A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En generalisert metode for å bestemme gratis løselig fenolsyresammensetning og antioksidantkapasitet av korn og belgfrukter
Chapters
Summary June 10th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Fenolsyrer er viktige fytokjemikalier som er tilstede i fullkorn. De har bioaktive egenskaper som antioksidantbeskyttende funksjoner. Dette arbeidet tar sikte på å rapportere om en generalisert metode for HPLC-identifisering, total fenolisk innholdsestimering og bestemmelse av antioksidantkapasiteten til fenolsyrer i korn og belgfrukter.
Transcript
En generalisert metode for å bestemme fri løselig fenolsyresammensetning og antioksidantkapasitet av korn og belgfrukter. Hele korn, inkludert frokostblandinger og belgfrukter, utgjør en betydelig del av menneskelige dietter. Deres ernæringsmessige relevans for mennesker har lenge blitt anerkjent.
Men nylig har deres antioksidant beskyttende helsemessige fordeler blitt rapportert. Fenolsyrer som finnes i de ytre kornlagene av korn og frøbelegget av belgfrukter, bidrar til antioksidantegenskapene til fullkorn. De scavenge frie radikaler som forårsaker oksidativ skade på biomolekyler.
De to klassene av fenolsyrer som finnes i fullkorn er hydroksybenzosyrer og hydroksycinnamic syrer. Denne studien gir en enkel metode for å trekke ut fullkorn fenolsyrer og bestemme deres in vitro antioksidantkapasitet. Bruk fem fullkornsprøver for denne studien, durum hvete, gul mais, svart-øye cowpea bønne, soyabønne og rød nyrebønne.
Vei nøyaktig 100 milligram av fullkornsmelprøven direkte inn i et gulfarget mikrosentrifugerør med to milliliterkapasitet. Den mørke fargen på røret bidrar til å forhindre eksponering av blandingen for lys. Tilsett en milliliter 80% vandig metanol til hvert av rørene som inneholder eksempler.
Virvel kort for å blande metanoloppløsningen og prøven. Soniker prøvene i 60 minutter for å trekke ut de frie løselige fenolforbindelser. Sett et deksel over prøvene så lenge sonikeringen varer, for ekstra beskyttelse mot lys.
Etter sonikering, sentrifuger blandingene ved 20.000 ganger G i fem minutter for å sedimentere de faste rester, slik at supernatanten er på toppen. Frie fenolforbindelser vil være til stede i supernatanten etter sentrifugering. Supernatanten må filtreres før den injiseres i HPLC-instrumentet.
For å filtrere supernatanten, fjern stempelet på en 3 ml sprøyte og fest et sprøytefilter. Filteret skal ha en porestørrelse som ikke er større enn 0,22 mikrometer. Pipette ca. 0,4 milliliter av supernatanten inn i toppen av sprøyten.
Sett stempelet inn igjen og skyv væsken gjennom filteret inn i et HPLC-hetteglass som inneholder en hetteglassinnsats. Når instrumentet er satt opp til å kjøre metoden som er skissert i manuskriptet for HPLC-analyse, laster du hetteglassene inn i karusellen slik at de samsvarer med prøvelisten. Få HPLC-kromatogrammer ved 320 nanometer og 280 nanometer, som viser distinkte topper som representerer forskjellige fenolforbindelser.
Ved hjelp av passende standardkurver kvantifiserer hydroksycinnamic syrer ved 320 nanometer siden de har maksimal absorbans ved denne bølgelengden. Ved samme prinsipp kvantifisere hydroksybenzosyrer ved 280 nanometer. Bruk Trolox, en vannløselig analog av vitamin E, som standard for å estimere in vitro antioksidantkapasiteten til hele kornekstraktene.
Vei nøyaktig ett milligram Trolox inn i et Falcon-rør. Løs opp med fire milliliter 50% vandig metanol for å forberede en lagerløsning på en millimole per liter, som er den samme som 1000 mikromol per liter. Forbered seks konsentrasjoner av Trolox som er 50, 100, 200, 400, 600 og 800 mikromol per liter for å plotte standardkurver for estimering av DPPH radikal scavenging kapasitet og Trolox tilsvarende antioksidant kapasitet, TEAC.
På samme måte, lag 6,25, 12,5, 25 og 50 mikromol per liter Trolox-konsentrasjoner for å estimere oksygenradikale absorbanskapasitet, ORAC. Utgjør det totale volumet av hver konsentrasjon til 500 mikroliter, som vist i tabell én. Fortynn prøveekstraktene med metanol før analyse.
