HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations
Summary
Ovo elektroporasyon Civciv kuş embriyonun genetik manipülasyon sağlayan bir tekniktir. Bu tekniğin yaygın uygulamalar genlerin fonksiyonel analiz ve olası artırıcı unsurları içerir. Bu video HH 10 civciv embriyosunda nöral tüp elektroporasyon göstermektedir. Enjeksiyon tekniği ve uygun yumurta taşıma tartışılmıştır.
Abstract
Büyük boy ve tavuk embriyo dış gelişimi kadar değerli bir araç gelişimsel biyoloji çalışma yaptık. Piliç, moleküler biyoloji teknikleri gelişiyle ile gen regülasyonu ve fonksiyonu incelemek için yararlı bir sistem haline gelmiştir. , Genler, gelişmekte olan tavuk embriyonun içine DNA veya RNA yapıları electroporating ifade veya in vivo gen fonksiyonu analiz etmek için yere serdi. Benzer şekilde, muhabir yapıları kaderi haritalama için kullanılan ya da varsayılan gen düzenleyici unsurları incelemek. Fare benzeri deneyler karşılaştırıldığında, civciv elektroporasyon, hızlı, kolay ve ucuz olma avantajları vardır. Bu video ilk embriyo kabuğu işlemek için bir pencere nasıl gösteriyor. Sonra, embriyo, embriyo altına enjekte Hindistan mürekkep bir çözelti ile görüntülendi. Bir bardak iğne ve pipet gelişmekte olan nöral tüp, daha sonra platin elektrotlar embriyo paralel olarak yerleştirilir ve kısa bir darbe jeneratörü elektrik darbeleri ile yönetilmektedir DNA ve Hızlı Yeşil boya enjekte etmek için kullanılır. Son olarak, yumurta bandı ile mühürlenir ve daha da geliştirilmesi için bir inkübatör içine geri yerleştirilir. Ayrıca uygun yumurta depolama ve işleme, video gösterileri ve embriyo kaybı aşağıdaki elektroporasyon olası nedenleri açıklanır.
Protocol
Discussion
Bu protokol HH10 civciv embriyosunda nöral tüp elektroporasyon için bir adım adım kılavuz sağlar. Tekniği gösteren ek olarak, yumurta taşıma ve depolama için kılavuzlar da verilir. Bu teknik, genetik analizi için geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir ve deney kolaylığı ve düşük maliyetli birçok laboratuvar için de uygun hale getirir.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken egg incubator | humidified, set to 37.80°C (100F). | |||
| Pulse generator | Genetronics | BTX T820 | Square wave generator or comparable | |
| Electrodes | our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart | |||
| Connecter cables | ||||
| Micromanipulator | ||||
| Dissecting scope | with large working distance | |||
| Glass capillaries | and capillary puller or commercial glass needles | |||
| Leibovitz’s L-15 media | ||||
| chicken eggs | fertilized | |||
| Curved scissors | ||||
| 10 ml syringe | ||||
| Large bore needle | 16-18G | |||
| Mouth pipette | ||||
| India ink | ||||
| Insulin syringe/syringe | ||||
| Plasmid DNA | ≥ 1µg/µl in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye |
References
- Itasaki, N., Bel-Vialar, S., Krumlauf, R. 'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression. Nat Cell Biol. 1, 203-207 (1999).
