Fitc-Dextran Alimentación: Un método para cuantificar la permeabilidad intestinal en C. elegans

Abstract

Fuente: Le, T. A. N., et al. Medición de los efectos de bacterias y productos químicos sobre la permeabilidad intestinal de Caenorhabditis elegans. J. Vis. (2019). 

Este video introduce un método para visualizar y medir la integridad del lúmenes intestinales C. elegans alimentando gusanos con etiqueta FITC dextrano.  El protocolo de ejemplo muestra el ensayo realizado con gusanos tratados con 3,3′-diindolylmethane (DIM) y alimentados con patógenos.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Le et al, Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans, J. Vis. (2019). Preparación de placas NGM para probar los efectos de un químico (DIM) en la permeabilidad intest…

Representative Results

Figura 1: El efecto de DIM en la permeabilidad intestinal de C. elegans alimentado P. aeruginosa. Imágenes microscópicas de gusanos de (A) E. coli OP50 sin alimentación FITC-dextran, (B) E. coli con alimentación FITC-dextrano, (C) P. aerugin…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N