Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Granulocyt-afhængig autoantistof-induceret vabler

Published: October 12, 2012 doi: 10.3791/4250

Summary

I dyremodellen beskrevet i vores foreliggende arbejde, oprenset IgG-antistoffer mod en strækning på 200 aminosyrer (aa 757-967) af kollagen VII injiceres gentagne gange i mus gengiver blærer fænotype såvel som histo-og immunpatologiske karakteristiske for menneskers epidermolysis bullosa acquisita (EBA)

Abstract

Autoimmune fænomener forekommer hos raske personer, men når selvtolerance mislykkes, kan det autoimmune respons resultere i specifikke patologi. Ifølge Witebsky s postulater, et af kriterierne i diagnosticering af en sygdom som autoimmune er reproduktion af sygdommen hos forsøgsdyr ved passiv overførsel af autoantistoffer. For epidermolysis bullosa acquisita (EBA), en prototypisk organspecifik autoimmun sygdom i hud og slimhinder, blev adskillige eksperimentelle modeller for nylig fastslået. I dyremodellen beskrevet i vores foreliggende arbejde, oprenset IgG-antistoffer mod en strækning på 200 aminosyrer (aa 757-967) af kollagen VII injiceres gentagne gange i mus gengiver blærer fænotype såvel som histo-og immunpatologiske karakteristiske for menneskers EBA 1. Egentligt udbredt sygdom ses sædvanligvis 5-6 dage efter den første injektion og omfanget af sygdommen korrelerer med dosen af ​​den indgivne collagen VII-specifikt IgG. Den vævsbeskadigelse (blæredannelse) i den eksperimentelle EBA er afhængig af rekruttering og aktivering af granulocytter ved vævs-bundne autoantistoffer 2, -4. Derfor er denne model muliggør dissektion af granulocyt-afhængige inflammatoriske pathway involveret i den autoimmune vævsskade, som model reproducerer kun den T-celle-uafhængig fase af efferente autoimmunrespons. Endvidere er dens værdi understreges af en række undersøgelser, som viser blister-fremkaldende potentiale af autoantistoffer in vivo og undersøge mekanismen for blæredannelse i EBA 1,3, -6. Endelig vil denne model høj grad lette udviklingen af ​​nye antiinflammatoriske behandlinger i autoantistof-inducerede sygdomme. Samlet set passiv overførsel dyremodel af EBA er en tilgængelig og lærerig sygdom model og vil hjælpe forskerne til at analysere ikke blot EBA patogenese, men at besvare fundamentale biologisk og kliniskvæsentlige autoimmunitet spørgsmål.

Protocol

1. Fremstillinq af patogene antistof

Bemærk: Rensning og koncentration af antistofferne bør udføres samme dag, som antistoffer ikke skal lagres i 0,1 M glycin pH 2,5-3 (elueringspuffer) natten over (ON).

Affinitetsoprensning af IgG: anvende 25 ml immunt kaninserum:

  1. Optø kaninserum ON ved 4 ° C, blandes 1:1 med 1X PBS (løbebuffer) og centrifugeres den ved 1260 x g i 10 minutter ved 20 ° C. Eventuelt kan et filtreringstrin med filtrerpapir medtages efter centrifugering, hvis serum er fede.
  2. I mellemtiden vaskes protein G-matrixen fyldt kolonne med 10 lejevolumener (lejevolumen = matrix volumen) af 1XPBS (løbebuffer).
  3. Anvende den fortyndes og filtreres serum til søjlen og inkuber 1 time på rocking platform ved stuetemperatur (RT).
  4. Opsaml gennemstrømnings-(FT) i et 50 ml Flakon rør. Smid ikke det indtil fusionenog titer af den oprensede IgG er kendt.
  5. Vaskes matrixen med 5 søjlevolumener 1XPBS og i mellemtiden fremstilling af 50 ml Falcon-rør til opsamling af det eluerede IgG-fraktion. Pipetter 1 ml pH neutraliserende buffer: 1 M Tris pH 10 i hvert rør (ellers forholdet 1:20 TRIS-buffer i forhold til mængden af ​​eluat som skal opsamles).
  6. Anvendelse 100-150 ml elueringspuffer: 0,1 M glycin pH 2,5-3 til søjlen og opsamles 50 ml fraktion (er). Vend røret 2-3x, måle pH og tilføje neutraliserende buffer, indtil du har nået pH 7,2-7,4.
  7. Collect få dråber IgG eluat og ved hjælp af elueringspufferen som etalon måle OD ved 280 nm. Hvis OD er ​​<0,1 stoppe opsamlingen.
  8. Regenerere protein G matrix og opbevares i overensstemmelse med producentens anvisninger.

Koncentration ved ultrafiltrering med Amicon rør:

  1. Vask Amicon Ultra (15 ml / 30 KDa) ultrafiltrering rør med 1XPBS ved centrifugering 15-20 minved 3220 x g ved 4 ° C. Kassér FT fra Amicon.
  2. Fyld Amicons med 15 ml elueret IgG-fraktion og centrifugeres i 25-30 minutter ved 3.220 x g og 4 ° C, centrifugering tid afhænger altid af proteinindholdet af eluatet.
  3. Kassér FT og gentag ultrafiltrering indtil du har ingen elueret fraktion tilbage.
  4. Vask koncentreret IgG omfattende to gange med 1X PBS 25-30 min ved centrifugering.
  5. Opsaml "sticky", gullig antistofopløsning fra Amicon filter i et slutvolumen på 1500-2000 ul 1X PBS.
  6. Foranstaltning koncentrationen af ​​IgG præparat anvendelse af et spektrofotometer eller NanoDrop:
    Conc. (Mg / mL) = A (280 nm) x fortyndingsfaktor / 1,4
  7. Vask og lagre Amicons efter fabrikantens anvisninger.

2. Injektion af kollagen VII-specifikt IgG i mus

Før du starter den egentlige eksperimentelle procedure, sørg for, at den eksperimentelle protocol er skrevet og alle materialer er forberedt til eksperimentet.

  1. Forbered datablade for sygdommen scoring, ELISA'er, immunofluorescens (IF) analyse og myeloperoxidase (MPO) assay 4.
  2. Mærk rørene for blod og organer, cryomolds samt histologi forarbejdning og indlejring kassetter.
  3. Antistoffet opløsninger skal tilberedes frisk eller optøet fra lager og karakteriseret med hensyn til deres reaktivitet (titer ved IF mikroskopi og / eller ELISA). Den sterilfiltrerede antistofopløsning bør fortyndet i PBS på en sådan måde, at den krævede dosis til injektion varierer mellem 250-1000 ul. Sørg for at du har nok IgG til at udføre hele eksperimentet.
  4. Fremstilles frisk antikoagulerende: heparin 20 U / ml og 8,7 mg / ml ketamin / 1,3 mg / ml xylazin blandingen til anæstesi. Når ofre mus har mærket rør med forberedt 3,7% formaldehyd.
  5. Steriliser kirurgiske instrumenter (skalpel, saks, fine point og Curved forcipes) og forberede sprøjter (insulinsprøjter, 1 og 2 ml sprøjter), nåle, digital kamera og ekstra hukommelseskort.

Bemærk: Udfør alle procedurer på ketamin / xylazin eller isofluran narcotized mus Isofluran er den foretrukne anæstesi mulighed for de daglige hud checks, som mus inddrive hurtigt.. Imidlertid til optagelser, 87 mg / kg ketamin og 13 mg / kg xylazin normalt injiceres subkutant. Til eutanasi af ketamin / xylazin doseringen øges til 130 mg / kg ketamin og 20 mg / kg xylazin.

  1. Kontroller de allerede markeret dyr for deres helbredstilstand, hud og pels udseende, veje dem og måle deres øretykkelse (altid holde sig til den samme øre).
  2. Tilmeld observerede værdier og ændringer i den kliniske evaluering ark.
  3. Opsaml 20-30 pi (2-3 dråber) blod fra halevenen i en sprøjte indeholdende den samme mængde antikoaguleringsmiddel.
  4. Desinficer pelsen oghud under anvendelse af 80% ethanol.
  5. Injicer antistofopløsning subkutant i ryggen ved hjælp af en insulinsprøjte. (For visse steder (fx ørerne) kun små mængder (10-50 pl) er muligt at blive injiceret.)

Injektioner bør gentages hver anden dag, 4 gange. Balb / c og C57BL6-mus med en legemsvægt på ca 20 g begynde at udvikle sygdommen 3-4 dage efter den første administrering af 400-500 op til 750 ug / g kropsvægt / injektion autoantistoffer.

Når du afslutter eksperimentet:

  1. Sættes musene under dyb narkose ved injektion af 130 mg / kg og 20 mg / kg ketamin / xylazin subkutant, exsanguinate dem fra den bageste vena cava og skæres hjertet ud.
  2. Saml organer / vævsprøver såsom hud: hale, øre, blod og spiserør, og læg dem i tidligere mærkede og PBS eller 3,7% formaldehyd fyldt rør.

