Очищающий плазмидной ДНК из бактериальных колоний Использование Qiagen Miniprep Kit

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Плазмиды очистки ДНК из E.coli, является одним из основных техника для молекулярного клонирования. Малый очистки шкале (miniprep) с менее чем 5 мл бактериальной культуры быстрый способ для проверки клона или выделения ДНК, после чего дальнейшее ферментативных реакций (полимеразной цепной реакции и пищеварение энзима ограничения). Здесь мы видеокассету общей процедуры miniprep через QIAprep QIAGEN в 8 Kit Miniprep, с целью введения этого высокоэффективный метод к общему для начинающих методов молекулярной биологии. Вся процедура основана на щелочных лизис клетки кишечной палочки последующей адсорбцией ДНК на кремнезема в присутствии высоких соли. Она состоит из трех этапов: 1) подготовка и очистка бактериальной лизат, 2) адсорбции ДНК на мембраны QIAprep, 3) мытье и элюирования плазмидной ДНК. Все действия выполняются без применения фенол, хлороформ, CsCl, бромистый этидий, и без алкоголя осадков. Обычно это занимает менее 2 часов, чтобы закончить всю процедуру.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics