Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
العلاج التوافقي المضاد للفيروسات القهقرية عن طريق الفم في الفئران المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية -1
Chapters
Summary October 6th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
يصف هذا البروتوكول طريقة جديدة لتوصيل الأدوية المضادة للفيروسات القهقرية عن طريق الفم التي نجحت في قمع تكرار الحمض النووي الريبي لفيروس نقص المناعة البشرية -1 في الفئران المتوافقة مع البشر.
Transcript
يصف هذا البروتوكول طريقة جديدة لتوصيل الأدوية المضادة للفيروسات القهقرية عن طريق الفم ، أو ART ، التي تمنع بنجاح تكرار الحمض النووي الريبي لفيروس نقص المناعة البشرية في الفئران المتوافقة مع البشر. تتفوق طريقة العلاج المضاد للفيروسات القهقرية الفموية الجديدة على محاولات التسليم السابقة بسبب سلامتها وسهولة تحضيرها وإدارتها وتقليل إجهاد الحيوانات الناتج عن الحقن اليومي. ستكون طريقة التوصيل الفموي المقترحة لقمع تكرار الحمض النووي الريبي لفيروس نقص المناعة البشرية في الفئران المتوافقة مع البشر ذات قيمة عالية لدراسات إثبات المفهوم قبل السريرية لتطوير علاجات علاجية جديدة تحاكي عن كثب توصيل الدواء لدى الأفراد المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية المزمن.
ستوضح الإجراء فاليري رزاق ، مديرة المختبر والفنية من مختبرنا. ابدأ بوزن الأدوية الفردية. اصنع 10 أكواب طعام باستخدام cART باستخدام كاشطات الخلايا المعقمة لوزن 250 ملليغرام من FTC ، و 375 ملليغرام من TDF ، و 500 ملليغرام من RAL أو ELV في أنابيب طرد مركزي فردية معقمة سعة 50 ملليلتر في خزانة السلامة الحيوية.
أضف DMSO إلى أنبوب FTC و TDF لتكوين تركيز نهائي قدره 250 ملليغرام لكل ملليلتر ، وفي أنبوب RAL أو ELV إلى تركيز نهائي يبلغ 500 ملليغرام لكل ملليلتر. امزج محلول الدواء عن طريق التحريك والامتصاص حتى يتم الحصول على محلول واضح. تعقيم المحاليل باستخدام مرشح غشاء PVDF محب للماء 0.22 ميكرومتر مع حقنة معقمة.
يمكن تخزين المحاليل الدوائية الفردية عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لمدة 12 أسبوعا. قم بإذابة حصة واحدة من كل محلول دوائي قبل الاستخدام عند 37 درجة مئوية حتى يصبح المحلول واضحا. تخلط جيدا باستخدام ماصة.
الجمع بين الأدوية المذابة في DMSO وتخلط جيدا لتكوين مزيج رئيسي يحتوي على ملليلتر واحد من FTC ، 1.5 ملليلتر من TDF ، ومليلتر واحد من ELV أو RAL. أضف 350 ميكرولتر من محلول cART Master mix في كوب لتحضير كوب واحد من جل الحمية المعزز cART. أضف 0.75 ملليلتر من تريميثوبريم سلفاميثوكسول إلى الكوب.
يقلب جيدا باستخدام أطراف ماصة معقمة سعة ملليلتر. باستخدام طرف ماصة ، قم بتوزيع كوب الطعام الذي يحتوي على cART على طبق بتري 60 ملم. احسب كمية cART في كوب الطعام عن طريق وزن الطعام لكل قفص وفقا لعدد الفئران.
قم بإزالة تشاو العادي من القفص واستبدله بكوب طعام يحتوي على cART. قم بتحديث طعام cART ثلاث مرات في الأسبوع. وزن الأكواب المستخدمة لمراقبة المدخول.
ثم قم بوزن الفئران أسبوعيا لتأكيد الاستهلاك. بعد أربعة أسابيع من الإصابة بفيروس العوز المناعي البشري -1 ، عولجت الفئران لمدة 7.5 أسابيع أخرى ، إما بنظام FTC / TDF / RAL من خلال الحقن تحت الجلد أو عن طريق إعطاء FTC / TDF / RAL عن طريق الفم أو FTC / TDF / ELV. انخفض وزن الفأر باستمرار أثناء الحقن تحت الجلد cART اليومي.
في المقابل، أعاد جل الحمية أوزان الفئران إلى مستويات ما قبل بدء العلاج المضاد للفيروسات القهقرية بعد خمسة أسابيع من إعطاء العلاج المضاد للفيروسات القهقرية عن طريق الفم. بالإضافة إلى ذلك ، لم تلاحظ أي تغييرات كبيرة في الوزن بين مجموعات RAL أو ELV. في غضون أربعة أسابيع ، قمع نظام الغذاء FTC / TDF / ELV و RAL / ART تكاثر الفيروس بنسبة 100٪ و 80٪ على التوالي.
وصلت 70٪ من الفئران التي تلقت حقن SC إلى مستويات لا يمكن اكتشافها بعد أربعة أسابيع من العلاج. أكدت النتائج أن الإعطاء عن طريق الفم قمع تكاثر الفيروس بشكل أسرع وأكثر كفاءة من الحقن تحت الجلد. علاوة على ذلك ، منع نظام الغذاء cART المزيد من الانخفاض في نسب CD4 إلى CD8 في الدم المحيطي في وقت أبكر من الحقن اليومية.
من الأهمية بمكان الحفاظ على عقم أي مادة متضمنة في البروتوكول أثناء العملية برمتها وتجنب التجميد والذوبان المتعدد لمحلول مخزون cART.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
