Purificación del ADN plásmido de las colonias de bacterias Utilizando el kit de Qiagen Miniprep

Biology

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Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

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Abstract

Purificación de ADN plasmídico de E. coli es una técnica básica para la clonación molecular. Depuración a pequeña escala (minipreparación) de menos de 5 ml de cultivo bacteriano es una forma rápida para la verificación de clonar o el aislamiento de ADN, seguida de otras reacciones enzimáticas (reacción en cadena de la polimerasa y digestión por enzimas de restricción). En este sentido, grabados en video los procedimientos generales de minipreparación a través de la QIAprep QIAGEN 8 Kit Miniprep, con el objetivo de la introducción de esta técnica de gran eficacia para los principiantes en general de las técnicas de biología molecular. Todo el procedimiento se basa en la lisis alcalina de células de E. coli seguido por la adsorción del ADN a la sílice en presencia de sal. Se compone de tres pasos: 1) la preparación y la limpieza de un lisado bacteriano, 2) la adsorción de ADN sobre la membrana QIAprep, 3) el lavado y la elución del ADN del plásmido. Todos los pasos se llevan a cabo sin el uso de fenol cloroformo, CsCl, bromuro de etidio, y sin precipitación en alcohol. Por lo general, toma menos de 2 horas para terminar todo el procedimiento.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

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