וידאו זה יהיה להדגים כיצד להשיג hemocytes (כדוריות דם) של הוואי bobtail דיונון,<em> Euprymna scolopes</em> לשימוש מבחני תא ביולוגי חיידקי הידבקות. Hemocytes יהיה מוכתם עם פלורסנט לצבוע וחשוף GFP שכותרתו חיידקים.
Abstract
מחקרים לגבי תפקידה של המערכת החיסונית בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים המארחים שלהם, בשנים האחרונות, תרומה משמעותית להבנת האבולוציה המשותפת של אאוקריוטים עם החיידקים שלהם. הקשר הסימביוטי בין הוואי bobtail דיונון,<em> Euprymna scolopes</em> ואת החיידק bioluminescent<em> Vibrio fischeri</em> נוצל כמערכת מודל להבנת ההשפעות של חיידקים מועילים על התפתחות של בעלי חיים. מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי macrophage כמו hemocytes, המרכיב הסלולר הבלעדית של מערכת החיסון המולדת המארחת של דיונון, צפוי לשחק תפקיד חשוב בתיווך הקמת ותחזוקה של עמותה זו. פרוטוקול זה יהיה להדגים כיצד להשיג hemocytes מ<em> א scolopes</em> ולאחר מכן להשתמש תאים אלה מבחני מחייב חיידקי. למבוגרים דיונון מורדמים הראשון לפני hemolymph נאסף על ידי מזרק מתוך כלי הדם הראשי cephalic. Hemocytes המארח, הכלול hemolymph המחולץ, הם דבקו coverslips החדרים זכוכית חשוף ואז חלבון הפלואורסצנט הירוק שכותרתו הסימביוטי<em> Vibrio fischeri</em> ולא סימביוטית<em> Vibrio harveyi</em>. Hemocytes הם counterstained עם פלורסנט לצבוע (Cell Tracker אורנג', Invitrogen) ולאחר מכן דמיינו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
Protocol
הכן 500 MLS של 0.22 פילטר מעוקרים ים מלאכותי מיקרומטר (FSW; מליחות 35 ppt). ים מלאכותי או טבעי סינון דרך מסנן 0.22 מיקרון מיקרומטר להסיר חלקיקים וחיידקים. הרדימי אחד מבוגר הוואי bobtail דיונון (Euprymna scolopes) על ידי הצבת בפתרון 2% אתנול FSW. מניחי…
Discussion
מחקרים לגבי תפקידה של המערכת החיסונית בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים המארחים שלהם, בשנים האחרונות, תרומה משמעותית להבנת האבולוציה המשותפת של אאוקריוטים עם החיידקים שלהם. מערכת דיונון / Vibrio הוכיחה את עצמה כמערכת מודל ממושמע כדי לענות על שאלות היסוד בתחום ?…
Acknowledgements
מקורות המימון: אוניברסיטת קונטיקט קרן המחקר והמחלקה לביולוגיה מולקולרית Cell ל SVN, Sigma Xi גרנט-in-Aid-מחקר אנטוניו ח ו ר Majorie רומנו בוגר חינוך לידידות AJC
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers)
Collins, A. J., Nyholm, S. V. Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria. J. Vis. Exp. (36), e1714, doi:10.3791/1714 (2010).