Gen İfade Etkileyen Sinyal İletimi Pathways tanımak Tavuk Embriyo uzuvlar Geliştirme içine Boncuk eklenme

1Division of Animal Sciences, School of Biosciences, University of Nottingham
Published 1/17/2016
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Developmental Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Developmental Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Cite this Article

Copy Citation

Mohammed, R. H., Sweetman, D. Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression. J. Vis. Exp. (107), e53342, doi:10.3791/53342 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Tavuk embriyo kullanarak doğrudan büyüme faktörleri ya da gen ekspresyonu ve sinyal transdüksiyon yollarının aktivasyonu ile ilgili sinyal yollarının spesifik inhibitörleri ya da etkilerini test etmek mümkündür. Bu teknik, belirli zamanlarda için kesin olarak tanımlanmış gelişim aşamalarında sinyal molekülleri teslim izin verir. Bu embriyolar, hasat edilmiştir ve gen ekspresyonu in situ melezleme ya da immün ile gözlemlenen sinyal transdüksiyon yollarının aktivasyonu, örneğin, incelenebilir sonra.

U0126, bir MEK inhibitörü batırılmış bu FGF18 batırılmış bir video heparin boncuk veya AG 1-X2 boncuk, ovo ekstremite tomurcuk içine aşılı edilir. Bu FGF18 U0126 tarafından inhibe edilir MyoD ve ERK fosforilasyonu ve endojen ve FGF18 kaynaklı hem MyoD ekspresyonunu uyardığını göstermektedir. Bir retinoik asit antagonisti batırılmış Boncuk FGF18 tarafından prematüre MyoD indüksiyon potansiyalize edebilir.

Bu yaklaşım bize olabilirFarklı büyüme faktörleri ve inhibitörleri ve geniş bir yelpazesi ile ed de gelişmekte olan embriyonun diğer dokularda uyarlanmıştır.

Introduction

Kuş embriyolar yıllardır 1 gelişim çalışma için güçlü bir araç sağladı. Bunların en yararlı özelliklerinden biri bunların manipüle edilmeleri nispeten kolay olmasıdır. Dış gelişimi, hücre kaderine 2,3 çalışmak için klasik bir bıldırcın piliç kimera sistemi olarak örnekler dahil olmak üzere çeşitli micromanipulations embriyo ulaşmak için yumurta açıp gerçekleştirmek mümkün kılar, geliştirme 4,5 sırasında belirli dokularda aşırı ekspresyona yönelik retrovirüslerin enjeksiyonu ve eksplant kültürü gelişimsel sinyal kaynaklarını 6 tanımlamak için. Daha yakın zamanlarda GFP ifade transgenik tavuk hattından greft ile etiketsiz bilgisayarlar arasında oluşturulan kimeralardır klasik aşılama ve genetik modifikasyon kombinasyonu gelişimi 7,8 dair önemli bilgiler sağlayabilir göstermiştir.

Kuş embriyo manipüle edilebilir kolaylığı uzuv incelemek için o mükemmel bir model yapmıştırgelişimi 9. In vivo gelişmekte bacaklarda özgü büyüme faktörlerinin uygulanması bacak desenlendirme 10,11 değiştirebilir ve bu sürecin 12 içgörü sağlamaya devam faktörlerin belirlenmesinde etkili olmuştur. Bu yaklaşım aynı zamanda, kas gelişimini düzenleyen faktörleri incelemek için kullanılır olmuştur ve böyle Wnts 13, BMP 14 ve HGF 15 gibi sayısız sinyaller için roller ortaya çıkardı.

Son zamanlarda bu teknik, bacak tomurcuk miyojenik gen ekspresyonunu kontrol sinyalleri araştırmak için kullanılmıştır ve FGF18 ve retinoik asit arasındaki etkileşimler MyoD ekspresyonu 16 zamanlamasını kontrol göstermiştir. Boncuklar üzerine yüklendi ve daha sonra belirlenen gelişim aşamalarında spesifik dokular doğrudan aşılanabilir büyüme faktörleri ve küçük moleküllerin bir kombinasyon kullanılarak gelişimi esnasında hemen hemen her zaman ve bölge müdahale imkanı verir. Bu inve için kullanılmıştırhücre gruplarının desenlendirme 17,18, nöral şartnamede 19, nöral krest göç 20 ve eksen uzantısı 21 dahil olmak üzere birçok süreçleri stigate.

Burada tavuk bacaklarda gelişmekte olan ya da büyüme faktörleri ya da inhibitörlerin batırılmış boncuklar aşılama için bir yöntem tarif eder. Bu in situ hibridizasyon ile, kas spesifik gen ekspresyonunu analiz ederek Miyogenesis bu sinyallerin etkisini belirlemek amacıyla kullanılmıştır. Bu tür retinoik asit veya belirli bir sinyal yollarının küçük molekül inhibitörleri olarak küçük hidrofobik moleküller için büyüme faktörleri ya da AG 1-X2 boncuklar için kullanılan heparin batırılmış boncuklar, kullanılarak greft tarif eder. Bununla birlikte, diğer boncuklar da FGF'ler 22 ve 23, her iki Shh teslim etmek için kullanılmıştır temin edilebilmektedir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Etik Beyanı: Bütün bu deneyler hayvan bakımı ve Nottingham Üniversitesi etik kurallara uyun.

Tırnak için Heparin Boncuk 1. Hazırlık

  1. Kullanmadan önce PBS içinde iyice heparin boncuk yıkayın. Not: boncuk PBS içinde bir çamur olarak 4 ° C 'de muhafaza edilebilir.
    1. PBS, 1 ml damla bir 20 ul pipet ile stoktan bunları kaldırarak aşılama için boncuk seçin. Daha sonra 3 santimetrelik bir petri tabağına PBS 20 ul damla içine boncuk aktarmak için 2 ul ayarlanmış bir mikropipet kullanın. P2 pipet ile seçilen boncuklar transfer diseksiyon mikroskobu stereo kullanarak, boyutuna göre boncuk seçin ve; Bu yaklaşık 100 mikron çapında idealdir.
  2. Boncuk PBS çıkarın. 20 ul pipet ve ince bir saatçi pensesi ile kılcal hareket ile artık sıvı sıvının en çıkarın. Not: fiili büyüme yüzden mümkün olduğunca ortadan kaldırmak için önemlidirbu boncuklar ilave edildiğinde r seyreltilmez.
  3. Boncuklar üzerine, doğrudan büyüme faktörü Pipet. FGF18 için PBS içinde% 0.1 BSA içinde 0.5 mg / ml'de yeniden rekombinant FGF18 0.5 ul ekle. Buharlaşan sıvının önlemek için çanağın kenarları etrafında birkaç damla su koyun.
  4. Oda sıcaklığında 1 saat için boncuklan inkübe edin. Pasteur pipeti ile çanak su damlalarını ve aşılama için hazır buz üzerine yerleştirin.
  5. Onlara görselleştirmek yardımcı olmak için aşılama öncesi (saydam boncuk için) aktarım işlemlerinin% 2 fenol kırmızısı 4-5 boncuk Gerekirse. Embriyo transfer olmadan önce PBS içinde durulayın.

