Summary
Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.
Abstract
Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.
Protocol
Passo 1
Sacrificar o rato de acordo com protocolos estabelecidos. Remover o cérebro do crânio e lave-o em gelo frio DEPC tratados água Milli Q para remover qualquer vestígio de sangue de superfície.
Passo 2
Coloque no prato de metal frio. Cortar o cérebro bi meio em hemisfério direito e esquerdo. 
Figura 1. As posições de corte do ponto de vista medial do hemisfério rato
Passo 3
Recolher o bulbo olfatório logo após o primeiro corte. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. 
Figura 2. Dissecção bulbo olfatório
Passo 4
Recolher o córtex frontal direito, após o segundo corte, usando uma lâmina e um Dumont No. 5 fórceps. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. 
Figura 3. Dissecção córtex frontal
Passo 5
Recolher o striatum (núcleo caudado) logo após o terceiro corte com a ajuda de duas pinças de Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. 
Figura 4. Estriado dissecção (núcleo caudado)
Passo 6
Para coletar o hipocampo, coloque o lado ventral do cérebro para cima e depois remover mesencéfalo para expor o hipocampo. Dissecar o hipocampo do córtex utilizando duas pinças Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. 
Figura 5. Dissecção hipocampo
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Discussion
Diferentes regiões do cérebro associada com diferentes doenças neurodegenerativas. Por exemplo, córtex frontal e striatum se relacionam com a doença de Parkinson, enquanto o hipocampo se relaciona com a doença de Alzheimer. Micro-dissecção precisa do cérebro que nos permite detectar as alterações mRNA e proteína na região de doentes com mais precisão.
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Disclosures
Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovada pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) na Universidade de Hong Kong e de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para uso animal.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope | Olympus Corporation | ||
| Dissection tools | Metal plate, forceps, blade, etc. Individually wrapped with aluminum foil and heated at 180oC for eight hours to eliminate RNase. Made ice cold before use. |
References
- Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
- Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).
