मस्तिष्क और स्पाइनल कॉर्ड mononuclear कोशिकाओं के अलगाव Percoll gradients का उपयोग
Summary
वर्तमान लेख के लिए एक तेजी से कुशलता से मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के ऊतकों है कि प्रभावी ढंग से प्रवाह cytometric विश्लेषण के लिए उपयोग किया जा सकता से mononuclear कोशिकाओं को अलग प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.
Abstract
प्रतिरक्षा कोशिकाओं है कि संक्रमण, आघात, autoimmunity, या neurodegeneration के दौरान केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (CNS) घुसपैठ के अलगाव, अक्सर उनके phenotype और effector कार्यों को परिभाषित करने की आवश्यकता है. Histochemical दृष्टिकोण घुसपैठ कोशिकाओं के स्थान का निर्धारण करने के लिए और जुड़े विकृति सीएनएस विश्लेषण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई हैं. हालांकि, में स्वस्थानी histochemistry और immunofluorescent धुंधला तकनीक एंटीबॉडी कि एक ही समय में इस्तेमाल किया जा सकता है एक विशेष ऊतकों में प्रतिरक्षा सेल उपप्रकारों विशेषताएँ की संख्या द्वारा सीमित हैं. इसलिए, प्रवाह cytometry द्वारा प्रतिरक्षा phenotyping के साथ संयोजन के रूप में histological दृष्टिकोण को पूरी तरह से स्थानीय सीएनएस घुसपैठ की संरचना विशेषताएँ महत्वपूर्ण हैं. इस प्रोटोकॉल discontinous percoll gradients से अधिक सेलुलर निलंबन सीएनएस की जुदाई पर आधारित है. वर्तमान लेख के लिए एक तेजी से कुशलता से मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के ऊतकों है कि प्रभावी ढंग से विभिन्न प्रवाह cytometry द्वारा एक एकल नमूने में प्रतिरक्षा सेल आबादी की पहचान के लिए उपयोग किया जा सकता से mononuclear कोशिकाओं को अलग प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.
Protocol
Discussion
सामान्य और सूजन माउस ऊतकों से सीएनएस leukocytes में सेल सतह मार्करों का विश्लेषण कई 1-3 दशकों के लिए उपयोग किया गया है. अलगाव प्रोटोकॉल घनत्व centrifugation 4 द्वारा microglia और leukocytes की जुदाई में आधारित हैं. यहाँ हम सीए?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम राष्ट्रीय मल्टीपल स्केलेरोसिस सोसायटी (टीए / ३०२१ – A1 एईसी टी) और सैन एंटोनियो में टेक्सास विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
Tissue homogenization and Gradients
- Percoll (Amersham)
- 10X Hanks’ Balanced Salt Solution, without Calcium and Magnesium (Gibco)
- RPMI Medium 1640, without phenol red (Gibco)
- 7-ml or 15-ml Dounce Tissue Grinders (VWR)
Flow cytometry
- Cell Staining Buffer (Biolegend)
- Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block), BD Pharmingen
- Hemacytometer (Fisher)
- Anti-mouse CD45 (clone 30-F11), CD4 (clone RM4-5), CD19 (clone 6D5), BioLegend
- 10X Phosphate Buffered Saline, without Calcium and Magnesium (Thermo Scientific)
- Paraformaldehyde (Sigma Aldrich)
- Flow cytometry analysis performed with a LSR II (BD Biosciences)
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