Tırnak için AG 1-X2 Boncuk 2. Hazırlık

  1. 0,2 N formik asit ile Türevlendirilen boncuk Kullanımdan önce.
    1. Bu kullanım, 1.5 ml mikrosantrifüj tüp boncuk aktarmak için bir spatula yapmak için. 0,2 N formik asit 1 ml ilave edin ve 1 saat süre ile bir çalkalama platformu üzerinde yıkayın.
    2. Sonra P1000 pipet ile formik asit çıkarın ve 1 ile değiştirinml su. 1 saat yıkayın ve formik asit kalan çıkarmak için altı kez tekrarlayın.
    3. P1000 pipet ile kalan sıvıyı çıkarın ve 4 ° C'de boncuk saklayın. Not: Bu aşamada bütün artık suyun ayrılması için gerekli değildir.
  2. 3 cm'lik bir petri kabına küçük bir spatula kullanılarak stoktan yaklaşık 5-10 ul hacmi tanelerin küçük pelet çıkarın ve DMSO'nun 1 ml ekleyin (ya da ilaç içinde çözünmekte çözücü hangisi geçerli ise). Not: Bu doğru boyutta olanlar seçmek için hangi birkaç yüz boncuk sağlamalıdır.
  3. Sonra başka bir 3 santimetrelik bir petri tabağına bir çözücü 20 ul damla yaklaşık 100 um çapında boncuklar aktarmak için 2 ul ayarlanmış bir P2 pipet kullanın.
  4. 20 ul pipet ve 2 ul pipet ile herhangi bir kalıntı çözücü ile çözücü çıkarın. İlacın 20 ul uygulanacak değiştirin.
    Not: tutarlılığı (ya da hiç çözücü kullanılır) DMSO içinde 100 uM bir konsantrasyonda ilaç çözünmesi için,Bazı küçük molekül inhibitörleri olarak -80 ° C de 20 ul ve deposuna kısım kararsızdır ve tekrarlanan donma-çözülme önlemek için en iyisidir. Gerekirse o boncuk iliklerine önce istenilen konsantrasyonda ilacın sulandırmak. Etkili konsantrasyon, her bir ilaç için ampirik olarak tespit edilmesi gerekebilir.
  5. 1 saat süreyle inkübe edin. Bu moleküllerin çoğu ışığa duyarlı olarak ışıktan koruyun.
  6. Suda çözünmüş% 2 fenol kırmızısı 20 ul içine 2 ul ayarlanmış bir p2 pipet ile aktarım işlemlerinin 4-5 boncuk aşılama önce. Boncuk görselleştirmek için bir stereo mikroskop kullanarak bu adımı gerçekleştirin. İnce saatçiler forseps ile tek bir boncuk veya bir tel döngü çıkarın ve embriyo aktarmadan önce PBS içinde yıkayın. Bu faaliyetin kaybına neden olabilir kullanımdan önce fazla 15 dakika 2% fenol kırmızısı boncuk bırakmayın.

3. Tungsten İğneleri hazırlanması

  1. 3-4 cm uzunlukta ince tungsten tel kesin. Ucuna tel tek parça takınBunsen beki bir cam Pasteur pipeti ve eritebilir pozisyonda sabitlemek için. Bunlar, kullanım sırasında zarar görmüş, yedek olmadığından emin olmak için 10 iğne kadar hazırlayın.
  2. Bir blowtorch ateşe telin ucunu yerleştirin ve (2-3 dk civarında) tungsten beyaz parlıyor ve ucu keskin kadar orada tutun. Not: Kullanım sırasında iğne temizlenebilir ve gerektiğinde blowtorch yeniden bilenmiş.
    NOT: Bu iğneler boncuklar aktarmak için döngüler yapmak için kullanılabilir. Yavaşça tezgah iğne dokunmak ve bir döngü oluşturacak şekilde viraj olacak.

