Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi karbonhidrat iyon sinyalleri geliştirmek için bir verimli örnek hazırlama yöntemi

Chemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Chemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Karbonhidrat iyon sinyalleri maldı kütle spektrometresi reform kristal yapılar tarafından örnek hazırlama sürecinde güçlendirmeye yönelik bir protokol gösterilmiştir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Ou, Y. M., Kuo, S. Y., Lee, H., Chang, H. T., Wang, Y. S. An Efficient Sample Preparation Method to Enhance Carbohydrate Ion Signals in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry. J. Vis. Exp. (137), e57660, doi:10.3791/57660 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Numune hazırlama karbonhidrat kütle spektrometresi (MS) analizi kritik bir süreçtir. Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma (MALDI) MS seçtiğiniz karbonhidrat analiz yöntemi olsa da, zavallı iyon sinyal ve veri tekrarlanabilirlik karbonhidrat örnekleri ciddi sorunlar olmaya devam etmektedir. Karbonhidrat kantitatif analiz için üstün veri kalite sağlayan etkili bir analitik Protokolü gereklidir. Bu video sinyal yoğunluğu artırmak ve veri değişim karbonhidrat MALDI-MS en aza indirmek için örnek hazırlanması protokolleri gösteriyor. Kurutma ve örnek damlacıkları kristalleşme sonra kristal morfoloji metanol kitle spektrometrik analiz önce reformlar yaptı. Karbonhidrat sinyalinde geliştirme maldı görüntüleme kütle spektrometresi ile (IMS) incelenir. Deneysel sonuçlar kristal reformasyon kristal yapıları ayarlar ve karbonhidrat analitler yeniden dağıtan gösterir. Geleneksel MALDI-MS, reform karbonhidrat kristal türleri morfoloji metanol gösterir önemli ölçüde daha iyi sinyal yoğunluğu, iyon görüntü dağıtım ve veri istikrar ile kurutulmuş damlacık hazırlama yöntemi ile karşılaştırıldığında. Burada gösterildiği protokollerin örnek kompozisyon değişiklikleri içermeyen beri onlar çeşitli karbonhidrat ve matrisleri genellikle tabidir.

Introduction

Karbonhidrat analiz önemli ve zorlu bir konudur. Karbonhidrat ve onların türevleri yaşayan organizmalar1,2,3önemli roller oyun olarak. Bu moleküllerin yapıları karmaşık ve çürümeye yatkındır. Birçoğu açıkça ayrılık ve algılama zorluklar nedeniyle karakterize olamaz. Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma (MALDI) kütle spektrometresi (MS) biomolecules, duyarlılık ve anlaşılır sonuçları4, geniş bir analizi uygulanmış olduğundan ne kadar karbonhidratlar MALDI-MS kullanarak analiz devam ediyor Böyle molekülleri5düşük iyonlaşma verimliliği nedeniyle büyük bir meydan okuma olacak. Kimyasal derivatization karbonhidrat6,7iyonlaşma verimliliğini artırmak için sık kullanılan bir yöntemdir, ancak zaman ve örnek tüketen tür yordamlar vardır. Ayrıca, derivatized karbonhidrat iyonlaşma verimliliğini hala proteinlerin daha düşüktür. Bu nedenle, karmaşık prosedürler olmaksızın MALDI-MS karbonhidrat sinyallerinin geliştirilmesi için yöntemler geliştirilmesi gereklidir.

Kantitatif analiz MALDI-MS uygulamaya zor bir konudur. Bir büyük MALDI-MS onun duyarlılığı ve veri tekrarlanabilirlik eleştirel örnek hazırlama protokolleri ve deneysel parametreleri kullanır bir sorundur. Birçok durumda, kantitatif analiz MALDI-MS tarafından türdeş olmayan örnek türleri Morfoloji ve analit dağıtım nedeniyle güvenilmez olduğunu. 2,5-dihidroksibenzoik asit (DHB) maldı matris ile hazırlanan örnekleri iyi bilinen bir örnektir. DHB yavaş yavaş ortam bir ortamda kristalize zaman, çünkü sonuç örnekleri düzensiz türleri morfoloji ölçüde matris kristalleri içine analit şirketleşme, tahmin edilemez. Böyle örnekleri normalde büyük iğne şekilli ve güzel kristalleri oluşur. DHB uçucu solvent ve/veya ısıtmalı örnek plaka kullanılarak hazırlanan zaman hızlı bir kurutma işlemi daha homojen iyi kristaller ve daha iyi nicel sonuçları8,9,10ile sonuçlanır. Bu teknik maldı örnekleri "rekristalizasyon" bilinir. İyileşme analitler hızlı kristalizasyon işlemi sırasında daha iyi birleşme iyi matris kristalleri içine atfedilir. Biz de örnek hazırlama ortamını ayarlama karbonhidrat sinyal ve geliştirilmiş nicel sonuçları11,12heterojen azalma göstermiştir. Bu çalışmaların bulguları örnek morfoloji karbonhidrat sinyal kalitesini belirlemede önemli bir faktör olduğunu göstermektedir. Günlük analiz için genel bir strateji geliştirmek için geliştirilmiş karbonhidrat duyarlılık sağlayan bir verimli örnek reformasyon yöntemi gereklidir.

Sistematik olarak örnek Morfoloji ve karbonhidrat duyarlılık MALDI-MS bir son raporu13arasında korelasyon inceledik. Birkaç önemli karbonhidrat kullanılarak sonuçlar elde ve en iyi sinyal geliştirme recrystallizing tarafından yerine getirilir matrisleri Haritayı maldı örnekleri kurutulmuş. Geleneksel kurutulmuş damlacık (DD) yöntemi kullanılarak hazırlanan örnekleri morfolojisi metanol (MeOH) ile hızlı rekristalizasyon tarafından reform. Detaylı örnek hazırlama protokolleri burada gösterildiği. Protokol örnek plaka Önkoşullanma, örnek ifade ve rekristalizasyon ve kütle spektrometresi analizleri de dahil olmak üzere üç ana adımlardan oluşur. Kullanılan karbonhidrat sialyl-lewis bir (SLeA) ve maltoheptaose (MH) içerir. DHB modeli matris kullanılır. Karbonhidrat sinyal yoğunluğu ve kayma dağıtım belirgin rekristalizasyon sonra geliştirilmiş sonuçlar gösterir. Böyle bir yöntem örnekleri 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) ve α- cyano-4-hydroxycinnamic asit gibi diğer popüler matrisleri ile uygulanabilir. Bu yöntem kolayca laboratuvar rutin karbonhidrat analiz için entegre edilebilir genel bir yaklaşım olarak hizmet vermektedir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. örnek plaka Önkoşullanma

  1. Örnek plakası temizleme
    1. Temizleme sırasında kontaminasyon örnek plaka için nitril eldiven giymek.
    2. El-yıkama deterjan solüsyonu (1,0 mg/mL) 100,0 mL örnek plakalı.
    3. El-distile-deiyonize su (DDW) ile örnek tabak yıkama.
    4. Örnek plaka yüzeyi MeOH 30,0 mL ile yıkayın.
    5. Örnek plaka tamamen suya batırılır kadar 600 mL kabı ve dolgu ile DDW örnek plaka koymak.
    6. Kabı bir ultrasonik koymak ( tablo malzemelerigörmek) banyo ve örnek plaka 15 dk (200 W, 40 kHz) için solüsyon içeren temizleyicide.
    7. Örnek plaka almak ve basınçlı azot kullanarak su damlaları darbe.
    8. MeOH 0.2 µL MeOH diğer noktalar yayılır olup olmadığını denetlemek için örnek plaka üzerinde mevduat.
      Not: MeOH diğer noktalar ile birleştirir adımları 1.1.3-1.1.5 işlemini yineleyin; Eğer değilse, sonraki adıma geçin.
  2. Kurutma odası sıcaklık düzenleme
    1. Kurutma odası istikrarlı koşullar altında damlacıkları,11,12,13daha önce açıklandığı gibi kuru için kullanın. Özellikle, Ou, Y.-M 2.1-2,5 adımlarda açıklandığı ayrıntılı yordamı kullanın. vd. 201612. Kısaca:
      1. Kurutma odası oda sıcaklığında azot düşük bağıl nem ortam sağlamak için sürekli akış hızında tarafından tasfiye.
      2. Isı kontrollü bakır bloğunda kurutma odası tarafından düzenlenen örnek plaka sıcaklık sabiti normal - (25 ° C) veya hızlı kurutma koşulları (50 ° C), devam et.
  3. Matris ve analit çözümleri hazırlanması
    1. Matris çözümleri hazırlanması
      1. DHB % 50 Asetonitril (ACN) dağıtılması: %50 0.1 M çözüm hazırlamak için DDW.
    2. Karbonhidrat analitler hazırlanması
      1. SLeA 10-4 M çözüm hazırlamak için DDW geçiyoruz.
      2. Bir 10-4 M çözüm hazırlamak için DDW MH geçiyoruz.

2. örnek ifade ve rekristalizasyon

Not: Küçük ve düzenli miktarlarda örnekleri analiz etmek için en iyi duruma getirilmiş yordamlar burada açıklanmıştır. Çözümler yatırma önce numune plaka sıcaklığı istenilen sıcaklıkta stabil emin olun. Örnek diğer örnek noktalar rekristalizasyon sırasında karşılamak için büyük bir alana yayılırsa, yeni bir örnek hazırlamak veya 1.1 arasındaki adımları yineleyin.

  1. Küçük bir miktar (0.1 µL) örnek analizi için
    Not:
    örnek ve zaman tüketimi en aza indirmek için aşağıdaki adımları geliştirilmiştir. Kantitatif analiz sınırlı veya miktar analiz için hızlı IMS ile gerçek örnekleri için uygundur.
    1. DHB çözüm ve 0,25 SLeA µL veya MH çözüm microcentrifuge tüp içinde 0.25 µL premix.
    2. Girdap 3 için bir girdap Mikser kullanarak karma çözüm s.
    3. Spin aşağı 2 için mini santrifüj karışık çözümde s (2000 x g).
    4. Premix çözüm 0.1 µL çizmek ve hemen örnek plaka üzerinde mevduat bir pipet kullanın.
      Not: Örnek küçük bir miktar yatırırken, Yapmak değil tutmak premix çözüm için 10 pipet ucu s.
    5. Örnek kurumasını bekleyin. Tipik kurutma kez Tablo 1' de listelenmiştir.
    6. MeOH 0.2 µL şu kurutulmuş örnek nokta yatırmak için bir pipet kullanın. Örnek alacak ıslak ve kuru hemen.
      Not: İfade yordamı 3'te tamamlandığını emin olmak MeOH önemli buharlaşma kaybı olmaması için s.
    7. Bir mikroskop kullanarak örnek inceleyin. Kristal türleri morfoloji olarak beklenen (bakınız Şekil 1 örneğin istenen sonuçları) yoksa, yeni bir örnek hazırlamak için 2.1.1-2.1.6 kadar olan adımları tekrarlayın.
    8. Nitril eldiven giymek ve dikkatle kurutma odası örnek tabaktan dışarı almak.
  2. Düzenli bir miktar (1 µL) örnek analizi için
    Not: Aşağıdaki adım karbonhidrat örnekleri ile genellikle kullanılan maldı örnek miktar polimerlerin en üst düzeye çıkarma geliştirilir. Rutin ve kantitatif analizleri için uygun bir süreçtir. Rekristalizasyon işlemi örnekleri ve matrisleri büyük alanlar için eşit olarak yeniden dağıtır.
    1. DHB çözüm ve 2.5 µL SLeA veya bir microcentrifuge tüp çözümde MH 2.5 µL premix.
    2. Girdap 5 için bir girdap karıştırıcılı premix çözüm s.
    3. Spin aşağı 2 için mini santrifüj karışık çözümde s (2000 x g).
    4. Premix çözüm 1.0 µL çizmek ve hemen örnek plaka üzerinde mevduat bir pipet kullanın.
      Not: yok kalan kullanım kılavuzuyla çözüm tekrar örnekleri yatırma sonra.
    5. Örnek kurumasını bekleyin. Tipik kurutma kez Tablo 1' de listelenmiştir.
    6. Şu kurutulmuş örnek nokta MeOH 1,5 µL yatırmak bir pipet kullanın. Örnek alacak ıslak ve kuru hemen.
      Not: Yüksek örnek plaka sıcaklık (50 ° C) durumlarda, rekristalizasyon adım 5 içinde yapılmalıdır s MeOH buharlaşma pipet ipucunda en aza indirmek için.
    7. Bir mikroskop kullanarak örnek inceleyin. Kristal türleri morfoloji olarak beklenen (bakınız Şekil 1 örneğin istenen sonuçları) yoksa, yeni bir örnek hazırlamak için 2.2.1-2.2.6 kadar olan adımları tekrarlayın.
    8. Nitril eldiven giymek ve dikkatle kurutma odası örnek tabaktan dışarı almak.

3. kütle spektrometresi veri toplama ve Analizi

Not: Analiz bir maldı İyon kaynağı ile donatılmış bir ticari uçuş zaman kütle spektrometre (Tablo reçetesi) kullanılarak gerçekleştirilir. Araç ön en iyi duruma getirilmiş ayıklama gecikme ve lazer enerjisi ile belirli kontrol yazılımı (Tablo reçetesi) tarafından işletilmektedir. Spectra m/z kitlesel bir dizi ile doğrusal modu kaydedilir = 0-1500. Örnek potansiyel ±25 plakadır keV ve her spektrum ortalama 10 lazer çekim. Kullanıcıların araç optimizasyonu ve uyumlu yazılım kullanarak örnek analiz yapmak ve araç üreticisinin yönergelerini izleyin.

  1. Araç kontrol yazılımı açın (bkz. Tablo malzeme).
  2. Örnek plaka kütle spektrometre yerleştirin.
  3. Önceden en iyi duruma getirilmiş veri toplama yöntemi yazılımı seçin.
  4. Tüm örnek bölge görüntüleme yazılımı kullanarak IMS için kayıt ( Tablo malzemelerigörmek).
    Not: IMS yapıyor yoksa bu adımı atlayın.
  5. Veri toplama kontrol yazılımı toplu modunda başlatın.
  6. İyon görüntüleri veri toplama işlemi tamamlandıktan sonra görüntüleme yazılımı kullanarak çizmek.
  7. Kitle spectra analiz yazılımı kullanarak analiz ( Tablo malzemelerigörmek) verileri bir iyon görüntü kaydedilirse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

SLeA temsilcisi SEM görüntüleri DD kullanılarak hazırlanan DHB ile karışık ve rekristalizasyon Yöntemler Şekil 1' de gösterilmektedir. Tipik bir DHB morfoloji DD yöntemi tarafından hazırlanan büyük iğne biçimli kristaller RIM ve örnek noktalar ortasına ince kristal yapıları var. İğne şeklindeki böyle kristallerinin tipik uzunluğu ~ 100 µm ' dir. MeOH tarafından rekristalizasyon sonra örnek eşit iyi pul gibi kristallerle kaplı geniş bir alanı vardır. "Pul" kristalleri uzunlukları kabaca 20-50 µm. Recrystallized örnekleri bu geleneksel DD örnekleri tarafından üretilen daha büyük etkili yüzey alanları sağlamak vardır.

IMS sonuçları, pul gibi kristalleri genellikle daha yüksek karbonhidrat sinyal şiddeti ve daha homojen bir kayma dağıtım neden gösterir. Geleneksel DD örnekleri, örnek noktalar çevre çoğunlukla karbonhidrat iyon sinyalleri dağıtılır. Şekil 2 SLe IMS sonuçlarını gösterirA ve MH ve MeOH rekristalizasyon olmadan. Rekristalizasyon sonra örnek SLeA dağılımı ve MH sinyalleri maç alan parlak görüntü ile de noktalar. Ayrıca, tüm recrystallized karbonhidrat örnekleri önemli geliştirmeler sinyal şiddeti DD örneklerinden elde edilen bu sonuçlar üzerinde göster. Daha yüksek sinyal şiddeti ve homojenliği nedeniyle, rekristalizasyon belirgin kantitatif analiz veri kalitesini artırır.

Rekristalizasyon tarafından karbonhidrat sinyal şiddeti arttırmak için her iki pozitif ve negatif iyon modu etkilidir. Şekil 3 sodiated (pozitif iyon modu) sinyal yoğunluğu ve deprotonated (negatif iyon modu) karbonhidratlar bu DD örnekleri ile ilgili recrystallized örnekleri karşılaştırır. Ortalama olarak, SLeA ve MH örnekleri in rekristalizasyon sodiated sinyalleri 3,9 ve 3.3, etkenlere göre sırasıyla artırır. SLeAdeprotonated için iyon sinyal genellikle rekristalizasyon sonra yaklaşık 4.7 bir faktör tarafından geliştirilmiştir.

Figure 1
Şekil 1. SLeA SEM görüntüleri DHB matris ile hazırlanmış. Örnekleri kurutulmuş damlacık ve rekristalizasyon yöntemleri ile hazırlanır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2. Temsili resim kütle spektrometresi ile hazırlanmışbir ve MH SLe, sonuçlarını kurutulmuş damlacık ve rekristalizasyon yöntemleri. İyon görüntüleri sodiated veya deprotonated analitler dağılımları temsil eder. Tüm alan parlak ve iyon görüntüler aynı ölçeğinde gösterilecektir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3. Karbonhidrat sinyal yoğunluklarda farklı örnek hazırlama yöntemleri ile elde edilen. Siyah barlar: sodiated SLeA (m/z: 843); Kırmızı çubuklar: deprotonated SLeA (m/z: 819); mavi çubuklar: sodiated MH (m/z: 1175). Hata çubukları standart sapmalar gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Örnek Örnek plaka
sıcaklık (° C)
Örnek tutar
(ΜL)
Kurutma örnek
zaman (s)
Kurutma MeOH
zaman (s)
Uygun örnek alanı
genişletme sonra
rekristalizasyon (%)
SLeA 25 0,1 100-150 < 5 0-200
1 300-350 < 10
MH 0,1 100-150 < 5
1 200-350 < 10
SLeA 50 0,1 < 5 < 5
1 < 10 < 10
MH 0,1 < 5 < 5
1 < 10 < 10

Tablo 1. Deneysel parametreleri ve kurutma koşullar altında farklı örnek plaka temperatures.x

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Örnek heterojenite maldı-Bayan DD çok önemli bir sorun en sık kullanılan örnek hazırlama yöntemi, ama sonuç kristalleri son derece heterojen olmasıdır. Böyle örnekleri zavallı atış-to-shot ve örnek örnek sinyal tekrarlanabilirlik göster. Bu nedenle, veri toplama sırasında "tatlı noktalar" örnek alanlarda arama ortak bir maldı deneylerde yöntemidir. Miktar rutin analizleri için uygun olmayan türdeş olmayan böyle örneklerindendir.

