Dieses Video wird zeigen, wie Blutzellen (Blutkörperchen) aus dem hawaiianischen Bobtail Squid zu erreichen,<em> Euprymna scolopes</em> Für den Einsatz in zellbiologischen und bakterielle Adhäsion Assays. Blutzellen wird mit einem Fluoreszenzfarbstoff angefärbt werden und ausgesetzt GFP-markierten Bakterien.
Studien über die Rolle des Immunsystems bei der Vermittlung von molekularen Signale zwischen nützlichen Bakterien und ihren Wirten haben, in den letzten Jahren bedeutende Beiträge zu unserem Verständnis der Ko-Evolution von Eukaryonten mit ihrer Mikroflora. Die symbiotische Beziehung zwischen den Hawaii-Bobtail Tintenfisch,<em> Euprymna scolopes</em> Und die Biolumineszenz Bakterium<em> Vibrio fischeri</em> Hat als Modellsystem für das Verständnis der Auswirkungen von nützlichen Bakterien auf tierische Entwicklung genutzt. Jüngste Studien haben gezeigt, dass Makrophagen-ähnliche Blutzellen, die einzige zelluläre Komponente des Tintenfisches Host angeborenen Immunsystems, die wahrscheinlich eine wichtige Rolle spielen bei der Vermittlung der Einrichtung und Unterhaltung des Vereins. Dieses Protokoll wird zeigen, wie Blutzellen erhalten Sie bei<em> E. scolopes</em> Und verwenden Sie dann diese Zellen in bakteriellen Bindungsassays. Adult Tintenfische sind zunächst betäubt, bevor Hämolymphe wird mit einer Spritze von der Hauptstraße cephalica Blutgefäß gesammelt. Der Gastgeber Blutzellen, in der extrahierten Hämolymphe enthalten sind, zu chambered Deckgläser aufgeklebt und dann auf grün fluoreszierende Protein-markierten symbiotische ausgesetzt<em> Vibrio fischeri</em> Und nicht-symbiotische<em> Vibrio harveyi</em>. Die Blutzellen werden mit einem fluoreszierenden Farbstoff (Cell Tracker Orange, Invitrogen) gegengefärbt und anschließend visualisiert Fluoreszenz-Mikroskopie.
Studien über die Rolle des Immunsystems bei der Vermittlung von molekularen Signale zwischen nützlichen Bakterien und ihren Wirten haben, in den letzten Jahren bedeutende Beiträge zu unserem Verständnis der Ko-Evolution von Eukaryonten mit ihrer Mikroflora. Der squid / vibrio System hat sich als gefügig Modellsystem, um grundsätzliche Fragen in diesem Bereich 2,3,5,6,8 beantworten bewährt. Das Licht-Orgel des Tintenfisches Euprymna scolopes erlaubt Kolonisierung ausschließlich durch die leuch…
Finanzierungsquellen: University of Connecticut Research Foundation und dem Department of Molecular and Cell Biology an SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid-Forschung und Antonio H. und R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship zu AJC
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
SP2 Confocal Microscope | Leica |