Boncuk Greft 4. hazırlanması Embriyolar

  1. Istenen sahne (en uzuv tomurcuk manipülasyonları için 3-5 gün) ulaşıncaya kadar kör uç yukarı gelecek şekilde yumurta kuluçkaya yatmaktadır. Kabuğunu kırmak ve daha sonra kabuk kaldırmak ve embriyo maruz forseps kullanmak künt ucunda künt forseps musluk kullanma. Yumurta kabuğu zarı emin olun da kaldırılır.
    Not: PBS 1-2 ml yardımcı olmak için bir Pasteur pipeti ile eklenebilirBu zar sarısı yapışıyor eğer. Yavaşça, sarısı yüzeyine PBS pipetle sarısı zarar vermemeye özen forseps ile membran tutup, yavaşça yumurta çekin.
  2. 10 ml şırınga ile yumurta ve 19 G iğne albümin 5 ml kadar kaldırın. Embriyo sağkalım oranları azaltabilir büyük hacimlerin çıkarılması gibi yumurta mühürlemek için kullanılan bant ile temas yapmaz embriyo sağlamak için gerekli olan tek kadar götür.
  3. Embriyo 15 100 U penisilin içeren PBS ml ve 0.1 mg streptomisin / ml sanatçılar india mürekkep 5-6 damla görselleştirmek için. 0.5-1 enjekte ml doğrudan 1 ml şırınga ile embriyo ve 25 G iğne altında.
  4. Dihidrat etmez embriyo sağlamak için yumurtanın içine% 1 fetal buzağı serumu ve 100 U penisilin ve 0.1 mg streptomisin / ml PBS 2-3 ml ekleyin. Bilenmiş saatçiler forseps kullanarak vitellin membran kaldırmak ve gelişmekte olan ekstremite tomurcukları üzerinde amniyon açın. Embriyo kurumaz emin olun veGerekirse, daha fazla PBS / FCS ekleyin.
    NOT: bacak tomurcukları açıkça embriyonun kanadında eşleştirilmiş çıkıntılar olarak görülebilir. Bu aşamalarda embriyo böyle sağ tarafı normal üst olduğunu dönecek. Sonuç olarak, doğru ayağının içine doğru geriye boncuk greft ve karşı, kontrol olarak bırakıldı olanları kullanmak için, normalde daha kolaydır.
  5. Boncuk implante edilecek uzuv tomurcuk içine bir kesi yapmak için bir bilenmiş tungsten tel kullanın. Genç aşamalarında bu zor olmasına rağmen mümkün ekstremite tomurcuk aracılığıyla tüm yol kesme kaçının.
    NOT: Büyük embriyoların (HH evre 22 ve üzeri) yılında aşılama için ama uzuv kendisi küçük tomurcuk olarak bu daha zor genç aşamalarında bacak tomurcuk belirli bölgeleri seçmek mümkündür. O bacak tomurcuk, yani özellikle genç aşamalarında, boncuk proksimal ekstremite kalır aşılı boncuk geçmiş büyüyecek hatırlamak da önemlidir.
  6. Ya ekstra ince wa kullanarak büyüme faktörü veya ilaç ya bir boncuk Pick uptchmakers forseps veya tungsten iğne yapılmış bir döngü. Boncuk DMSO veya fenol kırmızısı ya batırılmış edilmişse, embriyo başvurmadan önce PBS içinde yıkayın. Forseps / tel döngü ile embriyo boncuğu aktarın. Sonra kesi içine boncuk eklemek için bilenmiş tungsten tel kullanın.
  7. Embriyo hidrate tutulmasını sağlamak yumurta PBS / FCS 1-2 ml ekleyin, ancak bu embriyolar zarar ve boncuk yerinden neden olabilir olarak embriyo kendisi doğrudan uygulamaktan kaçının. Bantla yumurta Seal ve inkübatör dönmek.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

HH aşamada 21 MyoD boyama gelişmekte Somitlerin (Şekil 1A) miyotom gözüyle görülebilir, ancak bacak miyoblastlar geliştirilmesinde ifade değildir. Şekil 1B, bir FGF18 kordon greft, aşağıdaki MyoD 6 saat boyunca in situ hibridizasyon gösterir. Karşı bacak bir ifade yoktur ise MyoD boncuk yakın miyoblastların indüklenir. U0126 batırılmış bir boncuk, MEK, MyoD (Şekil 1C) bloklar FGF18 indüksiyon spesifik bir inhibitörü olan Co-aşılama. Benzer HH aşamada 21 bir U0126 boncuk aşılama ve 24 saat tedavi edilmemiş kontralateral bacak (Şekil 1D, E) ile karşılaştırıldığında myod endojen ifadesini azaltır sonra MyoD ifadesi arıyor.

HH evre 19 FGF18 de bacak tomurcukları ise myod (Şekil 1F) yol açmaz. Figu (boncuk Ancak eş-aşılama FGF18'de batırılmış ve retinoik asit antagonisti BMS493 bu üstesinden gelebilir ve ektopik MyoD algılandığındayeniden 1G)

Şekil 1I FGF18 hızlı fosforlanmasını uyardığını göstermektedir iken FGF18'i onaylamak için MEK embriyolar aracılığıyla hareket 1 saat boncuk greft sonra hasat ve fosforile ERK için immunohistokimyasal edilir MEK. Şekil 1H hedef aşılama sonra FGF18 boncuk 1 saat bir aydınlık görüntüsünü gösterir aşılı boncuk etrafında ERK. Şekil 1J bu görüntülerin bir kaplamasını göstermektedir. Kontrol taneleri ERK fosforilasyonunu neden olmayan% 0.1 BSA ile ıslatılmış (Şekil 1K, L, M)

figür 1
Bacaklarda Şekil 1. MyoD ifade myod (A) ifade etmeyen HH aşamada 21,. ERK fosforilasyon yoluyla FGF18'in ve retinoik asit ile unmanipulated kontrol bacaklarda düzenlenir ancak prematüre anlatım (bir FGF18 boncuk aşılama sonrası 6 saat tespit edildiğindeB). Co-aşılama FGF18 ve U0126 boncuk blokları bu indüksiyon (C). Endojen MyoD ifadesi HH evre 21 (D) görülür ama bu U0126 (E) batırılmış boncuklar aşılama tarafından engellendi. Daha önce bacak tomurcukları içinde vaktinden önce MyoD sentezleme FGF18 (F) endüklenmemiştir ancak FGF18 ve retinoik asit antagonisti BMS493 (G) batırılmış ko-aşılama boncuklar ile indüklenir. Aydınlık (H), floresan (I) ve anti-phosphoERK immunohistokimyasal bir HH21 uzvun (J) görüntü birleştirildi: HH21 ayağının içine doğru geriye aşılanmış FGF18 boncuklar 1 saat sonra ERK fosforilasyonunu teşvik eder. BSA içinde ıslatılmış Kontrol taneleri ERK fosforilasyonu uyardığı değildir: (K), floresan (L) ve anti-phosphoERK immunohistokimyasal bir HH21 uzvun (M) görüntü birleştirilir. Bu rakam, Mok ve arkadaşları, 2014 16 ile modifiye edilmiştir. Siyah yıldız: heparin boncuklar; Beyaz asteriskleri: AG 1-X2 boncuklar; oklar ekstremite tomurcukları ektopik MyoD ifadesini göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Ovo dokuların geliştirilmesi için doğrudan uygulanabilir boncuk greft kullanımı, uygulandıkları hangi gelişim aşamasında ve pozlama süresi boyunca eşsiz kontrol vererek gelişim sırasında büyüme faktörü sinyalizasyon rolünü incelemek için güçlü bir araçtır.

Molekülünün her türü için boncuk seçimi önemlidir. Her ampirik bu boncuklar üzerinde inhibitör etkinliğini test etmek için gerekli olmasına rağmen, burada anlatılan önleyicileri ve retinoik asit gibi küçük hidrofobik moleküller, genellikle türetilmiş AG 1-X2 tanelerine de bağlanır. Benzer bir şekilde, büyüme faktörleri için boncuk farklı test etmek için gerekli olabilir. Bazı boncuklar greft gerçekleştirmek için yeterince uzun onları etiketleyecektir manipülasyonlar ama PBS içinde durulama ardından fenol kırmızısı ile kısa tedavi sırasında görselleştirmek için zor olabilir bu yüzden şeffaf ve vardır.

Boncuklar hazırlarken, özellikle inhibitör ile ıslatılmışs, bu mümkün olduğu kadar ışıktan korumak önemlidir. Onların ilk tedavisi sırasında ve manipülasyon sırasında onlar örtülmelidir ve boncuklar transfer edilirken, yalnızca kaldırıldı. Bu reaktiflerin bazı kararsız ve doğru bir şekilde saklandığı takdirde yanıltıcı negatif sonuçlar verebilir gibi taze çözülmüş alikotları kullanmak en iyisidir. Bu boncuk etkinliğini azaltabilir olarak bu aşılama önce çok uzun süre fenol kırmızısı iliklerine onları bırakmak değil de önemlidir.

Her iki büyüme faktörleri ve ilaçlar, bu kordon greft kullanılan konsantrasyonlar, genelde çok yüksektir; FGF18 boncuklar genelde 100 uM'lik bir konsantrasyonda ıslatılır küçük molekül inhibitörleri için 0.5 mg / ml ve boncuk bir konsantrasyonda ıslatılır. Bu, tipik olarak, bu boncuk tarafından emilir ve daha sonra serbest büyüme faktörleri ve ilaç miktarları olarak gerekli olan çözelti içinde hücreleri tedavi etmek için kullanılan konsantrasyonlarda çok daha yüksek olmasına rağmen, doğrudan ancak muhtemelen cins ölçülmesi zorBu in vivo daha düşük seviyeleri te. Bunun bir sonucu olarak bir konsantrasyon aralığı etkili bir dozunu tespit etmek için kullanılan her bir molekül için test edilmelidir.

Gelişimi sırasında, 24 somitlerinden ve AT kültürü 25 gibi ovo ve kültürlerde embriyolar kullanılabilir Bu teknik, aynı zamanda, diğer dokularda geniş bir aralığına uygulanabilirdir şekildedir. Daha sonra, aynı şekilde 26, gelişmekte olan embriyolara aşılanabilir taneler halinde, spesifik büyüme faktörü salgılar kültürlenmiş hücreleri büyütmek de mümkündür.

Erişilebilirlik kombinasyonu, manipülasyon ve düşük maliyet kolaylığı tavuk embriyo gelişiminin mükemmel bir model haline getirir. Transgenik teknolojiler giderek kuş türü ve her iki tavuk genetiği değiştirilmiş çizgilere uygulanır gibi 7 ve bıldırcın 27 zaten de yeni bakış açıları sağlayan bu modifiye kuşlar teknikleri aşılama klasik embriyo kombinasyonu kullanılabilir hale gelirvelopment 8,28.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heparin acrylic beads Sigma H5263 The acrylic-heparin beads used have been discontinued. However a replacement product is available, Heparin agarose beads, cat no H6508. These are transparent so harder to work with but can be stained with phenol red in the same way as AG 1-X2 beads,
AG 1-X2 beads Bio-Rad 140-1231
Affi Gel blue beads Bio-Rad 153-7301; 153-7302 These beads have been used with a range of growth factors including Shh and FGFs and can be used to replace heparin beads
FGF18 Peprotech 100-28 Resuspend in PBS with 0/1% BSA, prepare single use aliquots of 0.5-1ul and store at -80°C. Batches and suppliers can vary so different concentrations should be tested to determine an effective dose.
U0126 Cell Signalling 9903 Make to 20mM stock in DMSO and store in single use aliquots at -80°C. Protect from light.
BMS-493 Tocris Biosciences 3509 Resuspend in DMSO and store in single use aliquots at -80°C. Protect from light.
Black Indian ink Windsor and Newton 5012572003384 (30 ml) While alternatives to this product are available care should be taken as some inks are toxic to embryos
Tungsten wire, 0.1 mm dia. 99.95% Alfa Aesar 10404
Penicillin / streptomycin Sigma P0781 Dilute 100X in PBS/ink and PBS/FCS

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenetic Genome Research. 117, 231-239 (2007).
  2. Le Douarin, N. The Nogent Institute--50 years of embryology. International Journal of Developmental Biology. 49, 85-103 (2005).
  3. Le Douarin, N. M. The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story. Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).
  4. Bell, E., Brickell, P. Replication-competent retroviral vectors for expressing genes in avian cells in vitro and in vivo. Molecular Biotechnology. 7, 289-298 (1997).
  5. Abu-Elmagd, M., et al. Wnt/Lef1 signaling acts via Pitx2 to regulate somite myogenesis. Developmental Biology. 337, 211-219 (2010).
  6. Munsterberg, A. E., Lassar, A. B. Combinatorial signals from the neural tube, floor plate and notochord induce myogenic bHLH gene expression in the somite. Development. 121, 651-660 (1995).
  7. McGrew, M. J., et al. Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors. EMBO Reports. 5, 728-733 (2004).
  8. Valasek, P., et al. Cellular and molecular investigations into the development of the pectoral girdle. Developmental Biology. 357, 108-116 (2011).
  9. Tickle, C. The contribution of chicken embryology to the understanding of vertebrate limb development. Mechanisms of Development. 121, 1019-1029 (2004).
  10. Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA. Cell. 75, 1401-1416 (1993).
  11. Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L., Lee, J. Local application of retinoic acid to the limb bond mimics the action of the polarizing region. Nature. 296, 564-566 (1982).
  12. Rosello-Diez, A., Torres, M. Regulative patterning in limb bud transplants is induced by distalizing activity of apical ectodermal ridge signals on host limb cells. Developmental Dynamics. 240, 1203-1211 (2011).
  13. Anakwe, K., et al. Wnt signalling regulates myogenic differentiation in the developing avian wing. Development. 130, 3503-3514 (2003).
  14. Amthor, H., Christ, B., Weil, M., Patel, K. The importance of timing differentiation during limb muscle development. Current Biology. 8, 642-652 (1998).
  15. Brand-Saberi, B., Muller, T. S., Wilting, J., Christ, B., Birchmeier, C. Scatter factor/hepatocyte growth factor (SF/HGF) induces emigration of myogenic cells at interlimb level in vivo. Developmental Biology. 179, 303-308 (1996).
  16. Mok, G. F., Cardenas, R., Anderton, H., Campbell, K. H. S., Sweetman, D. Interactions between FGF18 and retinoic acid regulate differentiation of chick embryo limb myoblasts. Developmental Biology. 396, 214-223 (2014).
  17. Abou-Elhamd, A., Cooper, O., Münsterberg, A. Klhl31 is associated with skeletal myogenesis and its expression is regulated by myogenic signals and Myf-5. Mechanisms of Development. 126-852 (2009).
  18. Schmidt, M., Tanaka, M., Munsterberg, A. Expression of (beta)-catenin in the developing chick myotome is regulated by myogenic signals. Development. 127, 4105-4113 (2000).
  19. Stavridis, M. P., Lunn, J. S., Collins, B. J., Storey, K. G. A discrete period of FGF-induced Erk1/2 signalling is required for vertebrate neural specification. Development. 134, 2889-2894 (2007).
  20. Martinez-Morales, P. L., et al. FGF and retinoic acid activity gradients control the timing of neural crest cell emigration in the trunk. Journal of Cell Biology. 194, 489-503 (2011).
  21. Olivera-Martinez, I., Storey, K. G. Wnt signals provide a timing mechanism for the FGF-retinoid differentiation switch during vertebrate body axis extension. Development. 134, 2125-2135 (2007).
  22. Logan, M., Simon, H. G., Tabin, C. Differential regulation of T-box and homeobox transcription factors suggests roles in controlling chick limb-type identity. Development. 125, 2825-2835 (1998).
  23. Borycki, A. G., Mendham, L., Emerson, C. P. Jr Control of somite patterning by Sonic hedgehog and its downstream signal response genes. Development. 125, 777-790 (1998).
  24. Sweetman, D., et al. FGF-4 signaling is involved in mir-206 expression in developing somites of chicken embryos. Developmental Dynamics. 235, 2185-2191 (2006).
  25. Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier. Developmental Dynamics. 220, 284-289 (2001).
  26. Sweetman, D., Wagstaff, L., Cooper, O., Weijer, C., Münsterberg, A. The migration of paraxial and lateral plate mesoderm cells emerging from the late primitive streak is controlled by different Wnt signals. BMC Developmental Biology. 8, 63 (2008).
  27. Scott, B. B., Lois, C. Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the U.S.A. 102, 16443-16447 (2005).
  28. Seidl, A. H., et al. Transgenic quail as a model for research in the avian nervous system: a comparative study of the auditory brainstem. Journal of Comparative Neurology. 521, 5-23 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats