Estamos a descrever um novo método de isolamento de DNA genómico a partir de sangue total recolhido de plasma / sorologia. Após a coleta de plasma, o sangue compactado é geralmente descartado. O novo método represente uma melhoria significativa em relação aos métodos existentes e torna o ADN disponível e de plasma a partir de um único conjunto, sem solicitar sangue adicional.
Testes de laboratório pode ser feito nas porções celulares ou fluidos do sangue. O uso de diferentes tubos de colheita de sangue determina a porção do sangue que pode ser analisada (sangue completo, plasma ou soro). Os laboratórios que participam no estudo da base genética de doenças humanas dependem de sangue inteiro anti-coagulado recolhido em EDTA vacutainer contendo como fonte de ADN para a análise genética / genómico. Porque a maioria dos laboratórios clínicos realizar testes bioquímicos, sorológicos e virais, como um primeiro passo na investigação fenotípica resultado, o sangue anticoagulado é também recolhida no tubo contendo heparina (tubo de plasma). Portanto, quando o ADN e de plasma são necessários para a análise simultânea e em paralelo de dados, tanto ao genoma e proteoma, é comum recolher o sangue em EDTA e ambos tubos de heparina. Se o sangue pode ser recolhido num tubo e servir como uma fonte de plasma e de DNA, que o método poderia ser considerado como um avanço à metanfetamina existenteods. A utilização do sangue compactados, após extracção de plasma representa uma fonte alternativa de ADN genómico, minimizando assim a quantidade de amostras de sangue e processadas a redução do número de amostras necessário para cada paciente. Este acabaria por economizar tempo e recursos.
O sistema de coleta de sangue P100 BD para a preservação proteínas plasmáticas foram criados como um método melhorado ao longo plasma anterior ou recolha de soro tubos 1, para estabilizar o teor de proteína do sangue, permitindo uma melhor descoberta de biomarcadores de proteínas e proteômica experimentação a partir de sangue humano. Os tubos P100 BD contêm 15,8 ml de K2EDTA seca por pulverização e um vasto espectro de propriedade liofilizado coquetel de inibidores de protease para impedir a coagulação e estabilizar as proteínas do plasma. Eles também incluem um separador mecânico, que proporciona uma barreira física entre o plasma e os sedimentos celulares após centrifugação. Alguns métodos foram desenvolvidos para extrair DNA de sangue coagulado SAmples coletadas em tubos de plasma de idade 2-4. Os desafios de estes métodos foram associados principalmente com o tipo de separador no interior dos tubos (separador de gel) e às dificuldades na recuperação do sangue coagulado, o inconveniente de fragmentação ou de dispersão do coágulo e obstrução do coágulo por extracção do gel de separação.
Nós apresentamos o primeiro método que extrai e purifica o DNA genômico de sangue coletado nos novos tubos BD P100. Comparamos a qualidade da amostra de ADN a partir de P100 tubos para que a partir de tubos com EDTA. Nossa abordagem é simples e eficiente. Ela envolve quatro passos principais como se segue: 1) o uso de um BD P100 plasma (BD Diagnostics, Sparks, MD, USA) com separador mecânico de tubos para colheita de sangue, 2) a remoção do separador mecânico usando uma combinação de sacarose e um clipe estéril gancho metálico, 3) a separação da camada de cobertura amarelada que contém os glóbulos brancos e 4) o isolamento do ADN genómico dobuffy coat usando um kit de extração de DNA comercial regular ou um protocolo padrão similar.
Muitas doenças humanas têm causas genéticas e explorar a base genética da doença humana exige uma crescente DNA de alta qualidade. A fonte mais comum de ADN utilizado em estudos genéticos se sangue total anticoagulado. Porque maioria dos laboratórios clínicos realizar testes bioquímicos, sorológicos e viral como um primeiro passo na investigação da evolução fenotípica, o sangue é muitas vezes coletado em um tubo de plasma. Após a recolha do plasma, o sangue compactado é frequentemente descartados. Port…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number |
BD P100 tubes | BD Diagnostics | 366448 |
EDTA tubes | BD Diagnostics | 367863 |
Sucrose | Sigma | S9378 |
Paper clip | Office product | |
15 ml tube | Corning | 430052 |
Red blood cells (RBC) | Qiagen | 158389 (kit) |
Phosphate Buffer Saline (PBS) | Thermo Scientific | SH30256.01 |
BioSprint 96 DNA Blood Kit (48) | Qiagen | 940054 |
1.7 ml microtubes | Axygen | MCT-175-C |
Human Immuno DNA Analysis BeadChip Kit | Illumina | WG-352-1001 |
Bead array reader | Illumina | NA |
GenomeStudio Software | Illumina | N/A |