تلطيخ بروتوكولات لجزر البنكرياس الإنسان

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

هذا الفيديو يشرح الإجراءات اللازمة لتوصيف البنكرياس الجزر الإنسان باستخدام الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) والمناعية (IHC). وملطخة أقسام البنكرياس من الرأس والجسم، ومنطقة الذيل من جانب كل من H & E وIHC لتحديد جزيرة تكوين الغدد الصماء (الأنسولين، الجلوكاجون، والبنكرياس ببتيد)، والنسخ الخلية (Ki67)، وتتسرب التهابات (H & E، CD3). يكون موضعيا في المنطقة الكلابي باستخدام IHC للببتيد البنكرياس.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. Staining Protocols for Human Pancreatic Islets. J. Vis. Exp. (63), e4068, doi:10.3791/4068 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

تقديرات لمنطقة جزيرة وأرقام والغدد الصماء في البنكرياس تكوين الخلية البشرية الكبار تختلف من مائة ألف إلى عدة نطاقات الشامل عدة ملايين وبيتا من 500 إلى 1-3 ملغ 1500. مع هذا التباين المعروفة، وقد وضعت لتجهيز قياسي، وتلطيخ الاجراء بحيث حددت بوضوح مناطق البنكرياس والجزر تتميز باستخدام التشريح المرضي الدقيق والفحص immunolocalization.

وصفت إجراءات موحدة لمعالجة البنكرياس الإنسان تعافى من المتبرعين في الجزء 1 من هذه السلسلة. تتم معالجة البنكرياس إلى 3 مناطق رئيسية (رأس والجسم، والذيل)، يليه قطاعات عرضية. وتنقسم مزيد من المقاطع العرضية من رأس البنكرياس، كما هو مبين على أساس الحجم، ومرقمة حسب الترتيب الأبجدي للدلالة على الفروع. هذا التوحيد القياسي يسمح للتحليل كامل المقطعية في المنطقة بما في ذلك منطقة رأس الكلابي الذي يحتوي على الجزر تتكونفي المقام الأول من خلايا البنكرياس ببتيد للمنطقة الذيل.

التقرير الحالي يضم الجزء 2 من هذه السلسلة، ويصف الإجراءات المستخدمة لباجتزاء مسلسل وتوصيف الأنسجة من المقاطع البارافين البنكرياس مع التركيز على خلايا الغدد الصماء جزيرة، والنسخ، وتتسرب تي خلية. ويهدف علم الأمراض من الأقسام البنكرياس لتوصيف كل من إفرازات، ductular، ومكونات الغدد الصماء. يتم تقييم مقصورة الاكسوكرين عن وجود التهاب البنكرياس (النشطة أو المزمنة)، وضمور، والتليف، والدهون، فضلا عن نظام لاصق، وخصوصا في العلاقة مع وجود ورم البنكرياس ينترادوكتال 4. يتم تقييم الجزر لمورفولوجيا والحجم والكثافة، وخلايا الغدد الصماء، والتهاب، والتليف، اميلويد، ووجود خلايا تكرار أو أفكارك باستخدام H & E والبقع IHC.

العنصر الأخير هو موضح في الجزء 2 هو توفير الشريحة الملونالصورة الرقمية والصور الشريحة بأكملها. ويتم تنظيم الشرائح الرقمية على حدة والمنطقة البنكرياس في قاعدة بيانات على الانترنت علم الأمراض إنشاء البنك الحيوي الظاهري. ويجري حاليا توفير إمكانية الوصول إلى هذه المجموعة على الانترنت لأكثر من 200 الأطباء والعلماء المشاركين في البحث السكري من النوع 1. قاعدة البيانات على الانترنت يوفر وسيلة لتبادل البيانات السريع والكامل، وعلى المحققين تحديد كتل لالبارافين أو مقاطع المسلسل المجمدة.

Protocol

1. Microtomy لأقسام غير ملوثين

  1. اقامة الحمام المائي ومشراح كما لmicrotomy البارافين العادي. استخدام الشرائح الموجبة وقبل التسمية مع رقم القضية، منطقة البنكرياس (عينة) ورقم الشريحة. مكان كتلة البارافين في تشاك مشراح مع التسمية كاسيت على الجانب الأيسر.
  2. اتباع الإجراءات microtomy طبيعي، المقطع إلى كتلة حتى مصادفة موحد النسيج. إنتاج الشريط من المقاطع مسلسل (4 ميكرون سميكة و 3-6 اعتمادا على عدد من البقع المطلوبة الأولي (انظر نموذج تقديم القضية، الملحق 1)). أقسام منفصلة في الشريط، والتقاط كل في النظام، ومكان على الشرائح مع النظام معدودة مع قلم رصاص. دلالة على ما إذا كان القسم غير المستخدمة من قبل ترقيم المقاطع في النظام الدقيق. الحفاظ على التوجه نفسه على الشريحة كما هو موجود في كاسيت مع التسمية الشريحة الموجهة إلى اليسار. تجف بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة ثم المضي قدما في تلطيخ أو توزيع للمحققين.
  3. الدقةEAL سطح كتلة البارافين مع طبقة رقيقة من البارافين للحفاظ على الأنسجة والأرشيف في درجة حرارة الغرفة أو -20 درجة مئوية.
  4. لmicrotomy لاحق، والحفاظ على ترقيم مقاطع المسلسل في كل مستوى على النحو الوارد أعلاه. الحصول على 1 شريحة إضافية وصمة عار من قبل شريحة H & E لكل مستوى ~ 100 ميكرومتر داخل كل كتلة.

2. H & E تلطيخ

  1. وضع أول شريحة مقطوع المسلسل من كل كتلة في رفوف الشريحة ثم في الدرج الأول على autostainer.
  2. تحديد معيار H & E برنامج وصمة عار والمضي قدما على النحو المعتاد.
  3. عند الانتهاء من التلوين، وإزالة الشرائح من autostainer ومكان في غطاء محرك السيارة لcoverslipping.
  4. ساترة باستخدام تقنية قياسية. يجف تماما والتسمية مع تسمية المطبوعة (انظر القسم 12).

3. IHC مجموعة المتابعة

  1. حدد البرنامج داكو عن البقع المزدوجة وأرقام المدخلات من الشرائح. إعداد TBST وسترات مخازن، والأجسام المضادة، وغيرها من reagالوالدان وفقا للكميات المحددة (الجدول 1). تحميل علبة الكاشف والشرائح. مبرمجة تناوب نظيفة وخطوط النفايات وفقا لتوصيات الشركة الصانعة.
  2. إذا أداء هذه المقايسات يدويا، وإعداد تقدير الأحجام. احتضان الشرائح في غرفة مرطب لتجنب تجفيف الشرائح في أي خطوة. اتبع نفس الإجراء لكل الكواشف كما هو الحال عندما تستخدم لautostainer.

4. IHC Deparaffinization واسترجاع مستضد

  1. وضع الشرائح في الزيلين لمدة 5 دقائق. أكرر مرة واحدة. لا تسمح الشرائح لتجف في أي مرحلة لاحقة حتى كما هو مبين هذا سيؤدي في الخلفية بشكل مفرط وتلطيخ الفقراء.
  2. نقل الشرائح إلى الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 2 دقيقة. أكرر مرة واحدة.
  3. وضع الشرائح في الطازجة 3٪ O 2 H 2 في الميثانول لمدة 10 دقائق.
  4. تراجع الشرائح في الايثانول 90٪ ومن ثم وضع في الايثانول 90٪ لمدة 3 دقائق.
  5. نقل الشرائح إلى70٪ الايثانول لمدة 1 دقيقة.
  6. شطف الشرائح في دي المتأينة المياه.
  7. سخن باخرة وسترات العازلة في باخرة لمدة 5 دقائق.
  8. إضافة شرائح إلى سيترات عازلة في باخرة والبخار لمدة 30 دقيقة.
  9. نقل على الفور إلى الشرائح المياه وعقد حتى تنزلق بارد إلى درجة حرارة الغرفة (~ 20 دقيقة).
  10. نقل الشرائح على رفوف autostainer داكو وفقا لتسلسل وصمة عار (الشكل 1) وتشغيل البرنامج تلطيخ مزدوجة. يتم سرد الخطوات الرئيسية لبرنامج autostainer بحيث يدير دليل يمكن تكرار.