Her ble gul mais og cowpea ekstrakter fortynnet to ganger. Hvete- og nyrebønneekstraktene ble fortynnet fem ganger, mens soyabønneekstraktet ble fortynnet 10 ganger med metanol. Vei 8,23 milligram ABTS inn i en ren, to milliliter kapasitet, gult mikro sentrifugerør.
Deretter veier du 1,62 milligram kaliumpersulfat i en ren, to milliliter kapasitet, gult mikro sentrifugerør. Løs opp hvert av de veide kjemikaliene i en milliliter destillert vann ved virveling. Dette resulterer i en 16 millimolar ABTS-løsning og en seks millimolar kaliumpersulfatoppløsning.
Forbered ABTS-lagerløsningen ved å blande ABTS- og kaliumpersulfatløsningene i like store volumer. Løsningen vil umiddelbart endres til en mørk farge. La denne blandingen inkubere i mørket i 12 til 16 timer.
Fortynn ABTS-lagerløsningen 30 ganger med 200 millimolar fosfatbufret saltvann for å danne ABTS-arbeidsløsningen. For å gjøre dette, tilsett 58 milliliter 200 millimolar PBS til to milliliter av ABTS arbeidsløsning. Arbeidsløsningen vil inneholde 0,27 millimolar ABTS og 0,1 millimolar kaliumpersulfat.
For analysen, plasser 10 mikroliter av hvert fortynnet ekstrakt i en 96 brønnmikroplate. Tilsett 190 mikroliter ABTS arbeidsløsning til hver brønn og inkuber i 60 minutter. Mål absorbansen av reaksjonsblandingene ved 750 nanometer i en mikroplateleser.
Bruk Trolox-standardene i konsentrasjoner fra 100 til 800 mikromol per liter for å plotte en kalibreringskurve. DPPH-antioksidantanalysen krever en radikalgenererende forbindelse, DPPH. Vei ut 1,2 milligram DPPH i et tomt sentrifugerør med 15 milliliter kapasitet.
Løs opp DPPH i metanol for å forberede en 60 mikromolarløsning. DPPH-analysen tester prøveekstraktenes evne til å samle frie radikaler produsert av DPPH. Tilsett fem mikroliter prøveekstrakt i mikroplatebrønnene.
Deretter legger du til 195 mikroliter 60 mikromolar DPPH methanolic løsning og inkuberer i 60 minutter. Mål absorbansen ved 515 nanometer. Bruk Trolox-standardene til å plotte inn en kalibreringskurve.
Figur en viser strukturen av hydroksybenzosyrer som finnes i hele kornene. I denne nåværende studien var vanillsyre den eneste hydroksybenzosyren som ble identifisert. Figur to viser strukturen av hydroksycinnamic syrer som finnes i fullkorn.
I den nåværende studien ble p-coumaric, koffeinsyre og ferulinsyrer identifisert i prøvene. Tabell to viser fenolsyrene som er identifisert i prøvene. Som nevnt tidligere var vanillsyre den eneste hydroksybenzosyren som ble identifisert i prøvene.
Det ble identifisert i cowpea ekstrakt bare. Den hydroksycinnamic acid koffeinsyre ble identifisert bare i nyrebønner, mens p-coumeric acid ble identifisert i gul mais, cowpea og soyabønne. Ferulinsyre ble identifisert i alle prøvene og var den dominerende fenolsyren i prøvene.
Den totale konsentrasjonen av fenolsyrene i rekkefølge fra størst til minst var i rekkefølgen soyabønne, cowpea, gul mais og nyrebønner eller tilsvarende, etterfulgt av hvete. Tabell tre viste det totale fenolinnholdet og antioksidantkapasiteten til prøvene. Antioksidantkapasiteten besto av DPPH radikal scavenging kapasitet, TEAC, ORAC, og total antioksidant kapasitet av prøvene.
Den totale antioksidantkapasiteten er summen av verdiene DPPH, TEAC og ORAC. I likhet med tabell to hadde soyabønner den høyeste totale antioksidantkapasiteten. Men i stedet for cowpea var det ganske nyrebønner som hadde den nest høyeste totale antioksidantkapasiteten, selv om cowpea hadde det nest høyeste totale fenolsyreinnholdet.
Denne anomalien er relatert til strukturene til de enkelte fenolsyrene og den mulige antagonistiske effekten av hydroksybenzosyren vanillsyre på antioksidanteffektene av hydroksycinnamic syrer i cowpea. Denne studien konkluderte med at hele korn varierer i deres fenolsyresammensetninger. Blant de studerte fullkornene har soyabønner den høyeste totale mengden fenolsyrer og tilsvarende den høyeste antioksidantkapasiteten.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
