Wir beschreiben eine neue Methode zur Isolierung von genomischer DNA aus Vollblut für Plasma / Serologie gesammelt. Nach Plasma-Sammlung wird die verdichtete Blut in der Regel verworfen. Unsere neue Methode stellt eine signifikante Verbesserung gegenüber bestehenden Verfahren und macht DNA und Plasma von einem einzigen Sammlung, ohne Anforderung zusätzlicher Blut.
Labortests können auf zellulärer oder Fluidanteile des Blutes erfolgen. Die Verwendung unterschiedlicher Blutsammelröhrchen bestimmt den Anteil des Blutes, das analysiert werden kann (Vollblut, Plasma oder Serum). Laboratories in das Studium der genetischen Grundlagen menschlicher Erkrankungen beteiligt vertrauen auf antikoaguliertes Vollblut in EDTA-haltige vacutainer als Quelle der DNA für genetische / genomische Analyse gesammelt. Da die meisten klinischen Laboratorien, biochemische und serologische viraler Tests in einem ersten Schritt in phänotypischen Ergebnis Untersuchung durchzuführen, wird auch in Antikoagulans Heparin-haltigen Rohr (Plasmarohr) gesammelt. Daher, wenn die DNA-und Plasma für simultane und parallele Analysen sowohl Genomik und Proteomik-Daten benötigt werden, ist es üblich, Blut sowohl EDTA und Heparin Röhrchen zu sammeln. Wenn Blut in einem Röhrchen gesammelt werden konnte und als Quelle für Plasma und DNA, würde das Verfahren als eine Weiterentwicklung bestehender meth werdenODS. Die Verwendung des verdichteten Blut nach Plasmaextraktion stellt eine alternative Quelle für genomische DNA und damit Minimierung der Menge von Blutproben verarbeitet und die Verringerung der Anzahl von Proben von jedem Patienten erforderlich. Dies würde letztendlich Zeit und Ressourcen sparen.
Der BD P100 Blutentnahme für Plasmaprotein Erhaltung wurden als ein verbessertes Verfahren gegenüber früheren Plasma oder Serum-Röhrchen 1 erstellt haben, um den Proteingehalt des Blutes zu stabilisieren, was eine bessere Protein Biomarkern und Proteomik Experimente aus menschlichem Blut. Die BD P100 Röhrchen enthalten 15,8 ml sprühgetrockneten K2EDTA und eine lyophilisierte proprietären breites Spektrum Cocktail von Protease-Inhibitoren zur Verhinderung der Koagulation und Stabilisierung der Plasmaproteine. Sie umfassen auch eine mechanische Trennvorrichtung, die eine physische Barriere zwischen Plasma und Zellpellets nach Zentrifugation stellt. Nur wenige Methoden wurden entwickelt, um DNA aus geronnenes Blut sa extrahierenmples in alten Plasmaröhrchen 2-4 gesammelt. Herausforderungen von diesen Methoden wurden hauptsächlich mit der Art der Separator im Inneren der Rohre (Gel-Separator) zugeordnet ist und inklusive Schwierigkeiten bei der Gewinnung des geronnenen Blut, die Unannehmlichkeiten der Fragmentierung oder Dispergieren des Gerinnsels und Behinderung des Gerinnsels durch Extraktion des Trenngels.
Wir präsentieren die erste Methode, die extrahiert und reinigt genomischer DNA aus Blut in den neuen BD P100 Rohre gezogen. Wir vergleichen die Qualität der DNA-Probe von P100 Röhren dass von EDTA. Unser Ansatz ist einfach und effizient. Es handelt sich um vier große Schritte wie folgt: 1) die Verwendung eines Plasmas BD P100 (BD Diagnostics, Sparks, MD, USA) Rohr mit mechanischen Abscheider für die Blutentnahme, 2) die Entfernung des mechanischen Abscheider mit einer Kombination aus Saccharose und eine sterile Büroklammer Metallhakgen, 3) die Abtrennung des buffy coat Schicht, die die weißen Zellen und 4) die Isolierung der genomischen DNA aus derBuffy-Coat mit einem normalen kommerziellen DNA-Extraktions-Kits oder eine ähnliche Standard-Protokoll.
Viele menschliche Erkrankungen genetische Ursachen haben und die Erforschung der genetischen Grundlagen von Erkrankungen des Menschen verlangt eine zunehmende hochwertige DNA. Die häufigste Quelle von DNA in genetischen Studien verwendet wird Vollblut Antikoagulation. Da die meisten klinischen Labors biochemische, serologische und viraler Tests durchzuführen, wie in einem ersten Schritt phänotypische Untersuchung Ergebnis wird das Blut oft in einem Plasma-Röhrchen gesammelt. Nach der Entnahme des Plasmas wird der ve…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number |
BD P100 tubes | BD Diagnostics | 366448 |
EDTA tubes | BD Diagnostics | 367863 |
Sucrose | Sigma | S9378 |
Paper clip | Office product | |
15 ml tube | Corning | 430052 |
Red blood cells (RBC) | Qiagen | 158389 (kit) |
Phosphate Buffer Saline (PBS) | Thermo Scientific | SH30256.01 |
BioSprint 96 DNA Blood Kit (48) | Qiagen | 940054 |
1.7 ml microtubes | Axygen | MCT-175-C |
Human Immuno DNA Analysis BeadChip Kit | Illumina | WG-352-1001 |
Bead array reader | Illumina | NA |
GenomeStudio Software | Illumina | N/A |