34,621 Views
•
09:03 min
•
September 25, 2021
DOI:
Mit navn er Dr. Thomas Prevot. Jeg er forsker i Center for Addiction and Mental Health, eller CAMH, og en adjunkt ved University of Toronto i Institut for Psykiatri. Min gruppe har en særlig interesse i at reducere baseline angst og reaktivitet hos mus for at reducere datavariation og forbedre dyrevelfærden.
Mus har vist sig at være uvurderlige aktiver i grundlæggende videnskab og præklinisk forskning, men meget få laboratorier rundt om i verden kontrol for baseline angst og reaktivitet af deres forsøgsdyr, derfor komplicerer replikatori af data mellem laboratorier. En væsentlig medvirkende faktor til baseline angst er ukontrollerede miljømæssige variabler, såsom boligforhold, miljøberigelse, og eksponering for stress. Mens standardisering af boligforhold og berigelse har bidraget til at forbedre dette problem, er eksponering for stress under interaktion med forsøg stadig stort set ubehandlet hos mus.
Halehåndtering, processen med at løfte musen i halen, er stadig musens udbredte musehåndteringsteknik, på trods af at den er særlig stressende. Selv om alternativer til hale håndtering er opstået, herunder tunnel håndtering og kop håndtering. Vedtagelsen af disse teknikker har været langsom.
Her beskriver vi en ny teknik, der ligner kophåndtering, som kan implementeres med så lidt som tre dages tilvænning eller 3D-håndtering. Ved gradvist at øge graden og kompleksiteten af interaktion og skride frem som reaktion på musens reaktivitet til bestemte håndteringsmilepæle, kan vi reducere stress og lette rutinemæssig håndtering. Vi vurderer effekten af 3D-håndtering hos mus i adfærdstest, vurderer angstlignende adfærd, interaktion med eksperimentatorer og perifert stresshormon, kortikosteron, niveauer og giver en sammenligning med tunnelhåndterings- og halehåndteringsteknikker.
Åbn forsigtigt buret og læg låget på siden. Introducer din behandskede hånd til hjemmeburet, før du forsøger at samle musen op. Lad musen vænne sig til tilstedeværelsen af hånden i ca. 30 sekunder.
Forsøg derefter at samle musen op i cupped hænder. Hvis musen ikke let kan afhentes, kop begge hænder sammen og bruge dem til at guide musen til hjørnet af buret. Brug derefter begge hænder til at samle musen op.
Når musen er fjernet fra buret, skal du holde dine hænder så flade og åbne som muligt. Lad musen udforske frit. Dette giver en flad platform, som musen kan træde ind på og begrænser risikoen for at bide.
Hold hånden åben og flad, med håndfladen op. Placer din anden hånd ved siden af musen og lad musen bevæge sig frit fra hånd til hånd uden nogen tilbageholdenhed. Efter et minuts håndtering med flade hænder, slappe af håndfladen, og lidt kop musen i hovedet, før forsigtigt rullende musen mellem hænderne.
Fortsæt i fire minutter, skiftevis mellem blid rulning mellem hænderne og fri udforskning af dine åbne hænder. I løbet af de sidste to minutter skal du udføre en huslystest. Lad musen bevæge sig til kanten af din hånd og bringe de to hænder sammen.
Meget langsomt, kop dine hænder, så musen passer ind i et husly dannet af hænderne. Sørg for at efterlade en åbning, så musen kan undslippe, hvis det er nødvendigt. Prøv at holde musen i ly i fem til 10 sekunder uden nogen tilbageholdenhed.
Gentag beskyttelsesprøven tre til fire gange i løbet af de sidste to minutter. Skynd dig ikke processen. Hvis musen ser stresset ud ved at være indespærret inde i hånden, skal du fortsætte med at rulle mellem hænderne og fri udforskning i 30 sekunder og derefter prøve sheltertesten igen.
Lad gratis udforskning i hænderne i 30 sekunder, og udskift derefter forsigtigt musen i buret. Rengør bænken toppen af enhver afføring og urin med 70% ethanol eller en passende rengøringsopløsning. Rengør handskerne af afføring og urin efter behov, og når du skifter til et nyt bur, skyl handsker med 70% ethanol eller skift handsker.
Ved dag to bør det allerede være muligt at fjerne musen fra buret i cupped hænder. Hvis musen virker reaktiv, skal du udføre den flade hånd og den frie udforskning af åbne hoveder i 30 sekunder til et minut. Ellers skal du gå videre til rullen mellem hænder og husly test.
Udfør rollen mellem hænder og huslystrin fra dag ét i to til tre minutter. Udfør hvert trin flere gange. Hvis musen synes tryg i husly test, forsøge at klappe musen på ryggen og hovedet.
Hvis musen ikke forsøger at flygte kontakt, fortsæt til næsen stikke. Rør forsigtigt ved musen på spidsen af snuden. Hvis det ikke bider eller forsøger at dreje hovedet, er dette et godt tegn på tilvænning.
For petting og næse poke test, skynd dig ikke processen. Hvis musen ser stresset ud ved at være indespærret i hænderne eller ikke ønsker at blive rørt, skal du fortsætte med at rulle mellem hænderne i et par minutter og derefter prøve igen. Stop denne session efter ca. tre minutters håndtering, hvis dyret reagerer godt på huslyet, hoved petting og næsestikke.
