Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Histologie Basics en celdooddetectie in honingbijenweefsel
Chapters
Summary July 7th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Immunohistochemische methoden zijn nuttig in honingbijenonderzoek om het niveau van apoptose en necrose in de midgut- en hypofaryngeale klieren van volwassen bijen te detecteren en te beoordelen.
Transcript
Dit protocol is nuttig in veel biologische en toxicologische studies van honingbijen behandeld met pesticiden. Het helpt bij het detecteren van de cellulaire reacties van honingbijenweefsel van acariciden die worden gebruikt in bijenkolonies voor de behandeling tegen varroamijten. Het is een krachtig hulpmiddel voor de detectie van sub-little effecten op weefsel in combinatie met gedrag van bijen of andere nuttige insecten.
Neem om te beginnen voorzichtig een werkbij met een tang en zet hem twee minuten op ijs of vriezer bij min 20 graden Celsius om hem te immobiliseren. Pin de bij op de petrischaal diagonaal door het bovenste achterste gedeelte van de thorax twee keer van links naar rechts en van rechts naar links. Slechte insectenzoutoplossing om het lichaam te bedekken.
Plaats de petrischaal onder de stereomicroscoop, stel scherp en pas deze aan. Om het middendarm te ontleden, begint u met de buik door één punt van de schaar onder de tergite A5 in het midden van de rechterkant van het bijenlichaam in te brengen. Gesneden naar de tergootS2. Houd het binnenste mes van de schaar parallel aan de zijkant van het lichaam om te voorkomen dat de inwendige organen worden beschadigd.
Draai de schaar naar links en knip. Open voorzichtig het linkerdeel van de buik en speld het vast. Gebruik een tang met één hand, trek de honingbijenmaag voorzichtig naar boven en snijd met een schaar in de andere hand helemaal aan het einde van de slokdarm.
Trek de maag en het middendarm weg van de buik en snijd in het rectum. Gebruik een pipet met insectenzoutoplossing en verwijder eventuele uitwerpselen of delen van het weefsel. Voor dissectie van hypofaryngeale klieren, immobiliseer een werkbij op ijs zoals eerder beschreven.
Snijd de kop af en plaats deze op een kleinere plaat met de antenne naar boven gericht. Zet het hoofd vast met twee pinnen, een door het linker samengestelde oog en de tweede door het rechter samengestelde oog. Maak een snede over het eerste samengestelde oog aan de binnenkant van de pinnen, ga verder naar het labrum en maak vervolgens nog een snede aan de andere kant over het tweede samengestelde oog.
Knip de antennes af. Til het masker af en knip waar het nog vastzit. Neem de tang en verwijder voorzichtig de klieren samen met de hersenen en een deel van de samengestelde ogen.
Voor hematoxyline- en eosinekleuring, plaats de ontwaste, gerehydrateerde secties gedurende vijf minuten in hematoxyline. Plaats ze vervolgens voorzichtig twee minuten onder stromend kraanwater. Doe ze vervolgens een minuut in gedestilleerd water en gedurende vier minuten in eosine.
Plaats de dia's 96% ethanol gedurende één minuut en vervolgens 2-propanol gedurende twee minuten en ten slotte gedurende twee minuten in het zuiveringsmiddel. Voeg montagemedium en een afdekglas toe en laat ze drogen. Observeer onder een lichtmicroscoop.
Bereid Coplin-potten. Bereid proteïnase-K. Na het ontwasmen en opnieuw ontregelen van de secties, plaatst u de dia's gedurende vijf minuten in PBS.
Plaats de dia's plat in de container en voeg proteïnase-K toe. Was de dia's in gedestilleerd water. Doof in endogene peroxidase bij kamertemperatuur.
Spoel de dia's af met PBS of water. Plaats de dia's plat in de container en breng de equilibratiebuffer gedurende 10 seconden aan bij kamertemperatuur. Voeg na het afvegen van het weefsel het terminale deoxynucleotidyltransferase-enzym toe aan elke sectie en incubeer in een bevochtigde kamer gedurende een uur bij 37 graden Celsius.
Leg vóór de incubatie bevochtigde papieren handdoeken in de lade rond de dia's en bedek ze met plasticfolie. Leg na de incubatie de monsters op het rek en laat ze in de stop-wash buffer. Voeg na het wassen van de dia's in PBS en het afvegen rond de weefsels twee druppels warm anti-digoxigenineperoxidaseconjugaat toe aan de secties en incubeer gedurende 30 minuten in een bevochtigde container.
Na het wassen in PBS, bereid werksterkte-peroxidase substraat voor, bedek de secties met peroxidasesubstraat en bevlek gedurende vijf minuten. Plaats de dia onder de microscoop en bepaal de optimale kleuringstijd. Na het wassen van de dia's in een beitsrek en gedestilleerd water, incubeer de dia's in gedestilleerd water gedurende vijf minuten.
Tegenvlek met hematoxyline gedurende twee minuten. Was de dia's door ze drie minuten onder stromend leidingwater te plaatsen en vervolgens in gedestilleerd water. Monteer de dia's onder glazen afdekslips en montagemedium en laat vlak drogen.
Observeer onder een lichtmicroscoop. Het percentage aangetaste cellen werd berekend met behulp van een lichtmicroscoop. De resultaten gaven aan dat de behandeling met oxaalzuur de cellen in het midgut aanzienlijk beïnvloedde.
Immunostaining toonde positieve rode of bruine reactieproducten in de apoptotische kernen van hypofaryngeale klieren. Positieve reactie product na behandeling met imidacloprid of coumaphos werd bepaald in de meerderheid van de glandulaire cellen. Zorg er bij het opheffen van het masker van de bijenkop voor dat u de delen van de hypofaryngeale klieren niet beschadigt of aftrekt.
Deze techniek detecteert subklinische veranderingen bij bijen en is ook geschikt voor het detecteren van andere milieueffecten op bijen en sommige andere levende organismen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
