Vi visar nyttan av multicolor flödescytometri för detaljerad fenotypisk och funktionell karakterisering av den totala såväl som delmängder minne av CD4 + och CD8 + T-celler i rhesus makaker, den ideala modellen för hiv / aids-vaccin studier.
Den rhesus makak-modellen är för närvarande det bästa tillgängliga modellen för hiv-aids vad gäller ökad förståelse för uppkomsten och utvecklingen av vaccin och läkemedel<sup> 1,2,3</sup>. Här beskriver vi en metod för detaljerad fenotypisk och funktionella analyser av cellulära immunsvaret, särskilt intracellulär cytokin produktion av CD4 + och CD8 + T-celler såväl som enskilda delmängder minne. Vi fick exakta kvantitativa och kvalitativa åtgärder för produktion av interferon-gamma (INF-) och interleukin (IL) -2 i både CD4 + och CD8 + T celler från rhesus makak PBMC stimuleras med PMA plus ionomycin (PMA + I). Den cytokin profilerna var olika i de olika undergrupper av minnesceller. Dessutom, under förutsättning att detta protokoll oss känslighet för att påvisa även små fraktioner av antigen CD4 + och CD8 + T celler undergrupper inom PBMC prover från rhesus makaker immuniserade med en hiv-kuvert peptid cocktail vaccin som utvecklats i vårt laboratorium. Den multicolor flödescytometri teknik är ett kraftfullt verktyg för att exakt identifiera olika populationer av T-celler<sup> 4,5</sup> Med cytokin-producerande förmåga<sup> 6</sup> Följande icke-specifik eller antigenspecifika stimulering<sup> 5,7</sup>.
Dr Pramod Nehete och fru Bharti Nehete för makak blod och PBMC prover, Detta arbete har delvis stöd av medel från NIH bidrag AI 46.969, och alla cellodling media producerades av Central Media Laboratory, som finansieras av NIH bidrag CA 16.672.
Solution and Buffers
Activation agents
Cytokine secretion inhibitors
Antibodies