Og hvis dyret ser ud til at være villig til at udforske dine hænder uden tegn på stress, såsom forsøg på at flygte, hoppe fra hænderne eller undgå kontakt med hænderne. Hvis musen fortsætter med at udvise tegn på stress eller ikke reagerer godt på husly test eller næse stikke test, fortsætte sessionen, indtil de når fem minutter, som i dag ét. Udskift musen i buret og rengør bænketoppen og handskerne.
På den tredje dag skal du fortsætte gennem de samme trin den dag to. Saml musen op i håndfladen. Overfør musen mellem hænderne.
Begræns forsigtigt musen i cupped hænder. Hvis musen reagerer godt på disse trin, kan du prøve at klappe musen og forsøge næsestikketesten. På den tredje dag skal musen være afslappet nok til at sidde i deres hule hånd uden at bevæge sig væk, og du skal være i stand til at fortsætte gennem disse trin over cirka to til tre minutter.
Udskift musen i buret, og rengør bænketoppen og handskerne. På den tredje dag. Hvis dyret fastholdes til forsøgsformål, såsom oral sonde eller intra-peritoneal injektion, kan musene underkastes nakkekleriktesten.
Tag fat i musen ved nakken, mellem tommel- og pegefingeren, og løft musen fem centimeter over hånden i to til tre sekunder. Dette er normalt en ubehagelig position for voksne mus, og hvis musene forbliver nær immobile, er de godt vant til håndtering og vil være lette at fastholde til injektioner. Placer musen tilbage på din flade hånd og lad den frit udforske i et minut.
Dyr blev testet for deres vilje til frivilligt at interagere med eksperimentatoren og den lette håndtering i en eksperimentel sammenhæng. I studie 1 var mus, der blev håndteret ved enten rørhåndtering eller 3D-håndtering, mindre tilbøjelige til at flygte, når en forsøgsperson forsøger at samle en mus op. Derudover studerede en mus, der håndteres ved hjælp af 3D-teknikken, mere tid i samme kvadrant som eksperimentatorens hånd, hvilket indikerer en øget vilje til at interagere med eksperimentatoren.
I studie to var mus, der blev håndteret ved enten rørhåndtering eller 3D-håndtering, mindre tilbøjelige til at flygte, når en eksperimentator forsøger at samle musen op sammenlignet med mus, der håndteres med halen. I studie to påvirkede håndteringsteknikken imidlertid ikke den tid, der blev brugt i samme kvadrant som eksperimentatorens hånd. Effekten af 3D og tunnelhåndtering blev sammenlignet med halehåndtering i to tests af angstlignende adfærd, den nyhed undertrykte fodringstest og den forhøjede pluslabyrint.
I studie et, i nyhed undertrykt fodring test, var der en tendens til reduceret angst i tunnel håndteres og 3D håndteres mus. I den forhøjede plus labyrint var der ingen samlet effekt af håndtering. Når opsummeret som en Z-score, der var en betydelig reduktion i den samlede angst i tunnel håndteres og 3D håndteres mus i forhold til hale håndteres mus.
I studie to var der ingen samlet effekt af håndtering på angstforanstaltninger i den nyheds undertrykte fodringstest eller den forhøjede pluslabyrint. Når opsummeret som en Z-score, håndtering teknik havde ingen samlet effekt på angst. Som et fysiologisk mål for stress indsamlede vi serum fra håndteret hale, 3D håndteret og tunnel håndteret mus 15 minutter efter en kort håndteringssession og testede kortikosteronniveauer.
Der var ingen samlet effekt af håndtering i studie et. I studie to reducerede 3D-håndtering signifikant kortikosteronniveauer i forhold til halehåndtering. Baseret på observationer af, at håndteringsteknikker hos mus ikke er almindeligt anerkendt af det videnskabelige samfund, beskrev vi brugen af en ny håndteringsteknik.
I begge undersøgelser, der blev præsenteret, reducerede tunnel- og 3D-håndtering forsøg på mus at flygte, når de blev afhentet, hvilket potentielt lettede rutinemæssig håndtering. Derudover reducerede denne teknik angstlignende adfærd og øget interaktion med eksperimentatoren hos ældre mandlige mus. Hos unge kvinder.
denne teknik faldt kortikosteron niveauer observeret som reaktion på håndtering. Implementering af denne teknik har potentiale til at reducere datavariationer, forbedre dyrevelfærden og lette rutinemæssig håndtering.
Dette papir beskriver en håndteringsteknik hos mus, 3D-håndteringsteknikken, som letter rutinemæssig håndtering ved at reducere angstlignende adfærd og præsenterer detaljer om to eksisterende relaterede teknikker (tunnel- og halehåndtering).
Read Article
Cite this Article
Marcotte, M., Bernardo, A., Linga, N., Pérez-Romero, C. A., Guillou, J., Sibille, E., Prevot, T. D. Handling Techniques to Reduce Stress in Mice. J. Vis. Exp. (175), e62593, doi:10.3791/62593 (2021).
Copy