Belirli doku tiplerinin hücreleri Dissociating doku ajitasyon için belirli parametreler uygulanabilir kültürlenebilen hücrelerinin yüksek ses elde etmek için gereklidir. Miltenyi gentleMACS dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Bu yayında akciğer dokusunda bu cihazların kullanımı açıklanmıştır.
Abstract
Dokuların tek hücre süspansiyonları hazırlık hücre araştırmalarında birçok deneyler için önemli bir ön koşuldur. Bütün organlar dissociating süreci, tekrarlanabilir bir şekilde yüksek bir sayıda canlı hücreleri elde etmek için belirli parametreler gerektirir. GentleMACS Dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Cihaz fare akciğerler dahil olmak üzere çeşitli doku tipleri, verimli ama nazik ayrılma için optimize edilmiş, önceden programlanmış ayarları içerir. Bu yayında farelerden elde edilen akciğer dokusunda gentleMACS Dissociator kullanımı gösterilmiştir.
Protocol
Steril koşullar altında çalışmak için, bir laminer akış kaputun içindeki tüm adımları gerçekleştirmek için tavsiye edilir. 1. Malzemeler HEPES tamponu: 10 mM HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM KCI, 1 mM MgCl 2, 1.8 mM CaCl 2) Kollajenaz D çözüm: kollajenaz D: 100 mg / ml (kollajenaz D> 0.15 U / mg) Hepes, tampon DNaz I çözüm: 20.000 U / ml DNaz I PBS pH 7,2 PEB tampon: 20 kısım 1 kısım BSA …
Discussion
Bu video, fare akciğer dokusunun ayrışma için yeni bir yöntem tanıtmak. Biz akciğer dokusunun mekanik ve enzimatik tedavi bir arada yaşayabilir lökosit ve endotel hücreleri yüksek oranda vermiştir olduğunu göstermektedir. Özellikle, doku mekanik parçalanması gentleMACS Dissociator tarafından elde edildi. Stator sistemi, yumuşak bir şekilde ayrışmaktadır doku gentleMACS C Tüpler bir rotor. Bu prosedür, cihazın program ayarları tarafından kontrol edilir. Ayarları, yüksek verim ve hücre canl?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Miltenyi Biotec GmbH, Almanya çalışanları.
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).