Qiagen Miniprep 키트를 사용하여 세균의 플라스미드 식민지에서 DNA를 정화

Biology

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Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

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Abstract

E. 대장균에서 플라스미드 DNA 정제는 분자 클로닝을위한 핵심 기술입니다. 세균성 문화 미만 5 ML에서 소규모 정화 (miniprep)는 더 효소 반응 (중합 효소의 연쇄 반응 및 제한 효소 분해)에 의해 다음 클론 확인 또는 DNA의 격리를위한 빠른 방법입니다. 여기, 우리는 분자 생물학 기술에 대한 일반적인 초보자에게 매우 효율적인 기술을 도입을 목표로 QIAGEN의 QIAprep 8 Miniprep 키트를 통해 miniprep의 일반적인 절차를 영상 기록했다. 전체 절차는 높은 소금의 면전에서 이산화 규소에 DNA의 흡착 다음 E. 대장균 세포의 알칼리성 용해에 따라 달라집니다. 1) QIAprep 막, 3) 세정과 플라스미드 DNA의 용출에 DNA의 흡착 세균성 lysate, 2)의 준비 및 삭제 : 그것은 세 단계로 구성되어 있습니다. 모든 단계 페놀, 클로로포름, CsCl, ethidium의 브로마이드의 사용없이 알코올 석출하지 않고 수행됩니다. 그것은 일반적으로 모든 절차를 완료 미만 2 시간 정도 소요됩니다.

Comments

6 Comments

  1. A very helpful and clear demonstration. Thanks!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 9:33 PM
  2. With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary?   Thank you

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 7:26 AM
  3.   Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like:     http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service     http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 4, 2008 - 8:18 AM
  4. By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
    Thank you very much.

    Reply
    Posted by: Soon Keat O.
    July 18, 2009 - 10:51 AM
  5. Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 2, 2010 - 10:40 AM
  6. Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 23, 2010 - 5:02 AM

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