Drosophila Neuromuskulært kryds (NMJ) Kvantificering: En metode til vurdering af synaptisk morfologi og funktion

Published: April 30, 2023

Abstract

Kilde: Castells-Nobau, A., et al. To algoritmer til høj gennemløb og multi-parametrisk kvantificering af Drosophila Neuromuskulære Junction Morphology. J. Vis. Exp. (2017).

Den Drosophila neuromuskulære krydset (NMJ) bruges som en model til at studere morfologi og funktion af synapser. Denne video beskriver vigtige funktioner, som forskere kvantificerer for at karakterisere NMJ. Eksempelprotokollen demonstrerer en software, der er i stand til at udføre kvantificeringen automatisk.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Castells-Nobau et al.,To algoritmer til høj overførselshastighed og multiparametrisk kvantificering af Drosophila Neuromuskulær Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Krav forud for billedbehandling Udfør Drosophila åbne bogforberedelser af tredje instar vandrende larver (L3), som tidligere beskrevet. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminaler ved hjælp af en kombination af to markører:…

Representative Results

Figur 1: Eksempler på upassende resultater af makrosegmentering. Resultat billeder efter at have kørt”Drosophila NMJ Morphometrics” eller”Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Dele af synaptisk terminal er ikke inkluderet i den gule kontur (A). Dele af baggrunden er inkluderet i den synaptiske terminal af den gule kontur (B). Blå skeletlinje strækker sig ud over syna…

Materials

Immunostaining Dilution
Mouse anti-discs large 1 Developmental Studies Hybridoma Bank AFFN-DLG1-4D6 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Rabbit anti-horseradish peroxidase Jackson IR 323-005-021 1/500
Rabbit anti-Synaptotagmin Gift from Hugo Bellen Jan-00
Mouse anti-Cysteine string protein Developmental Studies Hybridoma Bank DCSP-1(ab49) 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Mouse anti-Bruchpilot Developmental Studies Hybridoma Bank nc82 Jan-50
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 Life technologies A11029 1/200
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 Life technologies A11011 1/500
Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit ThermoFisher Z25006
ProLong Gold Antifade Mountant ThermoFisher P36930
Equipment
Confocal microscope or fluorescence microscope Leica SP5
Zeiss Axio imager
Computer Mac or Pc
Software
FIJI

Play Video

Cite This Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).

View Video