5. الأجسام المضادة الأولية الأول (كي-67، CD3، البنكرياس ببتيد)

  1. منع الشرائح مع حل قناص لمدة 15 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  2. احتضان الشرائح في الأجسام المضادة الأولية لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  3. احتضان مع Mach2 الماعز المضادة للماوس (كي 67) أو المضادة أرنب-(CD3، البنكرياس ببتيد) حصان الفجل البيروكسيديز (HRP) البوليمر لمدة 30 ساعةinutes. غسل مرتين مع TBST.
  4. تطبق 3،3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) على الشرائح لمدة 4 دقائق. تغسل بالماء مرتين.
  5. ويحتجز الشرائح المحتضنة مع ببتيد البنكرياس على داكو عندما يجري في وقت واحد يعاير وTBST تستخدم لجميع الخطوات اللاحقة في حين يتم تحضين الشرائح المتبقية مع المجموعة الثانية من الأجسام المضادة الأولية. بدلا من ذلك، لفحوصات دليل، انتقل إلى القسم 6.

6. الأجسام المضادة الابتدائية الثانية (الأنسولين، الجلوكاجون)

  1. احتضان الشرائح في ديب لمدة 20 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  2. كتلة مع 10٪ مصل الماعز الطبيعي في مانع أفيدين 20٪ في TBST (الأنسولين) أو القناص (الجلوكاجون) في TBST لمدة 20 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  3. احتضان مع الأنسولين أو الأجسام المضادة الجلوكاجون الأولية لمدة 15 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  4. الأنسولين: الشرائح في احتضان المعقدة البيروكسيديز خنزير غينيا لمكافحة الماعز في 1:300 تخفيف لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST. لقد احتضان مع معيارctor ABC-AP كاشف لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  5. الجلوكاجون: احتضان الشرائح العازلة في خلال مدة 30 دقيقة تليها الماعز الفوسفاتيز القلوية لمكافحة فأر (ا ف ب) البوليمر لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  6. في حين يتم تحضين الشرائح في تقارن، تدفئة العازلة LPR إلى درجة حرارة الغرفة. إضافة 1 قطرة من السائل الأحمر دائم (LPR) لكل العازلة مل 3 فوري قبل الاستعمال ومكان في رف كاشف داكو. احتضان الشرائح في LPC لمدة 4 دقائق. تغسل بالماء مرتين.
  7. احتضان الشرائح في الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة. شطف بالماء مرتين.
  8. احتضان الشرائح في درجة الحموضة 7.6 TBS لمدة 1 دقيقة. شطف بالماء مرتين.
  9. تفريغ الشرائح من Autostainer DAKO.
  10. يذوى فورا الشرائح ملطخة للببتيد البنكرياس. للشرائح كافة ملون مزدوج، جاف لا يقل عن 1 ساعة ثم جفف.

7. جفاف

  1. مكان ينزلق في الايثانول 80٪ لمدة 1 دقيقة.
  2. تراجع الشرائح في الايثانول 95٪. عقد الشرائح في الايثانول 95٪ لمدة 30 ثانية.
  3. نقل الشرائح إلى الإيثانول بنسبة 100٪ والاستمرار على 1 دقيقة. كرر.
  4. تراجع الشرائح في الزايلين.
  5. عقد الشرائح في الزيلين لمدة 1 دقيقة. كرر.
  6. تحميل فورا coverslips على الشرائح باستخدام cytoseal.

8. شريحة وصفها

  1. أدخل المعلومات بما في ذلك تحديد حالة رقم الجهاز وكتلة، وصمة عار، وتاريخ والطباعة. المسلسل رقم القسم هو اختياري للبقع الشريحة الأولى من كل كتلة. وتدل المستويات لاحق من قبل الترقيم.
  2. وضع علامات على الشرائح.

9. الشريحة المسح الضوئي

  1. وضع الشرائح الملون في علبة الماسحة الضوئية وفقا لمسح الأجهزة.
  2. تنظيم الشرائح وفقا لنوع المانحة والنسيج (رأس البنكرياس، الجسم، والذيل، والطحال).
  3. الشرائح الأرشيف الملون في درجة حرارة الغرفة، وأية شرائح المتبقية غير ملوثين في -20 درجة مئوية حتى استخدامها.

10. Representative النتائج

وقد وضعت هذه الإجراءات تلطيخ لشبكة JDRF للمانحين الجهاز البنكرياس مع مرض السكري (nPOD) لتوفير توصيف خط الأساس من البارافين وكتل الطازجة والمجمدة. كل جهة مانحة لديها خصائص أساسية يؤديها تتألف من تلطيخ 2 قطعة من كل منطقة البنكرياس (رأس والجسم والذيل) والطحال (الشكل 1، وانظر أيضا قضية استمارة التقديم، الملحق 1). ويجري في تلطيخ H & E باستخدام autostainer المبرمجة بالنسبة للمنشأة الطبية السريرية مع الصف الحلول المستخدمة في جميع أنحاء. كما كتل إضافية من الجهات المانحة هي مقطوع، لكل منها شريحة المتخذة لH & E لاظهار مورفولوجيا الأنسجة. عندما كتل هي مقطوع مرة أخرى، كما لتوزيعها على المحققين، وسوف يكون أيضا مستويات أعمق الشرائح التي اتخذت لH ممثل والشرائح الإلكترونية لتوثيق مورفولوجيا كتلة بأكمله الأنسجة وكذلك ترقيم المقاطع المسلسل على كل مستوى. وصفت الشرائح ملطخةتحديد الحالة، منطقة البنكرياس، وعدد الكتلة، وصمة عار التاريخ (الشكل 2) وفحصها في علم الأمراض على الانترنت نظام إدارة المعلومات. وتظهر الصور ممثل من إحدى الجهات المانحة تحكم في الشكل (3) في كلا تكبير المنخفضة والعالية لإظهار النتائج المتوقعة بعد هذا الإجراء. وكان يعاير والملون الشريحة مع البنكرياس ببتيد (D، H) في يوم آخر مع فحص بشكل يدوي ويظهر انخفاض كثافة تلطيخ من ملون مباين الهيماتوكسيلين. الاختلافات في تلطيخ كثافة الأجسام المضادة الأولية أو ملون مباين بين المقايسات التي ينبغي تجنبها لا سيما إذا كان استخدام تحليل الصور الشرائح خلاف مع شخص تتطلب تصحيح الألوان لتحقيق مجالات نفس الخلية أو التهم الموجهة إليه.

يجب على كل مختبر نتوقع لتحسين تركيز الأجسام المضادة كما الكثير إلى الكثير اختلاف والكواشف وشروط أخرى يمكن أن تؤثر على شدة تلطيخ والتحديد. مع اكتساب الجرمية جديدأيها السادة، يتم التحقق من صحة إجراءات تلطيخ مع عينات معروفة السيطرة الإيجابية والسلبية لتحقيق نفس الدرجة من الحدة وصمة عار كما هو الحال مع الكواشف السابقة. وتقدم الأضداد إضافية الأمثل في صميم علم الأمراض nPOD في الجدول رقم 2 كمصدر مرجعي واستخدمت لmultilabeling المقايسات المناعي للمتحد البؤر المجهري.

الشكل 1
الشكل 1. داكو شبكة تلطيخ. هذا تخطيطي يصور تحليل روتيني من البنكرياس المانحة nPOD يقوم على autostainer داكو. وتصنف الدول المانحة nPOD مع رقم الهوية المكون من 4 أرقام. وتظهر الشريحة اثنين من الصواني مع الشرائح التي نظمتها وصمة عار. ومن المتوقع أن تكوينات الشريحة بديلة اعتمادا على عدد من الشرائح المانحة. وتشمل الضوابط الإيجابية إدراج المانحة إيجابية معروفة للبقع 2 المزدوجة والطحال من الجهات المانحة لكي 67 و CD3. ضوابط السلبية هي ذات شقين وتشمل اثنين سليقصر من إحدى الجهات المانحة كتلة البنكرياس حضنت مع الغلوبولين المناعي (IG) من الأنواع المضيفة من الأجسام المضادة الأولية والشرائح اثنين من الطحال المانحة لالانسولين والجلوكاجون.

الشكل 2
الشكل 2. ويرد ممثل الشريحة الملون المزدوج. شريحة النهائي نموذجي مع معلمات إنشاء العلامات الشريحة ووضع الأنسجة قبل تنفيذ المسح الضوئي الرقمي.

الشكل (3)
الشكل 3. وكان ممثل H & E والبقع IHC في الفروع البنكرياس. مقاطع من البنكرياس من متبرع البالغات (6096-04 PanHead) الملون وفحص بالاشعة الرقمية يؤديها كما هو موضح في البروتوكول. وقد تم الحصول على الصور باستخدام برنامج ImageScope عرض من الجزء كامل (AD) و من جزيرة (EH). شدة جزيرة المتوقع وصمة عار للأنسولين، الجلوكاجون، والبنكرياس وببتيدولاحظ لأقسام دينار بحريني كما فيصور الفرع دال أن هذه الكتلة رئيس البنكرياس يحتوي على جزء صغير من منطقة الكلابي أو بطني الفص البنكرياس كما تحتوي على جميع الجزر أساسا البنكرياس ببتيد إيجابية الخلايا. نلاحظ أن ملون مباين هيماتوكسيلين في D لوحة فاتح للغاية في حين أن الهيماتوكسيلين ملون مباين في شدة وباء وجيم هي الأمثل. لوحات EH تظهر جزيرة من الفص الظهرية مع التوزيع المتوقع من الخلايا والخلايا β α. يتم العثور على خلايا البنكرياس قليل ببتيد في الجزء السفلي الأيسر من جزيرة (H). A، E-H والتقييم؛ (ب)، F-Ki67 + الأنسولين، C، G-CD3 + الجلوكاجون، D، H-ببتيد البنكرياس. م، 0.2x، EH-12.8x.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

توحيد الإجراءات IHC أمر حاسم بالنسبة لتحليل الصور، وخاصة عندما تستخدم الكمبيوتر المستندة إلى خوارزميات عبر عدد كبير من الشرائح مع مرور الوقت. والإجراء تلطيخ IHC المبينة في هذا التقرير تسمح تحليل مجموعة من العينات للمانحين نظرا لاستخدام autostainer ضمن يوم العمل 8 ساعات ويتم تعديلها من تقرير سابق 5. جعل الصور الشريحة الرقمية كاملة من كل شريحة الملون المتوفرة لnPOD التابعة للمحققين من خلال نظام إلكتروني عبر الإنترنت علم الأمراض. ويمكن للمحققين مراجعة التركيبة السكانية المانحة، والبيانات المختبرية، وغيرها من التاريخ الطبي ذات الصلة جنبا إلى جنب مع شرائح وقادرون على اختيار القطع الأكثر ملائمة لدراستهم (انظر http://www.jdrfnpod.org/online-pathology.php لمزيد من المعلومات) . مثل هذا النظام علم الأمراض على الانترنت بمثابة "البنك الحيوي الظاهري". إنه سيتم تنفيذ مزيد من التحسين لهذا النظام عرجالتسميات الشريحة reby إدراج قانون نقابة المحامين لمتابعة مسلسل أقسام ومستويات كل لبنة مع الهدف النهائي للتعمير 3-D في البنكرياس.