Mevcut çalışmada, maldı örnek morfoloji rekristalizasyon tarafından optimize edilmiştir. Karbonhidrat sinyal yoğunluğu ve veri istikrar rekristalizasyon tarafından düzelme karbonhidrat ve matrisleri arasında geliştirilmiş birleşme atfedilir. Çoğu karbonhidrat ve matrisleri hidrofil özellikleri nedeniyle, MeOH verimli bir şekilde maldı kristaller ve karbonhidrat parçalanır. Gözlem birikimi ve MeOH hızlı buharlaşma reformlar bu büyük iğne şeklinde DHB kristalleri küçük pul gibi kristal yapılarına gösterir. Bu işlem aynı zamanda örnek segregasyon en aza indirir ve yüzey alanını artırır. IMS verilerine göre reform kristalleri karbonhidrat iyonlaşma için daha iyi microenvironment sağlar. Özellikle, kurutma odası kullanımı tam kontrollü deneysel parametrelerle bir başvuru koşulu sağlamaktır. Rutin analiz için genel MS kullanıcılar altında benzer geliştirme sonuçları elde etmek için bir ortam ortam protokolleri takip edebilirsiniz.

MALDI yüzey kimyasal reaksiyonlar14,15tarafından hakimdir beri sinyal geliştirme rekristalizasyon tarafından da etkili yüzey alanı, bir artış nedeniyle olabilir. Sinyal şiddeti ve etkili yüzölçümü maldı kristalleri arasında korelasyon örnekleri farklı örnek plaka sıcaklıklar11,12altında hazırlayarak çalışılmıştır. Rekristalizasyon yöntemi kullanarak kristal boyutunu büyük bir değişiklik ile karşılaştırıldığında, kristal boyutu hassas ayar damlacık işlemi kurutma sırasında örnek plaka sıcaklık düzenleyen tarafından elde edilebilir. Numune plaka sıcaklığı 40 ° c tarafından azaltıyorsa THAP bir matris kullanırken, ortalama iğne şeklinde kristalleri THAP 10 kat küçültür Gözlemler karbonhidrat sinyal şiddeti artar13kristal boyutu azalır gibi göster. Ancak, örnek plaka sıcaklık azaltarak verimli DHB morfolojisi değiştiremezsiniz ve uzun hazırlık kez gerektirir çünkü rutin analiz için uygun değildir.

En iyi rekristalizasyon sonuç sağlamak için hazırlık işlemleri özenle yapılmalıdır. İlk olarak, taze örnek karışımları rekristalizasyon yöntemini kullanarak en iyi sinyal geliştirme sağlar. Bir kez premix çözümleri ortam ortamına maruz kalır, ön kristalizasyon Morfoloji ve son kristal boyutu değişir çözümde oluşur. Böyle bir morfoloji muhtemelen matris/analit oranı bir değişiklik nedeniyle değişikliğidir. Gözlemler göstermek o rekristalizasyon tür örnekleri en iyi sinyal geliştirme sağlayamaz. Bu nedenle, pipetting yordam örnek damlacık öncesi kristalizasyon pipet ucu içinde korumak için yüksek verimlilik ile ameliyat olması. İkinci olarak, MeOH uygun bir miktar tamamen reformu örnekleri için uygulanmalıdır. Rekristalizasyon işlemi sırasında MeOH örnek yüzeye önemli buharlaşma kaybı önlemek için mümkün olduğunca hızlı bir şekilde yatırılması. Yatırılan MeOH hacmi yeterli değilse maldı örnek kristaller tamamen erimesi değil. Buna ek olarak, MeOH büyük miktarda dağılın ve örnekleri yoğunluğu azaltmak. Bu örnek türleri kristal türleri morfoloji düzgün MS analiz daha önce reform emin olmak için mikroskop altında morfoloji gözlemlemek için tavsiye edilir. Kristal türleri morfoloji tamamen (başvurusu için bkz: Şekil 1 ve Tablo 1 ) değiştirilmiş değil, aynı işlemleri ile yeni bir örnek hazırlamak gereklidir.

En iyi kantitatif analiz yaklaşım MALDI-MS reform örnekleri IMS ile analiz ediyor. Her ne kadar reformasyon önemli ölçüde örnek heterojenite en aza indirir, farklı alanlarda analitler sinyal yoğunluğu hala (Şekil 2) değişebilir. Seçili örnek pozisyonları elle muayene ile karşılaştırıldığında, belirsizlikler ve veri değişim analiz IMS ile tüm örnek alanların ortalamasını alır. Gözlemler göstermek o rekristalizasyon müdavimi ile hazırlanan numunelerin miktarı (1.0 µL örnek çözümü) üstün karbonhidrat örnek homojenliği kantitatif analiz (adım 2.2) sağlar. Ancak, bu tür örnekleri IMS Analizi el ile muayene yöntemi daha fazla analiz zaman tüketir. Hızlı IMS analiz elde etmek için 0.1 µL örnek çözümler (adım 2.1) kullanarak örnekleri hazırlama-ebilmek küçük örnek alanları üretmek ve analiz süresini azaltmak.

MALDI örnekleri in rekristalizasyon duyarlı ve kantitatif analiz MALDI-MS üstün örnek morfolojisi sağlar. Bu yöntem arkasındaki temel ilke sergilenmez. Bu çalışmada geliştirilen deneysel genel deneysel koşullar için uygun ve etkili işlemlerdir. Bu deneysel süreçler kolayca ekstra olmadan rutin analizleri uygulanabilir maliyet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Yazarlar hiçbir katkıda bulunanlar var.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagent
Detergent powder Alconox 242985
Methanol Merck 106009
Acetonitrile Merck 100003
2,5-dihydroxybenzoic acid (DHB) Alfa Aesar A11459
sialyl-lewis A (SLeA) Sigma-Aldrich S1782
Maltoheptaose Sigma-Aldrich M7753
Pipette tips Mettler Toledo 17005091
Microcentrifuge tube Axygen MCT-150-C
Equipment
Milli-Q water purification system Millipore ZMQS6VFT1
Powder-free nitrile gloves Microflex SU-690
600 mL beaker Duran 2110648
Ultrasonic cleaner Delta DC300H
Hygrometer Wisewind 5330
Nitrogen gas flowmeter Dwyer RMA-6-SSV
K-type thermocouples Digitron 311-1670
Vortex mixer Scientific Industries  SI-0236
Mini centrifuge Select BioProducts Force Mini 
Pipette Rainin pipet-lite XLS
Stereomicroscope Olympus SZX16
Temperature controllable drying chamber This lab
Ultraflex II TOF/TOF mass spectrometer Bruker Daltonics
MTP 384 target plate polished steel BC Bruker Daltonics 8280781
Flexcontrol Version 3.4 Bruker Daltonics Control software
Fleximaging Version 2.1 Bruker Daltonics Imaging software
Flexanalysis Version 3.4 Bruker Daltonics Analysis software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
  2. Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68, (1-3), 173-188 (1997).
  3. Caroff, M., Karibian, D. Structure of bacterial lipopolysaccharides. Carbohydrate Research. 338, (23), 2431-2447 (2003).
  4. Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 337, (1), 11-21 (2003).
  5. Harvey, D. J. Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates. Mass Spectrometry Reviews. 18, (6), 349-450 (1999).
  6. Ciucanu, I., Kerek, F. A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates. Carbohydrate Research. 131, (2), 209-217 (1984).
  7. Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis. Journal of Chromatography B. 793, (1), 15-36 (2003).
  8. Nishikaze, T., Amano, J. Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23, (23), 3787-3794 (2009).
  9. Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21, (5), 807-811 (2007).
  10. Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9, (12), 1164-1171 (1995).
  11. Lai, Y. H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27, (8), 1314-1321 (2016).
  12. Ou, Y. -M., et al. Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications. Journal of Visualized Experiments. (116), e54409 (2016).
  13. Lee, H., et al. Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. 49-55 (2017).
  14. Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes. Applied Surface Science. 103, (3), 231-244 (1996).
  15. Sadeghi, M., Vertes, A. Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization. Applied Surface Science. 127, (Supplement C), 226-234 (1998).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics