In Vitro Analyse av PDZ-avhengige CFTR makromolekylær signalveier Komplekser

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Cystisk fibrose transmembrane konduktans regulator (CFTR), en epitelial klorid kanal, har blitt rapportert å samhandle med ulike proteiner og regulere viktige cellulære prosesser; blant dem CFTR PDZ motiv-medierte interaksjoner er godt dokumentert. Denne protokollen beskriver metoder vi utviklet for å montere en PDZ-avhengig CFTR macromolecular signaliserte kompleks

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Wu, Y., Wang, S., Li, C. In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes. J. Vis. Exp. (66), e4091, doi:10.3791/4091 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Cystisk fibrose transmembrane konduktans regulator (CFTR), en klorid kanal ligger hovedsakelig i den apikale membraner i epitelceller, spiller en avgjørende rolle i transepithelial væske homeostase 1-3. CFTR har vært innblandet i to alvorlige sykdommer: cystisk fibrose (CF) 4 og sekretoriske diaré fem. I CF, er syntesen eller funksjonell aktivitet av CFTR Cl-kanalen redusert. Denne lidelsen påvirker ca 1 i 2500 kaukasiere i USA seks. Overdreven CFTR aktivitet har også vært innblandet i tilfeller av toksin-indusert sekretorisk diaré (for eksempel ved koleratoksin og varme stabil E. coli enterotoksin) som stimulerer cAMP eller cGMP produksjon i tarmen 7.

Innsamling av bevismateriale tyder eksistensen av fysiske og funksjonelle samspillet mellom CFTR og et økende antall andre proteiner, inkludert transport, ionekanaler, reseptorer, kinaser, fosfataser, signaling molekyler, og cytoskeletal elementer, og disse interaksjoner mellom CFTR og dets proteiner har vist seg å være kritisk involvert i regulering av CFTR-mediert transepithelial ion transport in vitro og in vivo også 8-19. I denne protokollen, fokuserer vi kun på de metoder som hjelpemiddel i studiet av samspillet mellom CFTR carboxyl terminal hale, som besitter en protein-bindende motiv [referert til som PSD95/Dlg1/ZO-1 (PDZ) motiv], og en gruppe av stillas proteiner, som inneholder en spesifikk binding modul kalt PDZ domener. Så langt har flere forskjellige PDZ stillaset proteiner er rapportert å binde til carboxyl terminal hale av CFTR med ulike slektskap, som NHERF1 og NHERF2 og PDZK1 og PDZK2, Cal (CFTR-assosiert ligand), Shank2, og ta tak 20-27. Den PDZ motiv innenfor CFTR som er anerkjent av PDZ stillaset proteiner er de siste fire aminosyrene på C endestasjonen (dvs. 1477-DTRL-1480 i human CFTR) 20. Interessant,CFTR kan binde mer enn ett PDZ domene av både NHERFs og PDZK1, dog med varierende slektskap 22. Dette multivalency med hensyn til CFTR bindende har vist seg å være av funksjonell betydning, noe som tyder på at PDZ stillaset proteiner kan fremme dannelsen av CFTR macromolecular signalisere komplekser for spesifikke / selektiv og effektiv signalering i cellene 16-18.

Flere biokjemiske analyser har blitt utviklet for å studere CFTR-involverer protein interaksjoner, for eksempel co-immunoprecipitation, pull-down analysen, par-klok bindende analysen, kolorimetrisk par-klok bindende analysen, og macromolecular kompleks montering analysen 16-19,28,29 . Her fokuserer vi på de detaljerte prosedyrene og sammenstille et PDZ motiv-avhengig CFTR-holdig macromolecular kompleks in vitro, som brukes mye av vårt laboratorium for å studere protein-protein eller domene-domene interaksjoner som involverer CFTR 16-19,28,29.

Protocol

1. Uttrykk og rensing av rekombinant tagget Fusion Proteiner i Bakterier

  1. Forsterke definerte regioner i C-haler (de siste 50-100 aminosyrene som inneholder PDZ motivene ved C-terminus) for CFTR, 2 år 2. LPA, MRP2, MRP4, β, og NHERFs (full-lengde eller PDZ1 eller PDZ2 domener ) ved PCR tilnærming.
  2. Klone PCR produktene til pGEX4T-en vektor for GST-fusion proteiner (for eksempel GST-NHERFs, GST-MRP4 CT), pMAL-C2 vektor for MBP-fusion proteiner (som MBP-β 2 AR CT, MBP-CFTR CT ), og pET30 for Hans-S-fusion proteiner (for eksempel Hans-S-CFTR CT, Hans-S-PDZK1).
  3. Forvandle i en protease-mangelfull E. coli stamme (BL21-DE3) for å minimere mulige rekombinant protein degradering.
  4. Grow kulturen natten ved 37 ° C i Luria-Bertani medium (pH 7,0) inneholder passende antibiotika (for eksempel ampicillin eller kanamycin). Fortynn natten kultur på 1:10 og vokse for ytterligere 2 timer ved 37 ° C. Idusere med 0,5 til 1 m M IPTG for de neste 4 timer ved 30 ° C. Pellet cellene ved sentrifugering på 8000 × gi 10 min ved 4 ° C.
  5. Lyse cellene i Sukrose buffer (50 m M Tris-HCl, 8,0 pH, 1 m M EDTA, 1 m M PMSF, og 10% sukrose) som inneholder lysozym (1 mg / ml), 0,2% Triton X-100, og protease hemmere. Bruk 20 ml for cellepelleten stammer fra en L av kultur.
  6. Bland på en roterende shaker i 30 min ved 4 ° C.
  7. Spinn ved 20.000 × g i 30 min ved 4 ° C. Samle den klare supernatanten.
  8. Into the klar supernatant, tilsett 1 mL av følgende harpiks / agarose perler (50% slurry i Sukrose Buffer):
    • Glutation agarose perler for GST fusion proteiner.
    • Talon perler for His-S fusion proteiner.
    • Amylose harpiks for MBP fusjon proteiner.
  9. Bland i 4 t ved 4 ° C på en roterende shaker.
  10. Vask perlene ved resuspending i 1x PBS (15 ml), miksing for 2 min, spinner på 800 × g for 2 min, og forkaster supernatanten. Gjenta dette trinnet for seks ganger.
  11. Eluer protein fra perlene ved hjelp respektive eluering buffer (2 ml eluering buffer per 1 ml av perler).
    • Eluering buffer for GST fusion proteiner: 25 m M Tris-HCl (pH 8,0), 140 m M NaCl, og 20 m M redusert glutation.
    • Eluering buffer for Hans fusjon proteiner: 20 m M Tris-HCl (pH 8,0), 500 m M NaCl, og 200 m M imidazole.
    • Eluering buffer for MBP fusion proteiner: 20 m M Tris-HCl (pH 8,0), 200 m M NaCl, 1 m M EDTA, 1 m M DTT, og 10 m M maltose.
  12. Dialyser de eluted proteinene mot to L av 1x PBS ved 4 ° C (for å unngå mulig protein degradering). Endre PBS hver 4. time for fire ganger. Konsentrer protein ved hjelp av en Centricon filter (10 000 MW cutoff, Millipore) og Store som små alikvoter ved -80 ° C.
  13. Detrøyskatt protein konsentrasjon av Bradford-metoden. Vurdere protein kvalitet av SDS-PAGE bruke BSA som standarder. Dersom integriteten til protein ikke er tilfredsstillende, kan sekundære rensing prosedyrer som gel filtrering eller ionebytting brukes. (F.eks, har vi brukt en G-75 Sepharose kolonnen til ytterligere rense GST-fusion protein).

2. Cellekultur og Cell lysate Forberedelse

  1. Kultur hamsterunge nyre (BHK) celler som stabilt over-ekspress CFTR-WT og CFTR-his10 eller BHK celler som midlertidig over-ekspress Flag-LPA 2-WT eller Flag-LPA 2-ΔSTL, og Madin-Darby canine nyre (MDCK ) celler som stabilt over-ekspress MRP2 i Eagle minimums viktig medium (MEM) inneholder 10% kalvefoster serum og penicillin / streptomycin i isopor kanner ved 37 ° C med 5% CO 2.
  2. Kultur humane embryonale nyre 293 (HEK293) celler som stabilt over-ekspress CFTR-WT og CFTR-his10 i Dulbecco'S modifisert Eagle medium (DMEM) supplert med 10% fosterets bovint serum og penicillin / streptomycin i isopor kanner ved 37 ° C med 5% CO 2.
  3. Lyse cellene i Lysis buffer (PBS - 0,2% Triton-X-100 suppleres med en blanding av proteasehemmere inneholder 1 m M phenylmethylsulphonyl fluor, 1 mikrogram / ​​ml aprotinin, 1 mikrogram / ​​ml leupeptin, 1 mikrogram / ​​ml pepstatin); bruk 500 mL lyse buffer for hver 60-mm petriskål, og 1000 mL lysis buffer for hver 100-mm petriskål.
  4. Rock cellen lysates i 20 min ved 4 ° C, og fjern den uløselige materiale ved sentrifugering på 16 000 × g for 15 min ved 4 ° C. Bestem protein konsentrasjon av Bradford-analysen.

3. In Vitro Montering av et CFTR-holdig makromolekylær Complex (CFTR-PDZK1-MRP4)

  1. Into 200 mL av lysis buffer (PBS - 0,2% Triton-X 100 + proteasehemmere), legge til 20 mikrogram renset GST-MRP4-C terminal50 aa (CT50) fusion protein.
  2. Legg til ulike mengder (0-40 mikrogram) av renset Hans-S-PDZK1 fusion protein.
  3. Bland de to proteinene på en roterende mixer ved 22 ° C i 1-2 timer.
  4. Legg 20 mL glutation perler (50% slurry) i protein blanding, og fortsetter å blande for en annen en t.. Dette trinnet er også referert til som par-messig binding.
  5. I løpet av denne tiden, forberede HEK293 celle lysates at overuttrykker Flag-CFTR (WT) som beskrevet ovenfor i trinn 2).
  6. Vask komplekset to ganger med lysis buffer. Snurr på 800 × g for en min for hver vask og nøye aspirer supernatanten etter hver vask. Vær forsiktig for ikke å suge av perlene i bunnen.
  7. Legg de ovenfor preparerte HEK293 celle lysates til perlene, og forsiktig bland ved 4 ° C i 3 timer (eller over natten).
  8. Vask perlene utstrakt tre ganger med lysis buffer som beskrevet i trinn 3.6).
  9. Eluer proteiner med 30 mL Sample buffer (5 ×): 0,6 M Tris-HCl (pH 6,8), 50% glyserol, 2% SDS, og 0,1% Bromophenol blå; som inneholder 5% β-mercaptoethanol.
  10. Inkuber i 37 ° C vannbad i 10-15 min, og spinn ved 5000 × g for 30 s å felle perlene.
  11. Last inn alle eluatet på 4-15% gel.
  12. Kjør SDS-PAGE for ca 30-40 min.
  13. Transfer protein band til PVDF membran, i 1,5 timer.
  14. Blokker membranen i TBS-Tween inneholder 5% ikke fett melk.
  15. Inkuber membranen med primær antistoff (for eksempel anti-CFTR IgG, R1104) ved 4 ° C, over natten.
  16. Vask membranen med TBS-Tween for 5 min, seks ganger.
  17. Inkuber membranen med sekundær antistoff (som geit anti-mus HRP-konjugert 2 nd antistoff) for 45 min ved 22 ° C.
  18. Vask membranen med TBS-Tween for 5 min, seks ganger.
  19. Visualiser protein bandene via ECL.
  20. Representative data er vist i figur 1.
jove_title "> 4. Representative Resultater

Et eksempel på CFTR-holdig macromolecular signal kompleks som ble samlet in vitro er vist i Figur 1. En macromolecular kompleks ble dannet mellom MRP4 C-terminal 50 aminosyrer (MRP4-CT50), PDZK1, og full-lengde CFTR (Figur 1, nederst). Komplekset formasjonen økte doseavhengig med økende mengder av mellomledd protein, PDZK1 (figur 1, nederst) 18.

Figur 1
Figur 1. En billedlig fremstilling av macromolecular kompleks analyse (øverst). En macromolecular kompleks ble oppdaget in vitro med tre proteiner (GST-MRP4-CT50, Hans-S-PDZK1, og Flag-CFTRwt) i en doseavhengig måte (nederst) 18.

2 AR (ref. 14) CFTR-NHERF2-LPA 2 (ref. 15) CFTR-PDZ proteiner-MRP 2 (ref. 17) CFTR-PDZK1-MRP4 (ref. 16)
Affinity perler Amylose harpiks S-protein agarose Amylose harpiks Glutathione agarose
Renset protein-1 MBP-β 2 AR CT Hans-S-CFTR CT MBP-CFTR CT GST-MRP4 CT
Renset protein-2 GST-NHERF1 GST-NHERF2 GST-PDZ proteiner Hans-S-PDZK1
Renset protein-3 (eller celle lysates) CFTR-WT eller CFTR-his10 (BHK eller hek celle lysates) Flagg-LPA 2-WT eller Flag-LPA 2-ΔSTL (BHK celle lysates) MRP2 (MDCK celle lysates) Renset Flag-CFTR-WT eller CFTR-his10 (eller celle lysates)
Antistoff Anti-CFTR IgG Anti-Flag HRP Anti-MRP2 IgG Anti-Flag HRP

Tabell 1. Oversikt over ulike CFTR-holdige makromolekylær komplekser samlet in vitro.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I denne protokollen viste vi en metode for in vitro montering og påvisning av en CFTR inneholder macromolecular signalisere kompleks med rensede proteiner (eller protein fragmenter) og / eller celle lysates som rapportert tidligere 16-19,29,30. For å oppnå best mulig resultat følgende kritiske punkter under forberedelsen prosessen krever spesiell oppmerksomhet:

  • Det er viktig at pH i eluering buffer bli justert til 8,0 etter at redusert glutation når rense GST-fusion protein som beskrevet i trinn 1). PH kan være så lavt som 3,0 etter tilsetning av redusert glutation. Dersom pH ikke er justert før eluering, effektiviteten av eluering drastisk redusert.
  • Når protein er elueres fra perlene, må de dialyzed gang, ellers kan det rensede proteinet kommer ut av løsningen. Hvis protein dialyse er ikke mulig rett etter eluering prosessen, ikke Eluer protein og la dem med the agarose / perler.
  • Det anbefales sterkt å ikke koke CFTR-holdige makromolekylær komplekse prøver forberedt for Western blotting som CFTR aggregering er et vanlig problem. I stedet bør prøvene være oppvarmet ved 37 ° C i 10-15 min før lagt i gel.
  • For protein kompleks med lav affinitet interaksjon, kan immunoblot bli visualisert ved hjelp SuperSignal West Femto (eller Pico) maksimal følsomhet Substrat (Pierce) for å øke signalet.

Teknikken demonstreres her gir en praktisk og reproduserbar analysen til biokjemisk definere en CFTR-holdig høyere protein kompleks. Det er flere måter å sette sammen in vitro CFTR makromolekylær komplekser som skissert i tabell-1.

  • For å oppnå overbevisende resultater, bør man prøve å sette sammen komplekse i begge veier, dvs., I) CFTR - PDZ stillas protein (s) - den tredje protein, ii) den tredje protein - PDZ stillas protein (s) - CFTR.
  • For å demonstrere PDZ motiv-avhengighet av macromolecular komplekse formasjonen, CFTR-his10 (CFTR-his10 inneholder 10 Hans rester i C-terminal hale, dette proteinet har en intern PDZ motiv og kan ikke binde NHERFs 29), proteiner med deres PDZ motiver mutert eller slettes (slik som β 2 AR-L413A; LPA 2-ΔSTL, etc) kan brukes parallelt i macromolecular komplekse analysen også.
  • I stedet for å bruke hele lysates av celler som også inneholder mange andre komponenter, en kan bruke rensede proteiner (som den tredje protein) på trinn-3.7) (slik som i monteringen av MRP4-PDZK1-CFTR, vi brukte også renset Flagg-CFTR, ref 18).. Dette gir overbevisende resultat av en utelukkende tri-protein kompleks, så det er bare tre rensede proteiner som finnes i hele forsamlingen systemet.

Men påvisning av CFTR macromolecular komplekset in vitro ved hjelp purified proteiner (eller protein fragmenter) eller lysates fra celler som overuttrykker CFTR eller samvirkende proteiner ikke indikere om macromolecular signalering komplekset finnes i celler som endogent uttrykke disse samvirkende proteiner. For å løse dette problemet, kan co-immunoprecipitation utføres for å vurdere de endogene CFTR komplekser i celler som Airway epitelceller 16 og gut epitelceller 17,18. Videre kan massespektrometri analyse og 2-dimensjonal elektroforese 29 utføres for å identifisere ukjente bindende partnere for CFTR. Det er imidlertid utenfor rammen av denne protokollen for å demonstrere disse teknikkene.

I tillegg kan subcellulære lokalisering av å samhandle proteiner in vivo også påvirke molekylære interaksjoner. For eksempel har MRP4 vist å være uttrykt i både apikale og basolateral membraner, mens CFTR er lokalisert primært til den apikale membranen, om de har vært demonstrated å samhandle fysisk og funksjonelt med hverandre via PDZ stillaset protein PDZK1 18. Videre overuttrykte de rekombinante proteiner, som brukes i gjeldende protokoll, kan påvirke deres subcellulære lokalisering og dermed muliggjøre interaksjoner som ellers ikke ville oppstå. Disse muligheten bør også tas i betraktning ved tolkning av data og ekstrapolere funnene.

Selv om den nåværende protokollen fokuserer på prosedyren for å montere PDZ-avhengige CFTR-holdige makromolekylær komplekser, har denne protokollen også potensielle anvendelser i sammenstillingen ikke-CFTR involvert multi-protein kompleks (enten PDZ-avhengige eller uavhengige). Nå nylig, bruker denne macromolecular forsamlingen analysen, har vi vist at en chemokine reseptor CXCR2 fysisk danner et protein kompleks med sitt nedstrøms effektor PLCβ 2 mediert via NHERF1 i nøytrofile, og dette CXCR2 macromolecular komplekset har funksjonellrelevans som forstyrrer de komplekse (via hjelp av en eksogen CXCR2 peptid) signifikant svekkede nøytrofile funksjoner 31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Vårt arbeid har blitt støttet med tilskudd fra American Heart Association (Greater Sørøst Affiliate) Beginning-stipend-i-hjelp 0765185B, den Elsa U. Pardee Foundation forskningsstipend, og Wayne State University egenutført oppstart fond og Cardiovascular Research Institute Isis Initiative prisen. Denne metoden for in vitro CFTR macromolecular kompleks forsamlingen ble opprinnelig utviklet av Dr. AP Naren (University of Tennessee Health Science Center).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
pGEX4T-1 vector GE Healthcare 28-9545-49 formerly Amersham Biosciences
pMAL-C2 vector New England BioLabs
pET30 vector EMD Chemicals 69077-3 formerly Novagen
Glutathione agarose beads BD Biosciences 554780
Amylose resin New England BioLabs E8021S
Talon beads Clontech 635501
reduced glutathione BD Biosciences 554782
imidazole Fisher BP305-50
maltose Fisher BP684-500
S-protein agarose EMD Chemicals 69704-3 formerly Novagen
Anti-Flag HRP Sigma A8592
Anti-CFTR IgG Custom-made R1104 mAb recognizing CFTR epitope at a.a. 722-734
Anti-MRP2 IgG Chemicon International MAB4148 Now a part of Millipore

Table 2. Specific reagents and equipment.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Anderson, M. P. Demonstration that CFTR is a chloride channel by alteration of its anion selectivity. Science. 253, 202-205 (1991).
  2. Bear, C. E. Purification and functional reconstitution of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR. Cell. 68, 809-818 (1992).
  3. Quinton, P. M. Chloride impermeability in cystic fibrosis. Nature. 301, 421-422 (1983).
  4. Cheng, S. H. Defective intracellular transport and processing of CFTR is the molecular basis of most cystic fibrosis. Cell. 63, 827-834 (1990).
  5. Gabriel, S. E., Brigman, K. N., Koller, B. H., Boucher, R. C., Stutts, M. J. Cystic fibrosis heterozygote resistance to cholera toxin in the cystic fibrosis mouse model. Science. 266, 107-109 (1994).
  6. Li, C., Naren, A. P. CFTR chloride channel in the apical compartments: spatiotemporal coupling to its interacting partners. Integr. Biol (Camb). 2, 161-177 (2010).
  7. Chao, A. C. Activation of intestinal CFTR Cl- channel by heat-stable enterotoxin and guanylin via cAMP-dependent protein kinase. Embo. J. 13, 1065-1072 (1994).
  8. Gabriel, S. E., Clarke, L. L., Boucher, R. C., Stutts, M. J. CFTR and outward rectifying chloride channels are distinct proteins with a regulatory relationship. Nature. 363, 263-268 (1993).
  9. McNicholas, C. M. Sensitivity of a renal K+ channel (ROMK2) to the inhibitory sulfonylurea compound glibenclamide is enhanced by coexpression with the ATP-binding cassette transporter cystic fibrosis transmembrane regulator. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 8083-8088 (1996).
  10. Schreiber, R., Nitschke, R., Greger, R., Kunzelmann, K. The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activates aquaporin 3 in airway epithelial cells. J. Biol. Chem. 274, 11811-11816 (1999).
  11. Shumaker, H., Amlal, H., Frizzell, R., Ulrich, C. D. 2nd, Soleimani, M. CFTR drives Na+-nHCO-3 cotransport in pancreatic duct cells: a basis for defective HCO-3 secretion in CF. Am. J. Physiol. 276, 16-25 (1999).
  12. Ahn, W. Regulatory interaction between the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and HCO3- salvage mechanisms in model systems and the mouse pancreatic duct. J. Biol. Chem. 276, 17236-17243 (2001).
  13. Sugita, M., Yue, Y., Foskett, J. K. CFTR Cl- channel and CFTR-associated ATP channel: distinct pores regulated by common gates. Embo. J. 17, 898-908 (1998).
  14. Naren, A. P. Regulation of CFTR chloride channels by syntaxin and Munc18 isoforms. Nature. 390, 302-305 (1997).
  15. Naren, A. P. Syntaxin 1A is expressed in airway epithelial cells, where it modulates CFTR Cl(-) currents. J. Clin. Invest. 105, 377-386 (2000).
  16. Naren, A. P. A macromolecular complex of beta 2 adrenergic receptor, CFTR, and ezrin/radixin/moesin-binding phosphoprotein 50 is regulated by PKA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 342-346 (1073).
  17. Li, C. Lysophosphatidic acid inhibits cholera toxin-induced secretory diarrhea through CFTR-dependent protein interactions. J. Exp. Med. 202, 975-986 (2005).
  18. Li, C. Spatiotemporal coupling of cAMP transporter to CFTR chloride channel function in the gut epithelia. Cell. 131, 940-951 (2007).
  19. Li, C., Schuetz, J. D., Naren, A. P. Tobacco carcinogen NNK transporter MRP2 regulates CFTR function in lung epithelia: implications for lung cancer. Cancer Lett. 292, 246-253 (2010).
  20. Hall, R. A. A C-terminal motif found in the beta2-adrenergic receptor, P2Y1 receptor and cystic fibrosis transmembrane conductance regulator determines binding to the Na+/H+ exchanger regulatory factor family of PDZ proteins. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 8496-8501 (1998).
  21. Short, D. B. An apical PDZ protein anchors the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator to the cytoskeleton. J. Biol. Chem. 273, 19797-19801 (1998).
  22. Wang, S., Yue, H., Derin, R. B., Guggino, W. B., Li, M. Accessory protein facilitated CFTR-CFTR interaction, a molecular mechanism to potentiate the chloride channel activity. Cell. 103, 169-179 (2000).
  23. Sun, F. E3KARP mediates the association of ezrin and protein kinase A with the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in airway cells. J. Biol. Chem. 275, 29539-29546 (2000).
  24. Cheng, J. A Golgi-associated PDZ domain protein modulates cystic fibrosis transmembrane regulator plasma membrane expression. J. Biol. Chem. 277, 3520-3529 (1074).
  25. Scott, R. O., Thelin, W. R., Milgram, S. L. A novel PDZ protein regulates the activity of guanylyl cyclase C, the heat-stable enterotoxin receptor. The Journal of biological chemistry. 277, 22934-22941 (1074).
  26. Lee, J. H. Dynamic regulation of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator by competitive interactions of molecular adaptors. The Journal of biological chemistry. 282, 10414-10422 (2007).
  27. Gee, H. Y., Noh, S. H., Tang, B. L., Kim, K. H., Lee, M. G. Rescue of DeltaF508-CFTR trafficking via a GRASP-dependent unconventional secretion pathway. Cell. 146, 746-760 (2011).
  28. Naren, A. P. Methods for the study of intermolecular and intramolecular interactions regulating CFTR function. Met. Molecul. Med. 70, 175-186 (2002).
  29. Li, C., Roy, K., Dandridge, K., Naren, A. P. Molecular assembly of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in plasma membrane. The Journal of biological chemistry. 279, 24673-24684 (2004).
  30. Li, C., Naren, A. P. Analysis of CFTR Interactome in the Macromolecular Complexes. Met. Molecul. Med. 741, 255-270 (2011).
  31. Wu, Y. A chemokine receptor CXCR2 macromolecular complex regulates neutrophil functions in inflammatory diseases. J. Biol. Chem. (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics