En

Immunology and Infection
 

Summary

Vi har utviklet en

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Andreani, G., Gagnon, D., Lodge, R., Tremblay, M. J., Richard, D. An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells. J. Vis. Exp. (66), e4166, doi:10.3791/4166 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Plasmodium falciparum, den forårsaker agent for den dødeligste formen for malaria, og humant immunsviktvirus type-1 (HIV-1) er blant de viktigste helseproblemene i verden, å være ansvarlig for totalt 4 millioner dødsfall årlig en. På grunn av deres omfattende overlapp i utviklingsland, spesielt Afrika sør for Sahara, co-infeksjoner med malaria og HIV-1 er felles, men samspillet mellom de to sykdommene er dårlig forstått. Epidemiologiske rapporter har antydet at malarial infeksjon forbigående forbedrer HIV-1 replikasjon og øker HIV-1 virusmengde i co-infiserte individer 2,3. Fordi denne viremia forblir høy i flere uker etter behandling med antimalariamidler, kan dette fenomenet har en betydning for sykdomsutvikling og overføring.

De cellulære immunologiske mekanismer bak disse observasjonene har blitt studert bare knapt. De få in vitro studier investigating virkningen av malaria på HIV-1 har vist at eksponering for løselige malarial antigener kan øke HIV-1 infeksjon og reaktivering i immunceller. Men brukt disse studiene helcelle ekstrakter av P. falciparum schizont scene parasitter og perifere mononukleære celler (PBMC), som gjør det vanskelig å tyde hvilke malarial komponent (er) var ansvarlig for de observerte effektene og hva målet vert celler var 4,5. Nyere arbeid har vist at eksponering av umodne monocytt-deriverte dendrittiske celler til malarial pigmentet hemozoin økt sin evne til å overføre HIV-1 til CD4 + T celler 6,7, men at det gikk HIV-1 infeksjon av makrofager 8. For å belyse dette komplekse prosessen, en systematisk analyse av samspillet mellom malariaparasitten og HIV-1 i ulike relevante humane primære celle populasjoner er kritisk behov.

Flere teknikker for å undersøke virkningen av HIV-1 på fagocytose av mikroorganismer og effekten av slike patogener på HIV-1-replikasjon er beskrevet. Vi her presentere en metode for å undersøke effektene av P. falciparum-infiserte erytrocytter på replikering av HIV-1 i humane primære monocytt-deriverte makrofager. Virkningen av Parasitten eksponering på HIV-1 transcriptional / translasjonsforskning hendelser overvåkes ved hjelp av én syklus pseudotyped virus der en luciferase reporter gen har erstattet Env genet, mens effekten på mengden av viruset utgitt av de infiserte makrofager bestemmes ved å måle HIV-1 kapsid protein p24 ved ELISA i celle supernatants.

Protocol

Merk: Forsøk med HIV-1 og Plasmodium falciparum må utføres i riktig biosikkerhetsnivå laboratorier (BSL2 for parasitter, og BSL3 for HIV-1 og co-infeksjoner) og spesielle forholdsregler må tas ved bruk av potensielt infisert menneskeblod.

1. Perifere mononukleære blodceller (PBMC) Rensing (Basert på 8 og 9)

  1. Start med friskt blod fra mennesker fra friske blodgivere (500 ml) ble behandlet med antikoagulantia (heparin, citrate, syre citrat druesukker eller citrat fosfat dekstrose). Bruk endotoxin-free reagenser når rensende og isolere PBMC og hele resten av protokollen.
  2. Desinfiser blodet bag, inkludert rør, med 70% etanol, klippe røret og nøye overføre blod inn en T150 kolbe.
  3. Forbered 16 rør med 15 ml Lymfocytter Separation Medium (Ficoll) per 50 ml konisk rør (sørg for at Ficoll har nådd romtemperatur).Nøye lag 30 ml friskt blod på topp.
  4. Sentrifuger ved 400 xg i 30 min ved 20 ° C med pauser av.
  5. Under sentrifugering, forberede 8 x 50 ml koniske rør med 25 ml romtemperatur Hank Balanced Salt Solution (HBSS) per rør.
  6. Forsiktig overføre skyet cellen ringen i grensesnittet (inneholder PBMC) til 50 ml tube inneholder HBSS (basseng 2 celle ringer per tube). Komplett volumer opp til 50 ml med HBSS.
  7. Sentrifuger ved 150 xg i 15 min ved 20 ° C med pauser på.
  8. Under sentrifugering av overskyet cellen ringen, samle den gule øvre laget fra Ficoll trinnet, basseng plasma for å fylle opp en 50 ml konisk rør. Inaktivere komplettere i plasma ved å varme opp 50 ml tube ved 56 ° C i 30 min og spinne 10 min ved 1800 x g. Hold supernatanten (inneholder fortynnet autolog plasma som kan brukes som medium tillegg på senere trinn).
  9. Fjern forsiktig supernatanten og resuspend cellen pellet fra trinn 1,7 i 25 ml HBSS og basseng 2 pellets per 50 ml tube. Snurr på 300 xg 8 minutter ved 20 ° C.
  10. Fjern supernatanten forsiktig og resuspender de pellets i 10 ml HBSS og basseng i en 50 ml tube.
  11. Ta en delmengde, utføre trypan blå utelukkelse å vurdere dødelighet og deretter telle PBMC.
  12. Komplett volum til 50 ml med HBSS og spin 10 min ved 300 x g.. Fjern supernatanten og resuspender cellene i RPMI 1640 på 5x10 6 celler / ml (en bør få rundt 400-500 x 10 6 PBMC fra 500 ml blod).

2. Monocytter-Avledet Makrofager (MDM) Differensiering (Basert på 8 og 9)

  1. Seed ca 1,25 x 10 8 PBMC i 15 cm retter med RPMI 1640 (25 ml / fat).
  2. La cellene holder seg i 1-2 timer ved 37 ° C med 5% CO 2 atmosfæren.
  3. Overfør ikke-fulgt celler i en ny flaske og vask plate med 15 ml endotoxin-free PBS to ganger (femmin, 300 xg). De følges cellene er isolerte monocytter.
  4. Hvis du vil tillate fersk isolert monocytter differensieres til MDM, tilsett 20 ml RPMI 1640 medium supplert med 5% autolog plasma (fra trinn 1,8). Legg menneskelige rekombinant macrophage koloni-stimulerende faktor (M-CSF, 25 ng / ml) og Penicillin / Streptomycin løsning (PS, 100 U / ml Penicillin, 100 mikrogram / ml Streptomycin). Inkuber i 2 dager, endre medium og inkuber 2-3 ekstra dager ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  5. Fjern gammel medium og vask med endotoksin-free PBS gang, tilsett PBS forsiktig og aspirer umiddelbart. For å demontere fullt differensiert MDM, behandle celler med ~ 7 ml Accutase (Accutase, en kommersielt tilgjengelig blanding av proteaser og collagenolytic aktivitet som gjør at avløsning av celler fra plasten rett) for 15-20 min ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfære, rocke forsiktig på midten av gangen.
  6. Legg 3-5 ml autolog plasma (fra trinn 1,8) i hver plate (for å beskytte cellene mensskraping).
  7. Forsiktig skrape celler som gjør at mediet dekker cellene til alle tider og overføring / basseng i en 50 ml tube.
  8. Skyll plater med endotoksin-free PBS å gjenopprette så mange celler som mulig.
  9. Spinn 5 min ved 200 xg, kast supernatanten.
  10. Resuspender pellet i 5 ml MDM kultur medium (RPMI 1640 supplert med 10% komplement-inaktivert fostermedisin Bovine Serum (iFBS), PS, 25 mm HEPES) og telle celler (MDM gi vanligvis 2-8% av total PBMC). Merk: en delmengde av MDM kan bli tatt i dette trinnet for å vurdere celle befolkningen renhet ved flowcytometri, vanligvis 99% av oppnådd MDM uttrykte CD14.
  11. Seed 1x10 5 MDM i 600 mL av MDM kultur medium per brønn i 24-brønns plater.
  12. Inkuber over natten ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren før infeksjoner.

3. Produksjon og Kvantitering av HIV-1 Viral Aksjer

  1. Produser viral aksjer med kalsiumfosfat transfeksjon i HEK293T celler Follovinge protokollen fra Fortin et al. ti.
  2. For å få én syklus virus som inneholder luciferase-koding reporter genet, co-transfektere HEK293T celler med enten 20 mikrogram NL4.3 Luc + konv - R + og 10 mikrogram pHCMV-G, eller 15 mikrogram NL4.3 Luc + konv - R + og 15 mikrogram pJRFL env. Bruk 30 mikrogram NL4.3 Luc + konv - R + å generere kontroll glykoprotein-mangelfull virus. For fullt replicative viruset, bruker 30 mikrogram NL4.3Bal env. Vektorene pHCMV-G og pJRFL ENV kode konvoluttspesifikasjonene glykoproteiner av vesikulær stomatitt virus (VSV-G) og av en CXCR5-tropisk HIV-1 (forskjellig enn NL4.3Bal ENV), henholdsvis. Ytterligere informasjon om plasmider kan fås fra 8. Plasmider kan fås gjennom NIH AIDS Research and Reference Program (NIAID, NIH).
  3. Kvantifisere alle virale bestandene som bruker ELISA for HIV-1 p24 kapsid protein 11, Og bekrefte sin smittende potensial før bruk. Vi vurdere smittsomhet våre virus aksjer gjennom bruk av TZM-BL indikator celler 12.

4. Kultur av Plasmodium falciparum Parasitter (Basert på 13)

4.1 Generelt kultur og vedlikehold av parasitter

  1. Opprettholde P. falciparum 3D7 aseksuelle sceniske parasitter i humane erytrocytter (blodtype O +) på en 4% hematokritt i RPMI 1640 (bufret med 25 mm HEPES og 25 mm NaHCO 3) supplert med 0,5% (w / v) Albumax II, 25 mikrogram / ​​ml Gentamicin og 370μM hypoxantin ved 37 ° C i en gassblanding av 1% oksygen / 5% karbondioksid i nitrogen.
  2. Parasitemia kan overvåkes ved å lage en tynn smear av kulturen og flekker med en 15% Giemsa løsning.
  3. Alltid opprettholde en frisk røde blodceller (uRBC) kultur parabol i de samme vilkår som parasitter å bruke som en kontroll.
    For å oppnå sent stadium parasites (trophozoites / tidlig schizonter), synkronisere parasitter som følger:

4,2 Parasite synkronisering

  1. I morgen, høste parasitten kulturen, spin 5 min ved 300 xg og kast supernatanten.
  2. Resuspender pellet i 5 celletettheten volumer med 5% (w / v) D-Sorbitol og inkuber 5 min ved 37 ° C.
  3. Spinn 5 min ved 300 x g, kast supernatanten, resuspender pellet i 30 ml kultur medium og satt tilbake i kuvøse.
  4. Omtrent 8 timer senere, gjentar du trinn 4.2.1 til 4.2.3 for å få tett synkroniserte parasitter. Sent stadium parasitter (trophozoites / tidlig schizonter) kan da høstes neste morgen for å utføre eksperimentet. Før rensing, utføre Giemsa flekker å bekrefte livssyklus scenen.

4.3 Plasmodium falciparum-infiserte røde blodceller (iRBC) rensing

  1. Steriliser VarioMacs separator (stativ og magnet) med 70% etanol og pblonder den under den biologiske panseret.
  2. Fest tre-veis stoppekran til CS kolonne bunn.
  3. Skjær enden av nålen plastbeskyttelsen med Miltenyi spesielle kutter og fest nål til vannkranen bunnen.
  4. Lås kolonne i magneten nøye.
  5. Fjern alle luftbobler i kolonnen ved sakte å injisere 10 ml av MDM kultur medium med kit-vedlagte sprøyte skrudd på venstre side av stoppekranen.
  6. Vask kolonnen med ~ 20 ml MDM kultur medium.
  7. Høste RBC fra kultur plate, vask straks med 10 ml MDM medium (300 xg, 5 min) og resuspender den RBC pellet i 12 ml MDM kultur medium. Sakte legger til kolonne og la suspensjonen flyte gjennom (bare smittet røde blodlegemene som inneholder parasitter i trophozoite eller schizont scenen vil bli beholdt av det magnetiske feltet på grunn av tilstedeværelsen av hemozoin krystaller).
  8. Vask straks med 20 ml medium og stoppe væskestrøm når den når den hvite platen på toppen av kolonnen.
  9. Fjern kolonne fra magneten og Eluer iRBC i et rent sterilt rør med 12 ml MDM kultur medium.
  10. Smør en delmengde av gjenvunnet iRBC og utføre Giemsa flekker å bekrefte livssyklus scenen.
  11. Telle gjenopprettet iRBC bruke en haemocytometer (isolert RBC er 100% iRBC).
  12. Pellet celler (300 xg, 5 min), kast supernatanten og behandle celler med 500 mL frisk AB + humant serum (opsonisation trinn 14).
  13. Inkuber i 30 min ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  14. Vask straks med 10 ml MDM kultur medium (300 x g, 5 min), og resuspender iRBC til ønsket konsentrasjon. Vanligvis gir 10% parasitemia 15 cm kultur fatet omtrent ~ 0,5-1x10 8 tett synkronisert iRBC.

5. Eksponering av MDM til Plasmodium falciparum

  1. Å eksponere MDM til uRBC eller iRBC, må celler resuspendert i MDM kultur medium for å få en andel av uRBC / iRBC: MDM av 75:1. I tidligerepreparerte 24-brønns plater som inneholder MDM, legge passende RBC suspensjon volum til hver brønn. Utfør alle eksperimenter i tre eksemplarer.
  2. Inkuber co-kulturer for 4 timer ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  3. Vask cellene med 600 mL av endotoksin-frie PBS 3 ganger, tilsett PBS forsiktig og aspirer umiddelbart.
  4. Til Lyse gjenværende RBC, vaske brønnene ved å legge 200 mL av iskaldt sterilt vann til 20 sek og aspirer.
  5. Legg 600 mL MDM kultur medium og inkuber 24 timer ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.

6. Infeksjon av MDM med et fullt Replicative HIV-1

  1. For å vurdere effekten av P. falciparum på HIV-1 replikasjon i MDM, legger, ifølge ordningen skissert i figur 1A, 10 ng av p24 (i 300 mL av MDM media) av NL4.3Bal konv virus i den aktuelle brønnene, legg bare MDM medium i kontroll brønner .
  2. Inkuber 2 hr ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  3. Vask cellene med endotoksin-free PBS 3 ganger, tilsett PBS forsiktig og aspirer umiddelbart. Legg 600 mL av fersk MDM medium per brønn.
  4. Inkuber ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  5. På dager 3, 6, 9 og 12 etter starten av virusinfeksjon, innhøsting 200 mL av hver supernatant, legger 200 mL av fersk MDM medium etterpå. Hold høstes supernatants ved -20 ° C for kvantifisering av de store HIV-1 kapsid p24 protein ved ELISA følge Fortin et al. Ti.

7. Infeksjon av MDM med én syklus Virus Encoding luciferase

  1. For å bestemme parasitten innvirkning på HIV-1 genuttrykk i MDM, legger, ifølge ordningen skissert i figur 1B, 10 ng p24 (i 300 mL av MDM medium) av enten NL4.3 Luc + konv - R + ( VSV-G), NL4.3 Luc + konv - R + (JRFL ENV) eller NL4.3 Luc +Konv - R + virus i de tilsvarende brønner.
  2. Inkuber 2 hr ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  3. Vask cellene med 600 mL av endotoksin-frie PBS 3 ganger, tilsett PBS forsiktig og aspirer umiddelbart. Legg 600 mL av fersk MDM medium per brønn.
  4. Inkuber ved 37 ° C i 5% CO 2 atmosfæren.
  5. Fjern mediet 72 timer etter infeksjonen, og legge til 200 mL av lysis buffer 1X (følger med luciferase analysen kit). La cellene lyse ved romtemperatur med forsiktig risting. Oppbevar ved -20 ° C.
  6. Tine platen og overføre 40 mL av lysate til en 96-brønns luminometer plate; tilsett 100 mL av luciferase substrat (følger med luciferase assay kit) og måle luciferase (Firefly luciferase) aktivitet i en luminometer følge produsentens instruksjoner.

8. Representative Resultater

Ved hjelp av vår co-infeksjon modell, viser vi at exposure av P. falciparum til MDM synker deres mottakelighet for HIV-1 infeksjon. Faktisk, en betydelig nedgang (p <0,05; 2-veis ANOVA, dag 12) i ​​utgivelsen av viruspartikler, målt ved HIV-1 p24 kapsid protein i supernatanten, er observert i MDM forbehandlet med parasitter (figur 2a). Denne observasjonen bekreftes i celler infisert av virus koder for en luciferase-reporter genet. MDM infeksjon med slike virus huser enten eksogene VSV-G eller HIV-1 glykoproteiner fører til signifikant (p <0,05, Student t-test) mindre luciferase produksjon i cellene eksponert for P. falciparum (figur 2B). Det er bemerkelsesverdig at VSV-G-pseudotyped virus ga mye større luciferase aktivitet enn sine JRFLenv kolleger, dette skyldes økt smitte effektiviteten av VSV-G pseudotyped partikler 15. Gitt at parasitten utstilling til MDM virkninger begge typer virus, tyder dette på at det påvirker noen skritt i viral genet expression (figur 2B). Det er også viktig å nevne at celleviabilitet ble ikke påvirket av MDM utstilling til iRBC (data ikke vist), som indikerer at hemming observert er spesifikk og ikke skyldes celle dødelighet.

Figur 1
Figur 1. A) Plate ordning for MDM infeksjon med en fullt replicative virus Mock:. Friske celler. uRBC: celler eksponert for friske røde blodceller. iRBC: celler eksponert for Plasmodium falciparum-infiserte røde blodceller. Bal: celler infisert med NL4.3Bal ENV Bal / uRBC:. Celler eksponert for uRBC og infisert med NL4.3Bal ENV Bal / iRBC:.. Cellene eksponert for iRBC og infiserte med NL4.3Bal ENV B) Plate ordning for MDM infeksjon med én syklus luciferase-koding virus Mock:. friske celler. uRBC: celler eksponert for friske røde blodceller. iRBC: celler eksponert for Plasmodium falciparum-infected røde blodceller. Δenv: celler infisert med NL4.3 Luc + konv - R + JRFL:. Celler infisert med NL4.3 Luc + konv - R + (JRFL ENV). VSV-g: celler infisert med NL4.3 Luc + konv - R + (VSV-g) Δenv / uRBC:.. cellene eksponert for uRBC og infisert med NL4.3 Luc + konv-R + Δenv / iRBC: celler utsatt for iRBC og infisert med NL4.3 Luc + konv - R + JRFL / uRBC: celler eksponert for uRBC og infisert med NL4.3 Luc + konv - R + (JRFL ENV).. JRFL / iRBC: celler eksponert for iRBC og infisert med NL4.3 Luc + konv - R + (JRFL ENV). vsv-g/uRBC: celler eksponert for uRBC og infisert med NL4.3 Luc + konv - R + (VSV-g) vsv-g/iRBC:. celler eksponert for iRBC og infisert med NL4.3 Luc + konv - R + (VSV-g).

Figur 2 Figur 2. . A) Effekt av Plasmodium falciparum på HIV-1 viral produksjon i MDM MDM ble utsatt for uRBC eller iRBC i forholdet 75:1 (uRBC / iRBC: MDM) for 4 hr og mye vasket. Celler ble infisert med 10ng av NL4.3Bal env p24 for 2 timer. Viral produksjonen ble overvåket av ELISA for HIV-1 p24 i celle-free supernatanten ved ulike tidspunkt etter innledende virusinfeksjon. En representant eksperiment vises B) Effekt av Plasmodium falciparum på HIV-1 viral transkripsjon i MDM MDM ble smittet med uRBC eller iRBC i forholdet 75:1 (uRBC / iRBC:.. MDM). Celler ble deretter smittet med 10ng av p24 av én syklus virus (enten NL4.3 Luc + konv - R +, NL4.3 Luc + konv - R + (JRFL ENV) eller NL4.3 Luc + konv - R + (VSV- g)). Luciferase uttrykket ble evaluert i celle lysates 72 timer etter innledende virusinfeksjon. En representant eksperiment vises.

Discussion

Vi har illustrert her to ulike tilnærminger til å analysere virkningen av malariaparasitten på HIV-1 viral syklus, dvs. ved å analysere enten viral gene expression eller avkom virus produksjon og replikering i monocytt-deriverte makrofager. Lignende tilnærminger har vært brukt til andre HIV-1-parasitten co-infeksjoner 16. Men disse nye dataene er et skritt fremover i etterforskningen av malaria-HIV-1 co-infeksjoner. . Faktisk Diou et al 8 studert effekten av hemozoin, ikke levende parasitter, på HIV-1 replikasjon, i samråd med våre resultater, observerte de at hemozoin var selv tilstrekkelig til å hemme viral produksjon av MDM, og ikke MDMs.

Bruke beskrevet eksperimentelle oppsettet, observerte vi at P. falciparum utøver en klar negativ effekt på HIV-1 replicative syklus i makrofager: en signifikant hemming av viral produksjonen er observert i makrofager forhånd utsatt for parasitter (Figure 2A) og en spesifikk effekt av parasitten på viral transkripsjon er illustrert i figur 2B. Men vi kan ikke la ut ytterligere effekter av parasitten på viral innreise eller fusjon (decapsidation), eller på post-integrasjon mekanismer, for eksempel protein syntese eller viral partikkel montering og spirende. Videre er det mulig at en annen effekt på HIV-1-replikasjon ville oppnås dersom parasitten ble lagt enten samtidig eller etter MDM infeksjon med viruset.

Vår in vitro co-infeksjon Modellen gir et kraftig verktøy for å utføre detaljerte undersøkelser av HIV-1 / P. falciparum interaksjoner i vertscellen. For eksempel kombinasjonen av dette eksperimentelle oppsettet med andre teknikker som kvantitativ sanntids PCR, som kan målrette og kvantifisere bestemte trinn i viral retrotranscription og virusgenomet integrasjon til vertscellen genomet, er helt mulig og bør gi ytterligere insights i de mekanismene som er involvert i co-infeksjoner. Videre til spesifikke analyser vurdere tidlige trinn av viral syklusen (viral fusion, decapsidation, oppføring kvantifisering) kan brukes til dette grunnleggende protokollen for å analysere effekten på viral replikasjon. Disse endringene viser hvor fleksibel denne protokollen er om HIV-1 kvantifisering og deteksjon: Ja, selv vanlige HIV-1 reverstranskriptase kvantifisering analyser ved hjelp av tritium-merkede nukleotider kan tenkes å erstatte ELISA for HIV-1 p24. I tillegg til MDM, forventer vi vårt system for å kunne tilpasses andre celletyper relevante for HIV-1-malaria interaksjoner, for eksempel monocytter og dendrittiske celler. Det faktum at MDM er heftende celler forenkler deres manipulasjon, noe som åpner for enkel vask av iRBC som ikke er tatt i, eller som er i kontakt med MDM, uten å eliminere eventuelle makrofager. En slik fordel vil ikke gjelde for dendrittiske celler og monocytter, som er dyrket i suspensjon, kompliserer separation av uRBC og gratis iRBC med slike celler og vi er i dag ta opp dette problemet. Vårt system kan også være nyttig å studere mer komplekse interaksjoner som virkningene av Plasmodium-eksponerte monocytt-deriverte celler på HIV-1 viral syklus i andre immunceller som CD4-positive T-celler i co-kultur eksperimenter. Endelig kan vår protokoll være egnet for eksperimenter som ser på effekten av P. falciparum iRBCs om HIV-1 reaktivering i PBMC for HIV-1 infiserte individer.