وقد تم اختيار في المقام الأول على إجراءين تلطيخ مزدوج لتحديد جزيرة β خلايا التكوين (الأنسولين) بالتنسيق مع النسخ الخلوية (كي 67) نظرا لأهمية فهم آليات لتجديد خلايا β الكبار في مرض السكري نوع 1 5،6. كما يتم تنفيذ الثانية مقايسة IHC مرتين على أبواب المسلسل إلى أول، وتتميز كل جزيرة لكلا الخلايا β (الأنسولين) والخلايا α التكوين (الجلوكاجون). وبالإضافة إلى ذلك، يتم تحديد وجود الخلايا اللمفية تي (CD3) بالتزامن مع α خلايا تلطيخ لسببين رئيسيين. وقد تم على أساس تي خلية المناعة الذاتية بوساطة في تطور مرض السكري من النوع 1 تقدير بوضوح حتى الآن عن طبيعة وكلاء بدء (والجرثومية الفيروسية، وخلايا التهابية) أو تكوين مزمن التسلل مع بالنتيجهتانت β-الخلية اختلال وظيفي، وزوال ما زال يتعين تحديد (استعرضت في 7،8). الثانية، والجهات المانحة مع داء السكري نوع 1 لديها نقص اتسمت بكثير من خلايا β بحيث مزيج من CD3 والبقع الجلوكاجون يضمن التعرف على الجزر حتى عندما β خلايا فقدان شديد 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

المؤلفان بالشكر عائلات المانحين والمنظمات الحصول على الأعضاء المشاركين في هذا البحث ومونتغومري إيميلي، Pietras روبرت، فو آن، أغاروال ميتالى، وأغاروال روشان للحصول على مساعدة الخبراء التابعة لها. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة أبحاث السكري الأحداث (MC-T.) لدعم الشبكة للمتبرعين بالأعضاء البنكرياس مع مرض السكري.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
30% Hydrogen Peroxide (H2O2) Fisher Scientific H325-500 Endogenous peroxidase blocking
ABC-Alkaline Phosphatase (AP) Vector Laboratories AK-5000 AP conjugate
Antibody Diluent Invitrogen 003218 Primary antibody
Avidin blocker Vector Laboratories SP-2001 Block endogenous biotin
Biotinylated Goat anti-guinea pig Vector Laboratories BA-7000 Secondary antibody
Bluing Reagent Fisher Scientific 7301 Leica autostainer
Citrate buffer, pH 6.0 BioGenex HK086-9K Antigen retrieval
Clarifier 1 Fisher Scientific 7401 Leica autostainer
Cytoseal XYL Fisher Scientific 8312-4 Coverslip mountant
DAB Vector Laboratories SK-4100 HRP chromogen
DEEB Dako S2003 Endogenous AP blocking reagent
Eosin Y Alcoholic Fisher Scientific 71204 Leica autostainer
Ethanols- 100%, 95%, 90%, 70% Fisher Scientific Various Deparaffinization and coverslipping
Hematoxylin Dako S3301 Dako autostainer
Hematoxylin 7211 Fisher Scientific 7211 Leica autostainer
IgG (all host species for primary antibodies) Various Various Negative controls for primaries
Liquid Permanent Red (LPR) Dako K0640 AP chromogen
Mach2 AP Biocare Medical MALP521L Goat anti-Mouse AP conjugate
Mach2 HRP Biocare Medical MHRP520L Goat anti-Mouse HRP conjugate
Mach2 HRP Biocare Medical RHRP520L Goat anti-Mouse HRP conjugate
Methanol Fisher Scientific Various H2O2 diluent
Normal goat serum Vector Laboratories S-1000 IHC blocking reagent
Sniper Biocare Medical BS966M IHC blocking reagent
TBST 20X Thermo Fisher Scientific, Inc. TA-999-TT IHC buffer
Triology 20x Cell Marque 920P-06 Antigen Retrieval
Xylene Fisher Scientific Various Deparaffinization and coverslipping
Table 1. Specific reagents.
Name Company Catalog Number Comments
Paraffin
Amylase Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-46657 Mouse
Amylin Serotec MCA11267 Mouse
Carbonic anhydrase 19.9 Abcam ab15146 Mouse
Caspase-3, cleaved Cell Signaling Technology 9961 Rabbit
CD20 Dako M0755 Mouse
CD3 Dako A0452 Rabbit
CD34 Cell Signaling Technology 3569 Mouse
CD4 Dako M7310 Mouse
CD45 Dako M0754 Mouse
CD68 Dako M0876 Mouse
CD8 Dako M7103 Mouse
Chromogranin A Dako A0430 Rabbit
CK17 Dako M7046 Mouse
CK19 Dako M0772 Mouse
CK7 Dako M7018 Mouse
C-peptide Cell Signaling Technology 4593 Rabbit
Foxp3 e Bioscience 14-4776-80 Rat
Ghrelin Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-10386 Goat
Ghrelin Abcam ab85104 Rabbit
Glucagon Dako A0565 Rabbit
Glucagon Abcam ab10988 Mouse
Glucagon Bachem T-5037 Guinea Pig
Glut-1 Abcam ab40084 Mouse
Glut-2 Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-9117 Rabbit
Insulin Dako A0564 Guinea Pig
Ki-67 Dako M7240 Mouse
Mafa Novus Biological NB400-137A Rabbit
Pancreatic polypeptide Invitrogen 18-0043 Rabbit
Pdx-1 Abcam ab47308 Guinea Pig
Proinsulin Novocastra NCL-proin-1G4 Mouse
Proinsulin Developmental Studies Hybridoma Bank GS-9A8 Mouse
Secretagogin Sigma-Aldrich HPA 006641 Rabbit
Smooth muscle actin Abcam ab5694 Rabbit
Somatostatin Dako A0566 Rabbit
Synaptophysin Dako M0776 Mouse
Fresh Frozen
CD11b Abcam ab6332 Rat
CD11c Serotec AHP1226 Rabbit
CD25 Novus Biological NB 600-564 Mouse
CD94 Abcam ab61874 Mouse
GAD65 Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-130569 Mouse
HLA-ABC Dako M0736 Mouse
Table 2. Primary antibodies.
Name Company Catalog Number Comments
Aperio Scanscope CS Aperio Technologies Digital slide scanner
DAKO Autostainer Plus Dako IHC stains
Label Matrix printing software BioCarta LM7UP57 Slide label software
Leica XL Autostainer Leica Microsystems H&E stains
Premium Coverglass Fisher Scientific 12-548-5J Coverslip
Spectrum Information Manager Aperio Technologies Scanner software
Superfrost Plus slides Fisher Scientific 12-550-15 Positively charged slides
Vegetable steamer Black and Decker Various Antigen retrieval
Zebra TLP 3742 CDWG TLP3742 Slide label printer
Table 3. Specific supplies and equipment.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. In't Veld, P., Marichal, M. Microscopic anatomy of the human islet of Langerhans. Adv. Exp. Med. Biol. 654, 1-19 (2010).
  2. Matveyenko, A. V., Butler, P. C. Relationship between beta-cell mass and diabetes onset. Diabetes Obes. Metab. 10, Suppl . 4. 23-31 (2008).
  3. Saisho, Y. Pancreas volumes in humans from birth to age one hundred taking into account sex, obesity, and presence of type-2 diabetes. Clin. Anat. 20, 933-942 (2007).
  4. Hruban, R. H. Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and classification system for pancreatic duct lesions. Am. J. Surg. Pathol. 25, 579-586 (2001).
  5. Campbell-Thompson, M. Pancreatic adenocarcinoma patients with localised chronic severe pancreatitis show an increased number of single beta cells, without alterations in fractional insulin area. Diabetologia. 52, 262-270 (2009).
  6. Meier, J. Beta-cell replication is the primary mechanism subserving the postnatal expansion of beta-cell mass in humans. Diabetes. 57, 1584-1594 (2008).
  7. Rowe, P. A., Campbell-Thompson, M. L., Schatz, D. A., Atkinson, M. A. The pancreas in human type 1 diabetes. Semin. Immunopathol. 33, 29-43 (2011).
  8. Veld, I. n't, P, Insulitis in human type 1 diabetes: The quest for an elusive lesion. Islets. 3, 131-138 (2011).
  9. van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies. Physiol Rev. 91, 79-118 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics