Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel opwinding tot het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op longweefsel wordt uitgelegd.
Abstract
De voorbereiding van single-cell schorsingen van weefsel is een belangrijke voorwaarde voor veel experimenten in cellulair onderzoek. Het proces van dissociëren hele organen vereist specifieke parameters om een groot aantal levensvatbare cellen te verkrijgen op een reproduceerbare manier. De gentleMACS Dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. Het instrument bevat voorgeprogrammeerde instellingen die zijn geoptimaliseerd voor het efficiënt, maar zachte dissociatie van een verscheidenheid van weefsels types, inclusief muis longen. In deze publicatie het gebruik van de gentleMACS Dissociator op longweefsel zijn afgeleid van muizen is aangetoond.
Protocol
Om te werken onder steriele omstandigheden, is het raadzaam om alle stappen in een laminaire stroming kap uit te voeren. 1. Materialen HEPES buffer: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl 2) Collagenase D oplossing: Collagenase D: 100 mg / ml (Collagenase D> 0,15 U / mg), in HEPES buffer DNase I oplossing: 20.000 U / ml DNase I PBS buffer bij pH 7,2 PEB buffer: een deel BSA Stock Solu…
Discussion
In deze video, introduceren we een nieuwe methode voor de dissociatie van de muis longweefsel. We laten zien dat een combinatie van mechanische en enzymatische behandeling van het longweefsel een hoog percentage van levensvatbare leukocyten en endotheelcellen opgeleverd. In het bijzonder, was de mechanische desintegratie van het weefsel bereikt door de gentleMACS Dissociator. De gentleMACS C Tubes zijn een rotor – stator systeem, dat scheidt weefsel in een zachte manier. De procedure wordt gecontroleerd door de programm…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs zijn medewerkers van Miltenyi Biotec GmbH, Duitsland.
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).