Spred forsigtigt gennem muskel maven langs musklen indsættelse punkt at afsløre senen af den forreste digastric mave. Senen vises som en filmisk hvid proces, der stammer fra musklen med en solid indsættelse på kraniet base.

Efter identifikation af den forreste digastric muskel og dens senen, justere Weitlaner retractor yderligere trække muskel mave. Den udsatte region er det tredimensionelle rum, hvor hovedstammen i ansigtsnerven ligger. Dissekere langs nerven i en ringere retning distally fra udgangen af stylomastoid foramen.

For at fremkalde et knusende skadesmønster skal du bruge glatte guldsmedfornækkeres til at gribe og komprimere nerven, der anvender konstant og reproducerbart tryk i 30 sekunder, for at sikre en passende knuseskade. For en simpel transection, forstå den umiddelbare epineurium overliggende nerven med fin-tandede kraftbefængte, og bruge skarpe microscissors til rent transect nerven på det ønskede punkt med et enkelt snit. For en nerve hul model, bruge justerbare calipre at indstille den ønskede nerve nerve hul længde for at sikre lignende skade mønstre mellem dyr og transect nerven som netop påvist.

Efter den eksperimentelle skade er blevet leveret, Overrisle såret med sterilt saltvand og tør vævet med steril gaze. inden huden lukker i henhold til institutionelle retningslinjer. Her, levende billeddannelse af de vigtigste stammen af facial nerve med en crush skade cirka to til tre millimeter distale til grenen punkt af den første PES i en voksen transgen Thy1-GFP rotte er vist.

Vurdering af den gradvise tilbagevenden af fluorescens ved en, to, tre og fire uger efter skaden kan bruges som en markør for overvågning af nerveregenerering hos disse transgene dyr. Histomorphometric analyse kan bruges til at opnå tværsnitsbilleder af den marginale mandibulære division tillader kvantificering af axonal diameter, mængden af snavs, nervefibre, procentdel af nerve, og tæthed målinger. Det er vigtigt ofte at justere placeringen af retractor efter behov for at sikre, at de relevante anatomiske nerver er synlige, når de identificerer ansigtsnerven.

Efter denne procedure de relevante nerver og muskler kan høstes til immunhisemokisk analyse for at vurdere graden af regenerering i forhold til andre forsøgsgrupper. Efter sin udvikling, denne teknik har banet vejen for forskere i at studere de funktionelle resultater efter facial nerve skade. Konkret, hvordan man kan gennemføre fænomenet synkinesis.