Colorazione proteine ​​in gel

Published 7/08/2008
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Biology
 

Summary

Dopo la separazione con metodi elettroforetica, le proteine ​​in un gel può essere rilevato da diversi metodi di colorazione. La colorazione delle proteine ​​con Coomassie Blue, colorazione Silver, SYPRO Orange, SYPRO Ruby sono dimostrate in questo video.

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Gallagher, S., Chakavarti, D. Staining Proteins in Gels. J. Vis. Exp. (17), e760, doi:10.3791/760 (2008).

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Abstract

Dopo la separazione con metodi elettroforetica, le proteine ​​in un gel può essere rilevato da diversi metodi di colorazione. Questa unità descrive i protocolli per la rilevazione di proteine ​​da quattro metodi popolari. Coomassie colorazione blu è un metodo facile e rapido. Colorazione argento, mentre più in termini di tempo, è molto più sensibile e può quindi essere utilizzato per rilevare piccole quantità di proteine. Colorazione fluorescente è una popolare alternativa alle procedure di colorazione tradizionale, principalmente perché è più sensibile della colorazione Coomassie, ed è spesso sensibile come colorazione argento. La colorazione delle proteine ​​con SYPRO Orange e SYPRO Ruby sono anche dimostrato qui.

Protocol

Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in protocolli di corrente in Biologia Molecolare .

Comments

8 Comments

  1. WHICH REACTION EQUATION OF CONVERT Cu+² TO Cu+1 in the protein test

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 3, 2008 - 7:45 AM
  2. thank you!very good!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 6, 2008 - 8:51 PM
  3. It is very good, thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 12, 2008 - 6:43 AM
  4. A good and cheap alternative to SYPRO Rubi is RuBPS staining. Here are some protocols. More information can be found on www.ruthenium.ag.vu   RuBPS staining protocol I (quality) 1. Fix the gel in 30% EtOH, 10% acetic acid overnight ². Rinse the gel in ²0% EtOH for 30 min and repeat 3 times 3. Incubate the gel in 1 mM RuBPS solution for 6 h 4. Equilibrate the gel in water for 10 min and repeat once 5. Destain the gel with 40% EtOH/10% acetic acid for 15 h 6. Equilibrate the gel in water for 10 min repeat once and scan   all% are in V/V   Procedure as published in Proteomics ²004, 4, 599–608.     RuBPS staining protocol II (fast)   1. Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid containing    1 mM RuBPS for 1 h. ². Destain the gel for ²0 min in 40% Ethanol/10% acetic acid 3. Wash the gel for 10 min in water and scan   all% are in V/V   Procedure as published in PLoSONE. ²007 Feb ²8;²(²)e²63.       RuBPS staining protocol III (co-electrophoretical)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to one pocket of your SDS gel. Run     the gel according to your standard procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan       RuBPS staining protocol IV (loading buffer)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to your loading buffer (omit all other     dyes like bromophenol blue). Run the gel according to your standard     procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan  

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    Posted by: Anonymous
    February 16, 2009 - 1:20 PM
  5. Itz realy ² gud!

    Reply
    Posted by: sathya r.
    May 18, 2009 - 11:01 AM
  6. Thank yoy

    Reply
    Posted by: JASSIM A.
    May 20, 2009 - 9:39 AM
  7. thank you

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    Posted by: ibrahim b.
    August 27, 2010 - 12:31 AM
  8. thanks! This is very useful for my job!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 31, 2010 - 4:33 AM

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