Inductie- en diverse beoordelingsindicatoren van experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Momenteel is er geen volledige genezing voor multiple sclerose. Ons protocol maakt de effectieve constructie van experimenteel auto-immuun encefalomyelitismodel mogelijk om multiple sclerose ziektetherapieën te helpen verkennen. Het belangrijkste voordeel van ons protocol is een uitgebreidere beoordeling van de behandeling van experimentele auto-immune encefalomyelitis vanuit meerdere perspectieven.

Bereid eerst myeline oligodendrocyte glycoproteïne peptide emulsie voor door het oplossen van gelyofiliseerd peptide en steriel voorgekoelde PBS zonder calcium- en magnesiumionen bij pH 7,4. Voeg een gesteriliseerde stalen bal van vijf millimeter toe aan een schone microcentrifugebuis van twee milliliter. Voeg vervolgens 500 microliter compleet Freuds-adjuvans toe met vijf milligram per milliliter gelyofiliseerde microbacterie tuberculose en 500 microliter van de myeline-oligodendrocytenglycoproteïnepeptide-emulsie aan de buis.

Oscilleer nu de buis op een tissuelyser gedurende 10 minuten. Koel de buizen vervolgens 10 minuten af op ijs. Herhaal het proces vier keer totdat een witte viskeuze oplossing is gevormd.

Verdun vervolgens de kinkhoesttoxinestengeloplossing 50 keer in steriele PBS van pH 7,4 zonder calcium- en magnesiumionen om een eindconcentratie van 200 nanogram per 100 microliter te bereiken. Om alle aanvankelijk bereide myeline oligodendrocyte glycoproteïne peptide-emulsie aan de onderkant van de buis neer te slaan, centrifugeert u de buis gedurende twee tot drie seconden op vier graden Celsius door op de pulsknop op de apparatuur te drukken. Aspirateer de myeline oligodendrocyte glycoproteïne peptide emulsie met een spuit van één milliliter uitgerust met een naald van 22 gauge en breng de emulsie over naar een nieuw spuitvat van 1 milliliter.

Bevestig een naald van 26 gauge aan de loop en bevestig de verbinding met een afdichtingsfilm. Injecteer 100 microliter van de myeline oligodendrocyte glycoproteïne peptide emulsie subcutaan aan elke kant van de dorsale wervelkolom van een muis. Observeer na de injectie de automatische vorming van bolvormige massa’s onder de huid en de dorsum.

Injecteer vervolgens intraperitoneaal 100 microliter kinkhoesttoxine in dezelfde muis. Bereid een reactiekamer in een open veld voor en zet een video-analysesysteem op voor het opnemen van de voortbeweging van de muis. Om de reactiekamer vóór het experiment schoon te maken, spuit u 70% ethanol op het hele gebied en veegt u af met een schone papieren handdoek.

Plaats vervolgens een muis in de hoek van een reactiekamer. Om te beginnen met fotograferen, klikt u op de knop Start Capture in de menubalk van het video-opnamesysteem en neemt u de tijd op. Houd stilte in de testruimte en laat de muis vijf minuten vrij bewegen.

Stop vervolgens de opname en sla de video op. Zet de muis terug in zijn kooi. Reinig vervolgens het testgebied met 70% ethanol en ga verder met de volgende muis.

Houd de geëuthanaseerde muis plat op een ontleedbak en bevestig de ledematen. Houd de huid van de achterpoten in de muis met een tang en open de huid en spieren met een schaar. Scheid vervolgens het dijbeen van het scheenbeen en het heupbot door voorzichtig de schaar te gebruiken.

Verwijder de spieren die zich aan het dijbeen hechten met een schaar. Plaats vervolgens het dijbeen in 70% ethanol bij kamertemperatuur. In deze studie werd het vermogen van myeline oligodendrocyten glycoproteïne afgeleid peptide om EAE te induceren beoordeeld.

Muizen geïnjecteerd met het peptide ervoeren progressief gewichtsverlies. Na zes tot negen dagen injectie ontwikkelden ze EAE-symptomen die na 14 tot 16 dagen piekten. Trackplots uit de open veldtest toonden aan dat EAE het normale verkennende gedrag van muizen verandert.

In vergelijking met normale muizen legden de muizen met EAE significant minder afstand af in de vroege aanvangs-, piek- en remissiefasen. Muizen met EAE hadden ook een significant verminderde activiteitsduur in de piek- en remissiefasen van de ziekte. Bovendien hadden de EAE-muizen in alle drie de fasen aanzienlijk minder reisafstand en tijd doorgebracht in het centrum.

Microcomputed tomografie scans van dijbenen van EAE muizen onthulden een trabeculaire architectuur anders dan normale muizen. Dijbenen van EAE-muizen hadden significant minder botmineraaldichtheid en botvolumevolumeverhouding dan die van normale muizen. Bovendien hadden dijbenen van muizen met EAE minder trabeculaire verbindingsdichtheid, trabeculair aantal en trabeculaire dikte dan die van normale muizen.

In vergelijking met normale muizen werd de trabeculaire afstand verbeterd en werd de corticale botdikte verminderd bij EAE-muizen. We kunnen ook de hersen- en spinale code van EAE-muizen op het hoogtepunt van de ziekte isoleren en de productie van immuuncellen en cytokines analyseren door griepcytometrie.