이 보고서는 physiologic 전단 응력 하에서 백혈구 내피 상호 작용을 공부를위한 병렬 플레이트 흐름 챔버 분석의 시각적 묘사를 제공합니다. 이 방법은 트리거 백혈구가 내피 세포 표면에 롤링되는 내피 (E) – selectin과 E – selectin 백혈구 리간드의 역할을 조사에 특히 유용합니다.
E – selectin은 피부, 뼈 및 염증 조직에 leukocytes 순환 모집을 시작하는 데 도움이 microvascular 내피 세포에 종류 – 1 막 단백질이다. E – selectin의 표현이 피부와 뼈가 microvessels에 제정되고 같은 염증 조직에서 IL – 1α 및 / TNF – α, microvessels 등 프로 염증 크린 시토킨에 의해 inducible 있습니다. 이 렉틴과 수용체는 mediates 특성 회전 동작의 결과를 순환 leukocytes에 탄수화물 카운터 – 수용체의 리간드와 상호 작용을 약한 구속력. 이러한 상호 작용은보다 안정 접착제 이벤트 및 diapedesis 활동, 백혈구 압연 활동의 특성화 및 백혈구 E – selectin의 리간드의 신분을 앞에 있기 때문에 백혈구 인신 매매 및 염증의 연구 및 안티 – 염증성 치료제의 개발 (1-5)의 주요 목표를했습니다 . 이 보고서의 목적은 physiologic 혈액 흐름 조건 E – selectin E – selectin의 리간드 상호 작용을 연구에 가장 널리 사용되는 기술의 시각, 포괄적인 설명을 제공하는 것입니다. 하버드 피부 질환 연구 센터와 함께 우리 연구실은 디지털 시각화하고 새 레코딩 소프트웨어, NIS – 요소와 함께 최첨단가 병렬 플레이트 흐름 챔버 장치를 사용합니다. 이 기술은 우리가 화면의 시각화뿐만 아니라 비디오 형식으로 기록 롤링 활동을 실시간으로 접착 이벤트를 분석할 수 있습니다. 같은 주파수, 전단 저항을 압연 및 바인딩 / 효율성을 tethering 같은 세포 접착 매개 변수, Excel 스프레드 시트에 수출 및 통계 분석의 대상, NIS – 요소 소프트웨어로 계산됩니다. 데모 여기에 제시, 우리는 살고 인간 골수 내피 세포 (hBMEC)에서 E – selectin에 의존 백혈구 압연 활동을 조사하기 위해 병렬 플레이트 흐름 챔버를 채용. 불후의 hBMEC 세포 라인, HBMEC – 60 세포, 우리의 내피 세포 모델 (6)로 사용하는 동안 E – selectin 리간드의 높은 수준을 표현하는 인간의 조혈 전구 KG1a 세포는, 우리 백혈구 모델로 사용되었습니다. 유도 및 시뮬레이션 네이티브 E – selectin 표현 흐름 챔버에서 HBMEC – 60 세포를 처음 IL – 1이 활성화되었습니다.하려면 우리의 비디오 프레 젠 테이션은 병렬 플레이트 흐름 분석 프로 테아제 또는 glycosidase을 구현하여 ascertained 수있는 흐름 챔버에 physiologic E – selectin – 중재 백혈구 압연 활동 및 백혈구 E – selectin 리간드 (S)의 기능 특성을 공부에 적합한 방법입니다했다 digestions.
병렬 플레이트 흐름 챔버 분석 백혈구를 공부에 사용되는 시험 관내 분석 시스템의 전문입니다 – 유사한 전단 응력 조건 하에서 내피 접착 상호 작용 후 모세관 venule의 표면에 이수 사람. 백혈구 tethering을 중재하고 활성화 microvascular의 내피의 표면에 압연에서 E – selectin 리간드 – 여기로 우리의 시각적인 표현에 묘사된, 우리는 E – selectin의 역할을 조사하는이 시스템의 가치를 보여줍니다. 우리는 또한 프로 테아제, glycosidase이 시스템에서 E – selectin과 리간드의 역할을 elucidating에 대한 차단 항체 치료의 응용 프로그램을 공개. 이러한 분석은 매우 재현성 있으며, E – selectin 연구를위한 실험적인 근거 형태 도움말 – 생체내에서 E – selectin 리간드 기능을.
시토킨 – 활성 microvascular 내피 세포 (hBMEC 또는 인간 제대 정맥이나 피부 microvascular 내피 세포)의 monolayers와 세포 부착을 공부 이외에 assays은 기판으로 재조합 E – selectin 인간 또는 E – selectin – IG 키메라 분자를 정화 사용하여 수행할 수 세포 접착하십시오. 기타 접착제 상호 작용은 백혈구 (P) (L -) – selectin 및 혈소판 – selectin은 또한 병렬 플레이트 흐름 챔버 기술을 사용하여 assayed 수 있습니다 통해 중재. 세포 monolayer / 단백질 기판의 종류를 변화하거나 입력 백혈구 / selectin – transfectant 세포 모델의 조사는 physiologic 전단 응력 조건 하에서 이러한 상호 작용의 역할을 공부할 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
건강 / 미 국립 암연 구소 (NCI) 그랜트 (찰스 J. Dimitroff에 RO1CA118124)의 국립 연구소,,이 프로젝트에 대해 자금은 미국 암 협회의 연구 학술 상, (찰스 J. Dimitroff에 06-024 – 01 – CSM)에 의해 제공되었으며 관절염과 Musculoskeletal 보건 / 국립 연구소 및 피부 질환 부여의 국립 연구소 (박사 토마스 S. Kupper에 P30 AR042689, 브리검 앤드 위민스 병원, 보스톤, MA).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
FBS | SIGMA | F6178-500ML | ||
DPBS | GIBCO | 14190 | ||
0.5 M EDTA | GIBCO | 15575-038 | ||
1M HEPES | GIBCO | 15630 | ||
Parallel-Plate Flow Chamber Kit | GlycoTech | 31-001 | ||
PHD2000 Programmable Syringe Pump | Harvard Apparatus | PHD 2000 | ||
35x10mm Tissue Culture Dish | BD FALCON | 353001 | ||
Fibronectin , from human plasma | SIGMA | 86088-83-7 F2006-2MG | ||
Interleukin-1_, Human; Recombinant | SIGMA | I9401-5UG | ||
HBSS (Hank s Buffered Saline Solution) | GIBCO | 14170 | ||
Medium 199 w/ HEPES & Glutamine | Invitrogen | 12320-039 | ||
Human Serum | Innovative Research, Inc. | IPLA-SER1 | ||
Heparin | Abraxis Pharmaceutical Products | 504011 | ||
Recombinant human fibroblast growth factor | R&D Systems | 233-FB | ||
Penicillin Streptomycin | GIBCO | 15140 | ||
Plastic Test tubes | BD Bioscience | 352008 | ||
Anti-human E-selectin clone BBIG-E4(5D11) | R&D Systems | BBA16 | ||
Bromelain | SIGMA | B-4882 |