Overview
כאן, אנו מציגים מבחנים למדידת SWIP, פנוטיפ התנהגותי של C. elegans המתרחשת במהלך תנועה נמרצת כמו שחייה. פרוטוקול הדוגמה דן בגישות ניתוח ידניות ואוטומטיות כאחד.
Protocol
הפרוטוקול הבא הוא קטע מתוך קודומלה ואח ', שחייה המושרה שיתוק כדי להעריך דופמין איתות ב Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019).
SWIP (זה)
שים לב: אנו מתארים את השיטה הידנית להערכת SWIP בתולעים מסוג בר שטופלו ב- AMPH. אנו גם דנים בקצרה במעקב אחר תולעים וניתוח נוסף של קינטיקה תולעת באמצעות גשש תולעים אוטומטי ותוכנת מעקב שתוארה בעבר על ידי Hardaway et al.
-
שיטה ידנית לבדיקת SWIP
- Aliquot 40 μL של 200 mOsm / L פתרון סוכרוז או עם או בלי 0.5 מ"מ AMPH לתוך צלחת ספוט זכוכית. תחת הסטריאוסקופ, בחר 8-10 תולעי שלב מאוחר L4 עם ריס או פלטינה לבחור להטביע את הבחירה בצלחת המכילה את הפתרון עד תולעים לזוז את הבחירה לשחות לתוך הפתרון. שים לב למספר התולעים שנאספו לתוך הבאר, להתחיל את שעון העצר, להתבונן ולתעד את מספר התולעים המציגות SWIP בכל סימן דקה.
- העתק את הנתונים הגולמיים לגיליון אלקטרוני וחשב את אחוז התולעים המשותקות על-ידי חלוקת מספר התולעים המשותקות בכל דקה במספר הכולל של התולעים שנבדקו לאורך כל הבחינה והתרבו ב- 100. העתק את ערכי האחוזים לכל תוכנה גרפית וסטטיסטית והתווה את הנתונים בערכי אחוזים על ציר Y וזמן בציר X בתבנית גרף XY.
- בצע ANOVA דו כיווני ואחריו ניתוח שלאחר הוק (למשל, Bonferroni לאחר הבדיקה) כדי לבדוק מובהקות סטטיסטית בקרב שליטה, קבוצות AMPH וזמן הטיפול.
-
ניתוח אוטומטי של SWIP
- בצע ניתוח אוטומטי על תולעת בודדת בכל פעם. הפרוטוקול להגדרת מצלמה, תוכנת מעקב התולעים והתסריט להפעלת ניתוח תוכנת המעקב מתוארים בפירוט ב Hardaway et al.
- בקצרה, מניחים הרמפרודיט שלב L4 מאוחר אחד לתוך צלחת ספוט זכוכית באמצעות בחירת ריסים, כמתואר בשיטה הידנית בסעיף 1.1.2. להקליט קטעי וידאו שחייה של תולעת אחת באותו זמן ולהשתמש בתוכנת מעקב תולעת כדי לחשב את התדירות של כיפופי גוף.
- עקוב אחר קובץ ה- Script שסופק עם תוכנת המעקב כדי להשיג תדר חבטות תולעת וליצור מפות חום מנתוני התולעת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Amphetamine | Sigma | 51-63-8 | |
| Depression glass spot plate | Corning | Corning, Inc. 722085 | |
| Eye lash | |||
| Graphing and statistical software | Prism | Graphpad 5 | |
| Osmometer | Advanced Instruments, Inc | Model 3320 | |
| Spreadsheet | MS office | Microsoft Excel | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Model tlb3. 1 stemi2000 | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | RB=S5016 | |
| Superglue | Loctite | 1647358 .14 oz. | |
| SwimR sofware | 10.18129/B9.bioc.SwimR | ||
| Tracker 2 | Worm Tracker 2.0 | www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/ | |
| Video recording software | Virtualdub | http://www.virtualdub.org/ |
