德罗索菲拉心脏的准备：研究成人飞行中心脏生理学的技术

Overview

此视频描述了苍蝇的成年心脏，或以其他方式称为 德罗索菲拉 躯干容器。特色协议演示了现场心脏准备的解剖程序。

Protocol

这个协议是沃格勒和奥科尔的摘录，可视化在德罗索菲拉跳动的心脏，J.维斯Exp。(2009). 

1. 在开始之前

1. 新鲜准备的人工淋巴 （AH） 溶液包含 108m Na⁼， 5mM K+， 2mm Ca^{2 +}， 8m M M mgCl₂， 1m NaH₂PO₄， 4m 纳米 NaHCO₃， 10m 蔗糖， 5m 颤音， 5m HEPES （pH 7.1， 所有试剂来自西格玛化学品）.蔗糖和三氯蔗糖应在使用前从冷藏库存溶液中加入 AH，以防止细菌污染。
2. 将 AH 带到室温下，通过空气冒泡至少 15 分钟使溶液含氧。
3. 拉几个细毛细管（如玻璃毛细管，100ul，VWR）需要去除脂肪。

2. 成人飞的半全食性德罗索菲拉心脏

1. 成年德罗索菲拉苍蝇与飞纳普（卡罗琳娜生物供应公司）麻醉2-5分钟。必须小心，不要离开苍蝇在飞午睡更长的时间曝光。短期接触感冒也可用于麻醉苍蝇，但不_{建议使用二} 氧化碳，因为它对心率和节律有更持久的影响。
2. 麻醉的苍蝇被放置，向后侧向下，放入一个涂有薄薄一层石油果冻的培养皿中。翅膀和身体的疏水性尖层可逆地"粘"在果冻上，但如果需要，可以重新定位苍蝇。在随后的操作中，这变得尤为重要。
3. 初始切割使用弯曲的一对弹簧剪刀（罗博兹#5611）。剪刀刀片被放置在腿部下方，向下倾斜，向颈部附近的胸腔背部表面倾斜。头部、腹神经带和腿部被切除了一次。然后，制备剂被淹没在含氧的人工淋巴 （AH） 溶液中。
4. 使用弹簧剪刀，腹部后尖（由腹部段7和8组成）用一次切口切除。这提供了沿腹部两个边缘进行横向切割的通道，并有助于切断后肠和腹部皮质层之间的连接。然后去除腹腔角质层的释放皮瓣。
5. 在第 3 步和第 4 步中，肠道前部和后部连接被切断，因此腹部器官现在仅通过气管保持到位。肠道和其他腹部器官通常可以删除作为一个单一的质量使用珠宝商的钳子（罗博兹，#55）和温柔的拉扯。切除内脏后，心脏管仍然附着在被脂肪身体包围的后部内层上。
6. 脂肪体在光显微镜中是相当不透明的，因此通常有必要去除一些这种脂肪，以便清楚地看到心管。这是通过抽脂技术使用精细绘制的玻璃毛细毛细完成的。毛细管使用标准移液器拉拔器（如 Sutter P-97 移液器）制成，然后插入连接到真空源的塑料管（Tygon，1/16"）中。该系统用于从心管周围吸走多余的脂肪。吸力与尖端直径成正比，因此不应使用直径大于 40 微米尖端的移液器。必须极其小心，避免接触心脏本身，因为心脏的后部非常脆弱，应该完全避免区域。
7. 成人德罗索菲拉心管现在暴露，应该跳动。如有必要，通过轻轻地将切片从石油果冻中抬起并小心地将其驯服下来，再次避免与心脏组织的任何接触，可以重新定位部位。此时，应将沐浴准备的溶液替换为新鲜的 AHL。应允许这种制备在任何操作之前与氧气平衡 20-30 分钟。如果准备要保持超过60分钟，它应该与新鲜的AHL香水。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Micro Dissecting Spring Scissors (curved)	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5611	Good for gross cuts (Step 2)
Micro Dissecting Spring Scissors (straight)	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5620
Dumont #55 forceps	Fine Science Tools	11295-51
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11295-10
Glass Capillaries, fine	Science Products	GB100T8P
Pipette Puller	Sutter Equipment	P-97	Both horizontal and vertical pipette pullers will work
Plastic tubing	Tygon	1/16" inner diameter	for 100 µl capillaries
Histoacryl® tissue adhesive	B. Braun Medical