Immunology and Infection
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Summary August 7th, 2019
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细针吸入是一种技术,通过这种技术,细胞从病变或器官使用薄针获得。吸气材料在显微镜下进行涂片、染色和检查,用于诊断或用于分子生物学、细胞学或体外分析。它便宜,简单,快速,造成最小的创伤。
Transcript
细针吸气细胞学是一种廉价，简单，快速和微创的技术，我们用它来收集锥形体从活小鼠器官的明显病变。鉴于细针吸气是一种非终端程序，它允许在同一动物中反复采样。如果这些发现可以转化为牛，这种方法对于兽医诊断农场牛的锥虫病非常有用。
证明涂色染色程序将是安娜·玛格丽塔·桑托斯，一个助理技师从我的实验室。首先，用手趾捏法确认麻醉。当腿缩回的反射不存在时，将鼠标放在背侧卧。
小心地触摸睾丸，以确定与覆盖的皮肤的大小和距离，然后在食指和中指之间或食指和拇指之间约束它。要进一步固定目标，请用酒精湿巾将覆盖的皮肤紧紧拉伸并清洁表面。接下来，将连接到 5 毫升注射器的 23 量针的针尖插入目标，确保柱塞处于其余状态。
要吸力，请将注射器柱塞缩回三到四毫米标记两到三次。为了增加获得代表性样本和瞄准较小的结构（如表皮）的概率，请将器官内的针头以直线或沿几个不同的切线重定向。释放吸力，然后抽吸针头。
只有在释放柱塞释放负压后，才能取出针头。否则，吸气被吸进注射器，是无法恢复的。在穿刺场用无菌纱布海绵施加压力，以控制任何出血。
断开注射器与针头的连接，并加注空气。重新连接针头，将针头尖非常接近或甚至放在幻灯片上，然后轻轻地将针头的内容弹出到幻灯片上。为确保复制采样，每个器官和动物至少执行一个额外的吸气。
在盐水中用每公斤1毫克的皮下注射200微升恢复麻醉后，将动物返回家中的笼子进行恢复。使用非主要手，拿起有吸气滴捏拇指和食指之间的磨砂端的幻灯片。使用主导手，拿起一个干净的展开器幻灯片，并放置它平滑干净的边缘，在第二张幻灯片上，只是以大约 30 度的角度在下降的顶部。
为了获得薄膜，请用一个连续稳定的光向前滑动。休息滑梯，使材料完全快速干燥。用铅笔标记幻灯片的磨砂边缘。
对于 Giemsa 染色协议，通过将幻灯片浸入含有 100%甲醇的 Coplin 罐中，修复风干污迹五分钟。然后将幻灯片转移到含有 20% Giemsa 溶液和蒸馏水的科普林罐中 30 分钟。用自来水冲洗滑梯，用纸巾涂抹，彻底干燥。
水平握住滑梯时，在涂抹上涂抹几滴非水性安装介质。将盖玻璃的边缘放在幻灯片上，将其放下并轻轻按压以清除任何气泡。对于免疫细胞化学，在室温下将风干涂片修复为100%甲醇10分钟。
在科普林罐中清洗幻灯片 5 分钟，每次使用新鲜 1X PBS 重复此步骤三次。从 Coplin 罐子中取下幻灯片后，在不接触污迹的情况下擦拭多余的缓冲液，然后用防水笔在涂抹周围画一条线。水平握持幻灯片时，将150微升稀释原抗体溶液涂抹到每个涂片上，并在室温下孵育一小时。
孵育后，用1X PBS在Coplin罐子中清洗幻灯片5分钟，每次使用新鲜1XPBS重复此步骤三次。水平握住滑梯时，将150微升的市售马萝卜过氧化物达布可视化系统涂抹到每个涂抹，然后在室温下孵育30分钟。在 PBS 中再次清洗幻灯片三次，五分钟。
然后通过将幻灯片浸入含有哈里斯赤氧素的科普林罐子中 10 秒钟来对抗。用自来水冲洗干净，用纸擦干。水平握住滑梯时，在涂抹上涂抹几滴非水性安装介质。
将盖玻璃的边缘放在幻灯片上，将其放下并轻轻按压以清除任何气泡。高质量的涂片的特点是具有良好密度和保存的形态特征的单层细胞，从而能够识别其来源组织和彼此之间的相对比例。此外，寄生虫具有有效免疫性、可识别性且可计数。
不良或负细针吸气结果可能是由于材料太少，因此在质量或器官的代表性下。它也可以是由于单张幻灯片上的材料太多，使过于厚的涂抹和损害细胞学评估。所谓的粉碎神器发生，由于太多的力被施加时，使涂片离开中断的细胞，导致大量的裸核和DNA条纹。
当涂片准备过程中没有施加足够的力时，细胞不会分解，导致分层层妨碍对细胞形态特征的评估。将细针吸入细胞病理学与组织病理学、细胞病理学进行比较，具有保存较好的细胞形态学和更好地评估相对比例和细胞计数的优点。与免疫细胞化学，免疫细胞化学更简单、更快、更容易优化。
对于细针吸气，始终确保动物的固定性良好，器官或吸气质量稳定，并协调真空应用和释放。然后对于高品质的涂片，立即扩散后，材料被放置在玻璃上，并温和地施加的强度，使涂片，以避免细胞粉碎的神件。除了常规显微镜和免疫细胞化学，这种材料还可用于电子显微镜、生化分析、流细胞学、分子生物学，甚至用于体外测定。
这项技术使我们能够证明细针吸气可用于诊断和研究实验动物的疾病。我们能够诊断到外部男性生殖器官的锥虫瘤寄生虫的tropism，并在感染过程中对这种疾病进行定性。
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