Når du vender tilbage til detlaboratorium:

  1. Centrifugér blodet ved 1.200 xg, 10 min ved stuetemperatur til særskilt plasma, overføre plasmaet til korrekt mærkede rør og gemme dem i overensstemmelse hermed.
  2. Integrer hudbiopsi i Optimal Cut Temperatur medium ved hjælp cryomolds, korrekt etiket, og opbevar dem ved -80 ° C.
  3. Placer vævsprøver betød til histologi i de mærkede indlejring forme og holde dem i 3,7% formaldehyd indtil paraffin indlejring.

3. Klinisk Evaluering af sygdommens sværhedsgrad

Mus bør undersøges dagligt for læsioner hud og slimhinder, og resultaterne skal registreres ved hjælp af passende former. Kriterierne for tidlig eutanasi er hudlæsioner, der påvirker mere end 20% af kroppens overflade og et vægttab på 5-10% af den totale legemsvægt i tre på hinanden følgende dage, regnet for en sygdom score på 5 (tabel 1).

  1. Anbring musen på sin mave. Starte med hovedet området, nemlig med den rigtigeøre og kontrollere for blærer, erosioner, skorpe på den indvendige og på den udvendige side. Fortsæt på samme måde med det venstre øre.
  2. Højre og venstre øje er kontrolleret for tegn på erythem, alopeci, erosioner og / eller skorpe.
  3. Pande og snude område er børstet igennem næste, fortsætter med den ventrale del af snude, læbe og slimhinden i munden.
  4. Undersøg højre forben startende fra pote, bevæger sig opad, skifte til venstre forben. Samme procedure med højre og venstre bagben.
  5. Børst gennem pelsen på halsen og ryggen med en buet fin spids pincet.
  6. Vend musen på ryggen og kontrollere den ventrale del og de ventrale sider af benene på samme måde som tidligere.
  7. Tjek halen.
  8. Tag billeder af karrosseridele, hvor musene udvikler sygdommen. Man skal være opmærksom på kvaliteten og kvantiteten af ​​billederne.
  9. Beregn de kliniske sygdomsklassificeringer.

4. Analyse af Hud-og plasmaprøver

  1. Forbered, gemme og / eller behandle alle indsamlede væv i henhold til planen.
  2. Skær frosne vævssnit for IF påvisning af kaninantistoffer og mus komplement systemkomponenter.
  3. Analysere de forskellige protein-og enzym-indhold (MPO assay) af frosset væv og / eller organekstrakter.
  4. Afsnit af paraffinindlejret væv og farvet med H & E for at visualisere omfanget af vævsskade.
  5. Analyser plasmaet ved ELISA, immunoblot.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Den passive overførsel af antigen-specifikke antistoffer resulterer i en fuldstændig blæst sygdom i mus, der ligner på kliniske, histologiske og immunpatologiske niveauer den humane EBA. Vabler, skorper, erosioner og alopeci udvikle sig på ørerne, snude, poter, ben, ryg og omkring øjnene af mus. De første kliniske tegn på sygdommen vil sandsynligvis blive vist på ørerne og / eller hoved-området. Deposition af specifik kanin IgG, og mus komplement C3 påvises ved direkte IF på den dermale epidermale krydset i kryosektioner af perilesional hud. I lesional hud subepidermal vabler og inflammatoriske infiltrat ses ved histologi.

Hvis injektionen af ​​patogene collagen VII-specifikke antistoffer afbrydes, sygdommen effekt gradvist lavere, og inden for flere uger læsioner heles. Ikke desto mindre kan en vis grad af postinflammatory cicatricial alopeci fortsætter uendeligt.

Characteriztion af det rekombinante autoantigen (og af patogene IgG)

Murin kollagen specifikt IgG bindes ved den dermale-epidermale overgang (figur 2B). Specificiteten bestemmes ved immunoblot (figur 2C, banerne 3, 4 og 7).

Scoring sygdomsaktivitet

Den kliniske evaluering af sygdommen er baseret på et pointsystem vi udviklet (tabel 1): 0, ingen læsioner, 1, mindre end 1% af hudoverfladen, 2, 1-5% af hudoverfladen, 3, 5 - 10% af hudoverfladen, 4, 10-20% af hudoverfladen påvirkes. IgG mod murin kollagen VII inducerer kutane læsioner såsom erytem, ​​alopeci, vabler, erosioner, skorper på ører, øjne, snude, lemmer og krop på Balb / c mus (Figur 3).

Analyse af vævs-bundne og cirkulerende collagen-specifikke antistoffer

Aflejring af kanin-IgG og muse-komplement C3 er detektorerted i frosne, perilesional vævssnit (figur 4D og E). De subepidermal vabler og det inflammatoriske infiltrat ses i histologiske prøver (fig. 4F). Cirkulerende kanin-antistoffer analyseres ved ELISA (fig. 5). Frosset væv og / eller organekstrakter analyseres ved forskellige assays for deres protein-og enzym-indhold (MPO assay).

Figur 1
Figur 1. Eller opbygning af in vivo blæredannelse induceret ved passiv overførsel af collagen VII-specifikke antistoffer. Kaniner immuniseres med murin kollagen VII og kanin IgG oprenses fra immunsera. Efterfølgende specifikke autoantistoffer injiceret subkutant i mus efter en injektion / blødning tidsplan. Mus bliver tjekket for den almene helbredstilstand og sygdomstegn dagligt.


Figur 2. Karakterisering af patogene collagen VII-specifikt IgG. Indirekte, hvis analyse af salt-split normale muse hudsektioner inkuberet med præ-immunt kaninserum og med murine collagen VII-specifikke immun kaninserum resulterer i nogen deposition (A) og deposition af autoantistoffer på de dermal epidermal junction (B), henholdsvis. De specifikke antistoffer genkender antigenet (e) de er dannet mod, når immunoblot med et sæt af overlappende rekombinante murine collagen VII fragmenter udføres (C, bane 3, 4 og 7).

Figur 3
Figur 3. Klinisk evaluering af mus. IgG til murine kollagen VII inducerer kutane læsioner såsom alopecia, vabler, erosioner, skorper på ørerne, øjnene, snude, liMBS og stammen af ​​Balb / c mus (AD). Mus injiceret med specifikke autoantistoffer nå en score på 4, mens dem, der var injiceret med NRIgG eller Abs mod et indifferent protein havde en score på 0 (E). Den kliniske score blev beregnet som følger: 0, ingen læsioner, 1, mindre end 1% af hudoverfladen, 2, 1-5% af hudoverfladen, 3, 5-10% af hudoverfladen, 4, 10 - 20% af hudoverfladen påvirkes. Vægttab på 5-10% af den totale legemsvægt i tre på hinanden følgende dage tæller som et ekstra punkt i det endelige resultat.

Figur 4
Figur 4. Histo-og immunpatologiske fund i mus injiceret med collagen VII-specifikt IgG. Deponering af kanin-IgG (D), og muse-komplement C3 (E) detekteres ved direkte IF på den dermale epidermal junction i kryosektioner af perilesional huden in vivo. I lesional hud subepidermal vabler og inflammatoriske infiltrate ses ved histologi (F). Ingen aflejring af kanin-IgG (A), muse-komplement C3 (B), er heller ikke subepidermal blæredannelse ses i kontrollerne (C).

Figur 5
Figur 5. Immunoassay for plasma fra mus injiceret med collagen VII-specifikt IgG. Plasmaniveauet af cirkulerende kanin-antistoffer blev målt ved ELISA.

Tabel 1
Tabel 1. Skin blærer sygdom scoring ark. Klik her for at se større tabel .

Scoringssystem:

  • 0, ingen læsioner;
  • 1, mindre end 1% af hudoverfladen;
  • 2, 1-5% af hudoverfladen;
  • 3, 5-10% af huden surface;
  • 4 er 10-20% af hudoverfladen påvirket.

Ekstra hints når Scoring:

  • Vægttab på 5-10% af den totale legemsvægt i tre på hinanden følgende dage tæller som et ekstra punkt i den endelige score 17.
  • Erythema på ørerne, omkring øjnene på poter er bare de første tegn på en igangværende immunreaktion, hvis ikke parret med vabler eller alopeci de ikke kvantificerede, lige taget under observation.
  • Mærker på halen kan være bid eller kampen mærker, så hvis de er til stede fra begyndelsen af ​​deres forværring måske ikke nødvendigvis være på grund af sygdommen. Overvej grundigt vejr til at tælle dem!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den passive overførsel af autoantistoffer i forsøgsdyr er en vigtig fremgangsmåde til at demonstrere deres patogenicitet 7, -12. Dyremodeller, der opnås ved denne fremgangsmåde, foruden at være den indirekte bevis for autoimmunitet 13, tillader undersøgelsen af den efferente fase af den patogene mekanisme. Den passive transfer model af antistof-induceret granulocyt-afhængig hud blæredannelse epidermolysis bullosa acquisita (EBA) blev anvendt til at dissekere de mekanismer vævsskade ved autoimmune dermatoser. Det fremgik også, som en udsøgt lærerigt model sygdom til at undersøge grundlæggende, biologisk og klinisk afgørende aspekter af antistofmedieret organspecifikke autoimmune sygdomme, der strækker sig langt ud over grænserne for autoimmunitet mod kollagen VII. Endelig kan denne model anvendes til at undersøge grundlæggende biologiske og patofysiologiske processer, herunder basalmembran biologi, granulocyt aktivering af immunkomplekser end komplementaktivering.

Selv om flere forsøgsopstillingen, herunder ex vivo-og dyremodeller, er tilgængelige for den autoimmune hudsygdomme EBA 14, langt den mest egnede til at studere de granulocyt-afhængige inflammatoriske processer er den passive overførsel af autoantistoffer i dyr. I modsætning til ex vivo-model, hvor granulocytterne sættes til hudsektioner tidligere inkuberet med autoantistofferne 15, infiltrationen af leukocytter her er spontant gengivet af musene. Desuden, hvis vi vælger at arbejde med specifikke antistoffer mod antigenet i andre organismer, såsom kanin og ged, vi undgå problemet med begrænset patientsera tilgængelighed og vi har også en bedre chance for at reproducere komplementaktivering og granulocyt rekruttering 16.

For en vellykket reproduktion af granulocyt-afhængig blærer i passiv overførsel model EBA, er det vigtigt at være i stand til på passende score sygdomstegn, begyndende med erytem og ødem ved hjælp af vabler, erosioner med skorper og alopeci. Evalueringen af ​​mus er en proces, der skal tidligere lært. Den scoring af sygdommen skal udføres af den samme person, hele forsøget og altid udstationeret af en samarbejdspartner eller støtte person. Udvikling og anvendelse af et standardiseret pointsystem for hver eksperimentel sygdom er af største betydning. Vedlagte scoring ark skal give læseren et indblik, hvordan huden dermatoser evalueres i mus.

Hvornår udføres som vist i videoen, vil modellen af ​​autoantistof-induceret subepidermal blæredannelse høj grad lette den videre dissektion af granulocyt-afhængige inflammatoriske veje udløst af autoantistoffer og resulterer i vævsbeskadigelse. Dens værdi i medicinsk forskning er støttet af den lovende perspektiv for at udvikle og afprøve nye antigen-sPECIFIKKE T-og B-celle-målrettede anti-inflammatoriske terapier. Endelig vil det hjælpe med at besvare fundamentale biologisk og klinisk vigtige autoimmunitet spørgsmål.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklæret.

Acknowledgments

Forfatterne anerkender support af tilskud fra Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 og BIOSS fra det medicinske fakultet på Freiburg Universitet (til CS).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
recombinant antigen The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author.
immune rabbit serum www.eurogentec.com We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium.
Protein G agarose Roche Applied Science 11243233001
Balb/c mice Charles River Laboratories
OCT compound, Tissue-Tek Sakura Finetek 4583 OCT, optimal cutting temperature
Cryomold standard Sakura Finetek 4557 25 mm × 20 mm × 5 mm
Cryomold intermediate Sakura Finetek 4566 15 mm × 15 mm × 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette R. Langenbrinck 09-0503 Histology processing and embedding cassettes
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz H. Hauptnerund Richard Herberholz GmbH Co. KG 71492000 tattooing paste
Tatowierzange TZ1 EBECO E. Becker Co GmbH tattooing device
Heparin Carl Roth GmbH Co. 7692.1
Formaldehyde 37% Carl Roth GmbH Co. 7386
Ketamine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH K2753-1G
Xylazine hydrochloride Sigma-Aldrich Chemie GmbH X1251-1G
sterile PBS Biochrom L182-50
digital camera Nikon Coolpix 5400
Syringe driven filter unit 0.45 μm Millipore
Caliper Mitutoyo 7309 1667338 Farnell (distributor)
disease scoring sheet example enclosed

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
  2. Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
  3. Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
  4. Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
  5. Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
  6. Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
  7. Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
  8. Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
  9. Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
  10. Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
  11. Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
  12. Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
  13. Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
  14. Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
  15. Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
  16. Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
  17. Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).

Tags

Immunologi Medicin fysiologi anatomi dermatologi autoimmunitet kollagen VII inflammation ekstracellulær matrix Fc-receptor komplement granulocyt antistof
Granulocyt-afhængig autoantistof-induceret vabler
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C.More

Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C. Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering. J. Vis. Exp. (68), e4250, doi:10.3791/4250 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter