全球基因表达分析，使用斑马鱼的寡核苷酸芯片平台

Summary

基因芯片在基因表达分析的有力工具，在全基因组水平。这项技术已经在各种生物学科包括发育生物学和毒理学中的应用。在这段视频中，我们详细介绍一个使用斑马鱼为一个全面的寡核苷酸芯片平台，全球的基因表达分析的协议。

Abstract

基因芯片技术允许全基因组的基础上的转录水平和基因表达分析的定量测量。基因芯片技术是使用在众多的生物学科中的各种应用，包括全球的发育阶段的基因表达分析，一种疾病状态，并在毒性反应。在此，我们使用一个全面的斑马鱼的特异性寡核苷酸芯片平台的全球基因表达分析演示。斑马鱼的表达微阵列平台包含385000探头，60个碱基对，长度可达12％目标探头的审讯37157目标。对于这个平台上，所有的cDNA和斑马鱼的基因组信息收集各种基因​​组数据库，包括Ensembl（http://www.ensembl.org），天威（http://vega.sanger.ac.uk），加州大学圣克鲁兹分校（ http://genome.ucsc.edu），ZFIN（http://www.zfin.org）。因此，这种表达阵列提供完全覆盖目前斑马鱼的转录。斑马鱼表达微阵列是由罗氏NimbleGen（麦迪逊，威斯康星州）印刷。这种技术示范，包括荧光标记的cDNA产品，杂交标记的cDNA产品的芯片平台，使用一种颜色的分析策略的信号采集和阵列扫描。

Protocol

第1部分：荧光标记的cDNA Cy3标记的芯片实验中使用的染料是敏感的光降解。该程序应采取少量的光的地方。改编自BioPrime阵列比较基因组杂交基因标记系统手册1标签协议。 标记反应试剂存放于-20 ° C。从BioPrime阵列比较基因组杂交基因标记系统解冻2.5X随机引物缓冲液，10X dCTP混合，无核酸酶水。此外解冻染料Cy3标记的dCTP。解冻后，所有试剂使用前短暂离心。 <…

Discussion

许多芯片的协议，其中包括一个详细介绍，使用荧光染料，作为测量和量化杂交手段。 Cy3标记的荧光染料，是敏感的照片和臭氧降解。这是建议的程序，在最短的照明进行。此外，细小的灰尘颗粒可以干扰与杂交和扫描。应给予特别关注，以确保工作场所清洁无尘。

有许多替代品的标签协议，在此过程中介绍。建议各种标签协议进行测试，以确定每一个具体的表达微阵列平?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Array Microcentrifuge Dryer		ISC Bioexpress	C-1303-T
BioPrime Array CGH Genomic Labeling System		Invitrogen	18095-011
Cyanine 3-dCTP		PerkinElmer	NEL576
GenePix 4000B		Molecular Devices	GENEPIX 4000B
Microcon YM-30		Millipore	42411
NimbleGen Array Processing Accessories		Roche NimbleGen	5223539001
NimbleGen Hybridization Kit		Roche NimbleGen	5223474001
NimbleGen Hybridization System 4		Roche NimbleGen	5223652001
NimbleGen Wash Buffer Kit		Roche NimbleGen	5223504001
X1 Mixers		Roche NimbleGen	5223725001