Drosophila Neuromuskulært kryds (NMJ) Kvantificering: En metode til vurdering af synaptisk morfologi og funktion
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Castells-Nobau, A., et al. To algoritmer til høj gennemløb og multi-parametrisk kvantificering af Drosophila Neuromuskulære Junction Morphology. J. Vis. Exp. (2017).
Den Drosophila neuromuskulære krydset (NMJ) bruges som en model til at studere morfologi og funktion af synapser. Denne video beskriver vigtige funktioner, som forskere kvantificerer for at karakterisere NMJ. Eksempelprotokollen demonstrerer en software, der er i stand til at udføre kvantificeringen automatisk.
Protocol
Denne protokol er et uddrag fra Castells-Nobau et al.,To algoritmer til høj overførselshastighed og multiparametrisk kvantificering af Drosophila Neuromuskulær Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Krav forud for billedbehandling Udfør Drosophila åbne bogforberedelser af tredje instar vandrende larver (L3), som tidligere beskrevet. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminaler ved hjælp af en kombination af to markører:…
Representative Results
Figur 1: Eksempler på upassende resultater af makrosegmentering. Resultat billeder efter at have kørt”Drosophila NMJ Morphometrics” eller”Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Dele af synaptisk terminal er ikke inkluderet i den gule kontur (A). Dele af baggrunden er inkluderet i den synaptiske terminal af den gule kontur (B). Blå skeletlinje strækker sig ud over syna…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Cite This Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).