Deze video zal laten zien hoe je hemocytes (bloedcellen) te verkrijgen van de Hawaiiaanse Bobtail inktvis,<em> Euprymna scolopes</em> Voor gebruik in de celbiologische en bacteriële hechting testen. Hemocytes wordt gekleurd met een fluorescerende kleurstof en blootgesteld aan GFP-gemerkte bacteriën.
Onderzoek naar de rol van het immuunsysteem in het bemiddelen moleculaire signalering tussen de heilzame bacteriën en hun gastheer hebben in de afgelopen jaren belangrijke bijdragen geleverd aan ons begrip van de co-evolutie van eukaryoten met hun microbiota. De symbiotische relatie tussen de Hawaiiaanse Bobtail inktvis,<em> Euprymna scolopes</em> En de lichtgevende bacterie<em> Vibrio fischeri</em> Is gebruikt als een modelsysteem voor het begrijpen van de effecten van gunstige bacteriën op dierlijke ontwikkeling. Recente studies hebben aangetoond dat macrofagen-achtige hemocytes, de enige cellulaire component van aangeboren de inktvis gastheer immuunsysteem van waarschijnlijker, een belangrijke rol spelen in het mediëren van de oprichting en het onderhoud van deze vereniging. Dit protocol zal demonstreren hoe hemocytes te verkrijgen van<em> E. scolopes</em> En vervolgens gebruik maken van deze cellen in bacteriële bindingstesten. Volwassen inktvis worden eerst verdoofd voordat hemolymfe wordt verzameld door spuit van de belangrijkste cefalische bloedvat. De gastheer hemocytes, vervat in de geëxtraheerde hemolymfe, in acht worden genomen chambered dekglaasjes en vervolgens blootgesteld aan green fluorescent protein-gelabeld symbiotische<em> Vibrio fischeri</em> En niet-symbiotische<em> Vibrio harveyi</em>. De hemocytes zijn tegengekleurd met een fluorescerende kleurstof (Cell Tracker Orange, Invitrogen) en vervolgens gevisualiseerd met behulp van fluorescentie microscopie.
Onderzoek naar de rol van het immuunsysteem in het bemiddelen moleculaire signalering tussen de heilzame bacteriën en hun gastheer hebben in de afgelopen jaren belangrijke bijdragen geleverd aan ons begrip van de co-evolutie van eukaryoten met hun microbiota. Het squid / Vibrio-systeem heeft zich bewezen als een soepel model systeem om fundamentele vragen op dit gebied 2,3,5,6,8 te beantwoorden. Het licht-orgel van de inktvis Euprymna scolopes vergunningen kolonisatie uitsluitend door de lichtgevend…
Financieringsbronnen: University of Connecticut Research Foundation en het ministerie van Moleculaire en Cellulaire Biologie aan SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid-van onderzoek en Antonio H. en R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship voor AJC
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
SP2 Confocal Microscope | Leica |