O sistema nervoso stomatogastric (STNS) do caranguejo Jonas (<em> C. borealis</em>) Pode ser usado para eletrofisiologia, imuno-histoquímica, e os estudos de cultura de células. A extração STNS é feito em duas partes: a dissecção macroscópica e multa.
Abstract
O gânglio stomatogastric (STG) é um excelente modelo para estudar interações celulares e de rede, porque contém um número relativamente pequeno de células (aproximadamente 25 em C. borealis), que estão bem caracterizadas. As células do STG exibem uma ampla gama de produtos e são responsáveis pelas ações motoras do estômago. O estômago contém o moinho gástrico que quebra os alimentos, com três dentes internos, e do piloro que filtra o alimento antes de chegar ao intestino médio. O STG produz duas saídas rítmica para controlar o moinho gástrico e do piloro conhecidos como geradores de padrão central (CPG). Cada célula do STG pode participar em um ou ambos os ritmos. Estes CPG permitir o estudo de neuromodulação, a homeostase, a variabilidade celular e rede, desenvolvimento da rede, e recuperação da rede.
A dissecção do sistema nervoso stomatogastric (STNS) do caranguejo Jonas (Cancer borealis) é feito em duas partes: a dissecção macroscópica e multa. Na dissecção bruto todo o estômago é dissecada do caranguejo. Durante a dissecção fina do STNS é extraído do estômago usando um microscópio de dissecção e micro-dissecção ferramentas (ver figura 1). O STNS inclui o STG, o gânglio esofágica (OG), e os gânglios comissural (CoG), bem como os nervos que inervam os músculos do estômago. Aqui, vamos mostrar como realizar uma dissecação completa do STNS em preparação para um experimento de eletrofisiologia, onde as células do STG seria gravado a partir intracelularmente e os nervos periféricos seria usado para gravações extracelular. A técnica adequada para encontrar os nervos desejado é mostrado, assim como nossa técnica de desheathing o gânglio para revelar o somata e neuropil.
Protocol
1. Dissecação bruta Coloque um caranguejo no gelo por 30 minutos para maçante os sistemas sensoriais e motoras do animal. Rodeiam por todos os lados com gelo. Devem ser usadas luvas ao manusear o caranguejo. Prepare-se para a dissecção macroscópica fazendo o layout da pan dissecção e as ferramentas que você irá usar. Rongeurs, osso de corte de tesoura, tesoura pequena, pinça dentada, uma espátula com uma borda afilada, um prato Sylgard revestido preto, e pinos de insetos são necessário…
Discussion
A dissecção STNS é o primeiro passo na realização de um experimento de eletrofisiologia ou imuno-histoquímica, ou para a obtenção de células para cultura de células. Independentemente da experiência pretendida, a dissecção macroscópica permanecerá inalterada. No entanto, a dissecção multa pode variar. É importante planejar com antecedência quais as células e que os nervos você vai gravar a partir de. A maioria dos neurônios no STG têm processos que inervam pelo menos um músculo do estômago (ver …
Acknowledgements
Agradecemos aos membros do Laboratório de Marder. Agradecemos aos nossos conselheiro, Dr. Eve Marder, por seu apoio e encorajamento. Esta pesquisa foi apoiada pelo Instituto Nacional de Distúrbios Neurológicos e Derrame Grants NS-NS-17813 e 058110.