Etikk uttalelse

Menneskelig PBMC ble hentet fra blodet av friske givere, i samsvar med retningslinjer bioetikkomité av senteret Hospitalier de l'Université Laval Research Center. En skriftlig samtykke ble innhentet fra alle blodgivere.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av den kanadiske Institutes of Health Research gjennom en katalysator Co-infeksjoner og tilleggssykdommer stipend. Humane erytrocytter ble gitt av Senter Hospitalier de l'Université Laval blodbanken.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RPMI 1640 Multicell 350-000-CL
PBS-endotoxin free Sigma D8662
FBS Wisent 080-150 Heat-inactivated at 56 °C for 30 min
Accutase eBiosciences 00-4555-56
Albumax II Gibco 11021-037 Dissolved in RPMI 1640, filter-sterilized
Lymphocyte separation medium Multicell 305-010-CL
White luminometer plates Promega Z3291
CS Macs separation columms Miltenyi Biotech 130-041-305
VarioMacs separator Miltenyi Biotech 130-090-282
Penicillin/Streptomycin solution Wisent 450-201-EL
D-sorbitol Sigma-Aldrich S1876
Cell scraper (25 cm) Sarstedt 83.1830
24-Well Cell Culture Plates BD Falcon 353047
150 x 20 mm culture dish Sarstedt 83.1803.003
M-CSF Genscript Z02001
HEPES Sigma-Aldrich H4034
Human serum AB+ Valley Biomedical HP1022
HBSS Wisent 311-505-CL
Gentamicin Sigma-Aldrich G1397
Hypoxanthine Sigma-Aldrich H9636
NaHCO3 Sigma-Aldrich S5761
Luciferase Assay System Promega E1500
Human red blood cells Obtained purified from CHUL blood bank.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. WHO. World Malaria Report. (2005).
  2. Kublin, J. G., Patnaik, P., Jere, C. S. Effect of Plasmodium falciparum malaria on concentration of HIV-1-RNA in the blood of adults in rural Malawi: a prospective cohort study. Lancet. 365, 233-240 (2005).
  3. Cuadros, D. F., Branscum, A. J., Crowley, P. H. HIV-malaria co-infection: effects of malaria on the prevalence of HIV in East sub-Saharan Africa. Int. J. Epidemiol. 40, 931-939 (2011).
  4. Xiao, L., Owen, S. M., Rudolph, D. L., Lal, R. B., Lal, A. A. Plasmodium falciparum antigen-induced human immunodeficiency virus type 1 replication is mediated through induction of tumor necrosis factor-alpha. J. Infect. Dis. 177, 437-445 (1998).
  5. Froebel, K., Howard, W., Schafer, J. R. Activation by malaria antigens renders mononuclear cells susceptible to HIV infection and re-activates replication of endogenous HIV in cells from HIV-infected adults. Parasite Immunol. 26, 213-217 (2004).
  6. Diou, J., Tardif, M. R., Barat, C., Tremblay, M. J. Dendritic cells derived from hemozoin-loaded monocytes display a partial maturation phenotype that promotes HIV-1 trans-infection of CD4+ T cells and virus replication. J. Immunol. 184, 2899-2907 (2010).
  7. Diou, J., Tardif, M. R., Barat, C., Tremblay, M. J. Malaria hemozoin modulates susceptibility of immature monocyte-derived dendritic cells to HIV-1 infection by inducing a mature-like phenotype. Cell Microbiol. 12, 615-625 (2010).
  8. Diou, J., Gauthier, S., Tardif, M. R. Ingestion of the malaria pigment hemozoin renders human macrophages less permissive to HIV-1 infection. Virology. 395, 56-66 (2009).
  9. Davies, J. Q., Gordon, S. Isolation and culture of human macrophages. Methods Mol. Biol. 290, 105-116 (2005).
  10. Fortin, J. F., Cantin, R., Lamontagne, G., Tremblay, M. Host-derived ICAM-1 glycoproteins incorporated on human immunodeficiency virus type 1 are biologically active and enhance viral infectivity. J. Virol. 71, 3588-3596 (1997).
  11. Bounou, S., Leclerc, J. E., Tremblay, M. J. Presence of host ICAM-1 in laboratory and clinical strains of human immunodeficiency virus type 1 increases virus infectivity and CD4(+)-T-cell depletion in human lymphoid tissue, a major site of replication in vivo. J. Virol. 76, 1004-1014 (2002).
  12. Wei, X., Decker, J. M., Liu, H. Emergence of resistant human immunodeficiency virus type 1 in patients receiving fusion inhibitor (T-20) monotherapy. Antimicrob. Agents Chemother. 46, 1896-1905 (2002).
  13. Trager, W., Jensen, J. B. Human malaria parasites in continuous culture. Science. 193, 673-675 (1976).
  14. Turrini, F., Ginsburg, H., Bussolino, F., Pescarmona, G. P., Serra, M. V., Arese, P. Phagocytosis of Plasmodium falciparum-infected human red blood cells by human monocytes: involvement of immune and nonimmune determinants and dependence on parasite developmental stage. Blood. 80, 801-808 (1992).
  15. Akkina, R. K., Walton, R. M., Chen, M. L., Li, Q. X., Planelles, V., Chen, I. S. High-efficiency gene transfer into CD34+ cells with a human immunodeficiency virus type 1-based retroviral vector pseudotyped with vesicular stomatitis virus envelope glycoprotein G. J. Virol. 70, 2581-2585 (1996).
  16. Zhao, C., Papadopoulou, B., Tremblay, M. J. Leishmania infantum enhances human immunodeficiency virus type-1 replication in primary human macrophages through a complex cytokine network. Clinical Immunol. 113, 81-88 (2004).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics