एचएच स्टेज 10 चिकन भ्रूण के ओवो Electroporations में
Summary
ओवो electroporation में चिकी एक तकनीक है जो एवियन भ्रूण के आनुवंशिक हेरफेर की अनुमति देता है. इस तकनीक का आम अनुप्रयोगों जीन और ख्यात बढ़ाने तत्वों की कार्यात्मक विश्लेषण शामिल हैं. यह वीडियो एचएच 10 लड़की भ्रूण में न्यूरल ट्यूब electroporation को दर्शाता है. इंजेक्शन तकनीक और उचित अंडे से निपटने पर चर्चा कर रहे हैं.
Abstract
बड़े आकार और चिकन भ्रूण के बाह्य विकास के लंबे समय से यह विकासात्मक जीव विज्ञान के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण उपकरण बना दिया है. आणविक जैविक तकनीक के आगमन के साथ, लड़की में जो जीन विनियमन और समारोह का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी प्रणाली बन गया है. चिकन भ्रूण के विकास में डीएनए या शाही सेना constructs electroporating, जीन या व्यक्त किया जा सकता है नीचे गिरा क्रम में vivo जीन समारोह में विश्लेषण. इसी तरह, संवाददाता constructs भाग्य मानचित्रण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है या ख्यात जीन विनियामक तत्वों की जांच. माउस में इसी तरह के प्रयोगों की तुलना में, लड़की electroporation, जल्दी आसान और सस्ती होने के फायदे हैं. यह वीडियो पहले दर्शाता है कि कैसे eggshell में एक खिड़की बनाने के भ्रूण में हेरफेर करने के लिए. अगला, भ्रूण भारत भ्रूण नीचे इंजेक्शन स्याही की एक पतला समाधान के साथ कल्पना है. एक गिलास सुई और विंदुक विकासशील न्यूरल ट्यूब, तो प्लैटिनम इलेक्ट्रोड समानांतर भ्रूण के लिए रखा जाता है और कम बिजली दालों एक पल्स जनरेटर के साथ प्रशासित रहे हैं में डीएनए और फास्ट ग्रीन डाई इंजेक्षन करने के लिए उपयोग किया जाता है. अंत में, अंडे टेप के साथ बंद है और आगे विकास के लिए एक मशीन में वापस रखा. इसके अतिरिक्त, वीडियो उचित अंडे भंडारण और हैंडलिंग से पता चलता है और भ्रूण के नुकसान के बाद electroporation की संभावित कारणों की चर्चा है.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल HH10 लड़की भ्रूण की न्यूरल ट्यूब electroporation के लिए कदम गाइड द्वारा एक कदम प्रदान करता है. तकनीक दिखाने के अलावा, अंडे का भंडारण और हैंडलिंग के लिए दिशा निर्देश भी प्रदान की जाती है. इस तकनीक आनुवांशिक विश्?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken egg incubator | humidified, set to 37.80°C (100F). | |||
| Pulse generator | Genetronics | BTX T820 | Square wave generator or comparable | |
| Electrodes | our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart | |||
| Connecter cables | ||||
| Micromanipulator | ||||
| Dissecting scope | with large working distance | |||
| Glass capillaries | and capillary puller or commercial glass needles | |||
| Leibovitz’s L-15 media | ||||
| chicken eggs | fertilized | |||
| Curved scissors | ||||
| 10 ml syringe | ||||
| Large bore needle | 16-18G | |||
| Mouth pipette | ||||
| India ink | ||||
| Insulin syringe/syringe | ||||
| Plasmid DNA | ≥ 1µg/µl in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye |
References
- Itasaki, N., Bel-Vialar, S., Krumlauf, R. 'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression. Nat Cell Biol. 1, 203-207 (1999).
