Overview
이 비디오는 비행의 성인 심장을 설명하거나 드로소필라 등산 선이라고 도합니다. 특집 프로토콜은 살아있는 심장 준비를 위한 해부 절차를 보여줍니다.
Protocol
이 프로토콜은 보글러와 오코르에서 발췌, 드로소필라에서박동 심장을 시각화,J. Vis. Exp. (2009).
1. 시작하기 전에
- 108m Na+5mM K+, 2mM Ca 2+ 2mM MgCl2,1mMNaH2PO4,4mM NaHCO3,10m M 자당, 5m 의 트레할로오스, 5mM HEPES (PH 7.1, 모든 시약)를 포함하는 인공 용액 (AH) 용액을 신선하게 준비합니다. 자당과 트레할로오스는 세균 오염을 방지하기 위해 사용하기 직전에 냉장 재고 솔루션에서 AH에 첨가해야합니다.
- A를 실온으로 가져오고 최소 15분 동안 공기 버블링으로 용액을 산소화하십시오.
- 지방 제거에 필요한 몇 가지 미세 모세 혈관 (예 : 유리 모세 혈관, 100ul, VWR)을 당깁니다.
2. 성인 비행에서 반 그대로 드로소필라 심장
- 성인 드로소필라 파리는 플라이 냅(캐롤라이나 생물공급)으로 2-5분 동안 마취됩니다. 더 이상 노출을 위해 플라이 나닙에 파리를 두지 않도록 주의해야 합니다. 감기에 단기 노출은 또한 파리를 마취하는 데 사용할 수 있지만 CO2는 심박수와 리듬에 더 오래 지속되는 효과가 있기 때문에 권장되지 않습니다.
- 마취 된 파리는 석유 젤리의 얇은 층으로 코팅 페트리 접시에 아래로, 등쪽 을 배치합니다. 날개와 바디의 소수성 파클은 젤리에 가역적으로 "스틱"하지만 필요한 경우 플라이를 재배치 할 수 있습니다. 이는 후속 조작 중에 특히 중요합니다.
- 초기 컷은 스프링 가위(로보즈 #5611)의 곡선한 쌍을 사용하여 만들어집니다. 가위 블레이드는 다리 아래에 배치되고 목 근처의 흉부 의 등대 표면쪽으로 기울어져 있습니다. 머리, 복부 신경 코드 및 다리는 한 번의 절단으로 제거됩니다. 준비는 산소, 인공 용혈 (AH) 용액에 침수된다.
- 스프링 가위를 사용하여 복부의 후면 끝(복부 세그먼트 7 과 8로 구성)은 단일 컷으로 제거됩니다. 이것은 복부의 양쪽 가장자리를 따라 측면 컷을 만들기위한 액세스를 제공하고 후방 창자와 복부 표피 사이의 연결을 끊는 역할을한다. 복부 복통과의 해방된 플랩이 제거됩니다.
- 3단계와 4단계에서 는 전방 및 후방 연결이 절단되어 복부 장기는 이제 트라철에 의해서만 제자리에 보관됩니다. 장과 다른 복부 기관은 일반적으로 보석상의 집게 (로보즈, #55)와 부드러운 잡아 당김을 사용하여 단일 질량으로 제거 할 수 있습니다. 내부 장기를 제거하면 심장 튜브가 여전히 지방 체로 둘러싸인 등주 큐티클에 부착되어 있음을 알 수 있습니다.
- 지방 몸은 빛 현미경에서 매우 불투명하여 심장 튜브를 명확하게 보기 위해 이 지방의 일부를 제거할 필요가 있습니다. 이것은 잘게 그려진 유리 모세 혈관을 사용하여 지방 흡입 기술에 의해 달성됩니다. 모세혈관은 표준 파이펫 풀러(예: Sutter P-97 파이펫 풀러)를 사용하여 만든 다음 진공 소스에 부착된 플라스틱 튜브(타이곤, 1/16")에 삽입됩니다. 이 시스템은 심장 관 주위에서 과잉 지방을 흡입하는 데 사용됩니다. 흡입력은 팁 직경에 비례하므로 직경이 40미크론보다 큰 팁이 있는 파이펫을 사용해서는 안 됩니다. 심장 자체를 만지지 않도록 극단적 인주의를 기울여야하며 심장의 후방 부분이 매우 취약하기 때문에 그 지역은 완전히 피해야합니다.
- 성인 Drosophila 심장 관은 지금 노출되고 구타되어야 합니다. 필요한 경우, 큐티클과 부착 된 심장은 부드럽게 석유 젤리에서 큐티클을 들어 올려 조심스럽게 다시 길들이고 심장 조직과의 접촉을 피함으로써 재배치 될 수 있습니다. 이 시점에서 준비를 목욕용액은 신선한 AHL으로 대체해야합니다. 이 준비는 조작하기 전에 산소화로 20-30 분 동안 평형화 할 수 있어야합니다. 준비는 60 분 이상 유지되어야하는 경우 신선한 AHL과 함께 perfused되어야한다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro Dissecting Spring Scissors (curved) | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5611 | Good for gross cuts (Step 2) |
| Micro Dissecting Spring Scissors (straight) | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5620 | |
| Dumont #55 forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| Glass Capillaries, fine | Science Products | GB100T8P | |
| Pipette Puller | Sutter Equipment | P-97 | Both horizontal and vertical pipette pullers will work |
| Plastic tubing | Tygon | 1/16" inner diameter | for 100 µl capillaries |
| Histoacryl® tissue adhesive | B. Braun Medical |
