Journal
/
Genetics
/
Påvisning af postreplikation af huller akkumulering og reparation i humane celler ved hjælp af DNA-fiberassayet
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Detection of Post-Replicative Gaps Accumulation and Repair in Human Cells Using the DNA Fiber Assay

Påvisning af postreplikation af huller akkumulering og reparation i humane celler ved hjælp af DNA-fiberassayet

DOI:
10.3791/63448-v

•

10:32 min

•

February 03, 2022

•

, , ,
1Department of Microbiology, Institute of Biomedical Sciences,University of São Paulo, 2Division of Oncology, Department of Internal Medicine,Washington University in St. Louis

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:27S1 Fiber Experimental Setup
  • 03:51DNA Fiber Preparation by Spreading
  • 04:58Immunostaining of DNA Fibers
  • 06:45Image Acquisition and Analysis
  • 08:39Results: Post-Replicative ssDNA Gaps on Ongoing Forks by S1 Fiber Assay and Post-Replicative Repair by Gap Filling
  • 09:42Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Her beskriver vi to modifikationer af DNA-fiberassayet for at undersøge enkeltstrengede DNA-huller i replikerende DNA efter induktion af læsioner. S1-fiberassayet muliggør detektion af postreplikative huller ved hjælp af den ssDNA-specifikke S1-endonuklease, mens gap-filling-analysen muliggør visualisering og kvantificering af gap-reparation.

Tags

DNA Fiber AssayPost-replicative GapsS1 NucleaseDNA RepairReplication StressGenome IntegrityUV-C IrradiationCldU IncorporationCSK PermeabilizationDNA Lesion Detection

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Påvisning af Copy Number Ændringer Brug Single Cell Sequencing

Atomic Force Microscopy Undersøgelser af DNA Lesion Recognition i Nucleotide Excision Repair

Immunfarvning for DNA ændringer: beregningsmæssige analyse af Konfokal billeder

Højeffektive gen afbrydelse af Murine og menneskelige hæmatopoietisk stamceller ved CRISPR/Cas9

En enkel, hurtig og kvantitative analysen til foranstaltning reparation af DNA-protein krydsbindinger på plasmider transfekteret i pattedyrceller

Sjælden begivenhed registrering ved hjælp af fejl-korrigeret DNA og RNA sekventering

Metoder til nøjagtig detektering af mitokondrie-DNA methylering

ATAC-seq Assay med lav mitokondriel DNA forurening fra primære menneskelige CD4 + T-lymfocytter

Kromatin Immunoprecipitation assay ved hjælp af Mikrococcal-nukleaser i pattedyrsceller

Anvendelse af frosset væv i Comet-analysen til vurdering af DNA-skader

Read Article