Чик в ово электропорации это техника, которая позволяет генетические манипуляции птичьего эмбриона. Общие применения этого метода относятся функциональный анализ генов и предполагаемых элементов усилителя. Это видео демонстрирует нейронных электропорации трубки в HH 10 куриных эмбрионов. Техника инъекций и надлежащее обращение с яйцом обсуждаются.
Abstract
Большой размер и внешний развития куриного эмбриона уже давно сделали его ценным инструментом в изучении биологии развития. С появлением молекулярно-биологических методов, цыпленок стал полезной системой, в которой для изучения регуляции генов и функции. По electroporating ДНК или РНК конструкции в развивающихся куриных эмбрионов, гены могут быть выражены или сбит с целью анализа в функции гена естественных условиях. Аналогичным образом, репортер конструкций может быть использован для отображения судьбы или для изучения предполагаемых генов регуляторных элементов. По сравнению с аналогичными экспериментами в мыши, птенец электропорации имеет преимущества быть быстрым, простым и недорогим. Это видео демонстрирует первых, как сделать окно в яичной скорлупе манипулировать эмбриона. Затем эмбрион визуализируется с разбавленным раствором тушь вводили ниже эмбриона. Иглой стекло и пипетки используются для введения ДНК и быстрый зеленый краситель в развивающихся нервной трубки, то платиновые электроды расположены параллельно эмбриона и короткие электрические импульсы вводятся с генератора импульсов. Наконец, яйцо запечатанных скотчем и положил обратно в инкубатор для дальнейшего развития. Кроме того, видео показывает правильное хранение и обращение с яйцом и обсуждаются возможные причины эмбриона электропорации следующие потери.
Protocol
Яйцо обработке Яйца можно хранить при температуре 13 ° С не более одной недели до инкубации без значительной потери жизнеспособности (небольшой кулер вино идеально подходит для этой цели). До инкубации яиц позволяют нагреться до комнатной температуры, затем поместить в увлаж…
Discussion
Этот протокол обеспечивает пошаговое руководство для нейронных электропорации трубки HH10 куриных эмбрионов. В дополнение к показу техники, рекомендации по хранению и обработке яиц также предоставляется. Эта методика имеет широкий спектр применения для генетического анализа, а легкость и низкая …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Chicken egg incubator
humidified, set to 37.80°C (100F).
Pulse generator
Genetronics
BTX T820
Square wave generator or comparable
Electrodes
our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart
Connecter cables
Micromanipulator
Dissecting scope
with large working distance
Glass capillaries
and capillary puller or commercial glass needles
Leibovitz’s L-15 media
chicken eggs
fertilized
Curved scissors
10 ml syringe
Large bore needle
16-18G
Mouth pipette
India ink
Insulin syringe/syringe
Plasmid DNA
≥ 1µg/µl in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye