Summary
Verfahren zur Verabreichung von Arzneien intranasal zu erwachen Mäusen zum Zwecke der Ausrichtung des Gehirns beschrieben. Diese Methode ermöglicht wiederholten Gabe über einen längeren Zeitraum mit intranasale Verabreichung von Medikamenten ohne Narkose und Nase-zu-Hirn-Lieferung mit minimalen systemischen Exposition.
Abstract
Intranasale Verabreichung ist ein Verfahren zur Abgabe von therapeutischen Agenzien an das zentrale Nervensystem (ZNS). Es ist nicht-invasiv und erlaubt große Moleküle, die nicht über die Blut-Hirn-Schranke den Zugang zu den ZNS. Medikamente werden direkt an das ZNS mit intranasale Abgabe gezielte Verringerung der systemischen Exposition und somit unerwünschten systemischen Nebenwirkungen ein. Lieferung aus der Nase an das ZNS tritt innerhalb weniger Minuten sowohl entlang der olfaktorischen und trigeminalen Nervenbahnen über eine extrazelluläre Route und erfordert keine Drogen zu jeder Rezeptor oder axonalen Transport 2 binden. Intranasale Verabreichung ist ein weithin publizierten Methode und wird derzeit in klinischen Studien am Menschen 3 verwendet.
Intranasale Verabreichung von Medikamenten im Tiermodell ermöglicht Erstbewertung der pharmakokinetischen Verteilung und Wirksamkeit. Mit Mäusen, ist es möglich, Medikamente zu erwachen (nicht narkotisierten) Tieren verabreichen regelmäßig unter Verwendung eines speciasiert intranasale Griff. Awake Lieferung ist vorteilhaft, weil es für die langfristige chronische Dosierung ohne Betäubung erlaubt, es weniger Zeit in Anspruch nimmt als bei Anästhesie und kann gelernt und von vielen Menschen durchgeführt werden, so dass die Teams von Technikern dosieren kann eine große Anzahl von Mäusen in kurzen Zeiträumen. Wirksamkeit von Therapeutika intranasal in dieser Weise an Mäuse verabreicht wurde in einer Reihe von Studien einschließlich Insulin bei Diabetes-Mausmodellen 4-6 und Deferoxamin bei Alzheimer-Maus-Modellen nachgewiesen. 7,8
Die intranasale Grip für Mäuse kann gelernt werden, aber ist nicht einfach und erfordert Übung, Geschick und eine präzise Griff effektiv zu liefern Drogen auf das Gehirn und vermeiden Drainage in die Lunge und Magen. Mäuse werden von Hand mit einem modifizierten scruff im nicht-dominanten Hand mit dem Hals gehalten parallel zum Boden, während Arzneimittel mit einem Pipettor mit der dominanten Hand geliefert wird zurückgehalten. Es dauert in der Regel 3-4 Wochen akklimatisieren, um Handhabung vor Mäusenkann mit diesem Griff ohne Stress-Reaktion statt. Wir haben dieses JoVE Video vorbereitet, um diese intranasale Verabreichung Technik mehr zugänglich.
Protocol
Ein. Gewöhnung an die Handhabung für intranasaler Gabe zu Awake Mäuse
Einführung
Mäuse müssen, um die Handhabung während eines Zeitraums von zwei vier Wochen vor dem Beginn der intranasaler Gabe akklimatisiert werden. Gewöhnung an die Behandlung ist wichtig, da es hilft eine korrekte Körperhaltung für maximale Wirksamkeit wach intranasale Drug Delivery. Zusätzlich können Mäuse, die nicht ordnungsgemäß zu diesem Prozess gewöhnt haben eine schwere Angstzustände Reaktion nach der Dosierung. Mäuse sollten etwa 2-3 Tage auf jedem von neun Schritten, bevor der in die nächste Stufe auszugeben, abhängig von dem Tier, um die Handhabung Komfort. Die Maus Stress als Gradmesser des Fortschritts verwendet werden. Dies bedeutet, die Überwachung der Maus die Bewegungen, die Menge / Harndrang, Stuhlgang, Zittern, und Beißen. Wenn eine Maus hat eine hohe Stress-Reaktion, auf die Stufe bleiben, bevor in die nächste, bis die Antwort wird reduziert. Ein Beispiel Akklimatisierung schedule können in Tabelle 1 gesehen werden. Akklimatisierung der Mäuse sollte durch die folgenden einmal-a-day Schritte voran. Die Durchführung dieser Schritte mehr als einmal pro Tag, in einem Versuch, die Akklimatisierung zu beschleunigen, wird nicht empfohlen.
- Platzieren Sie die Maus in der Handfläche der Hand für einen Zeitraum von zwei bis drei Minuten, nicht mehr als einen Fuß vor den Käfig oben, wie die Tiere häufig während dieser einleitenden Schritt springen. Wenn die Maus versucht zu krabbeln aus der Hand und bis ein Arm, heben Sie einfach die Maus von der Basis des Schwanzes und setzen Sie ihn wieder in der Hand.
- Platzieren Sie die Maus in der Handfläche der Hand für drei Minuten und streicheln das Tier sanft. Haustier der Maus gerichtet vom Kopf bis zum Schwanz, während gleichzeitig das Tier frei bewegen.
- Platzieren Sie die Maus in der Handfläche der Hand für drei Minuten lang massiert hinter den Ohren (leicht kneifen zusammen die Haut auf der Rückseite des Halses mit dem Daumen und Zeigefinger).
- Halten / lift die Maus durch das Genick des Halses für 30 sec, lassen die Maus ruhen auf dem oberen Käfig für 30 Sek. vor der Wiederholung des Laderaumes erneut.
- Halten Sie die Maus über die intranasale Griff, die in Abschnitt 2 beschrieben, aber nicht invertieren das Tier (komplett bis zu 2,4 Schritt). Halten des Tieres, wie dies für eine Dauer von 30 Sek. und freizugeben zurück zur Oberseite des Käfigs. Wiederholen Sie ein zweites Mal nach einer Minute Ruhezeit.
- Halten Sie die Maus mit der intranasalen Griff wie in Abschnitt 2 beschrieben, einschließlich Umdrehen des Tieres so seine Bauchseite nach oben in Richtung Decke. Stellen Sie sicher, dass das Tier den Hals parallel zum Boden ist. Halten Sie diese Position für 30 Sekunden. Wiederholen Sie diesen Vorgang ein zweites Mal nach einer Minute Ruhezeit. Einige Mäuse widerstehen intranasale Grip mehr als andere, vor allem, wenn zum ersten Mal mit einer Inversion bei diesem Schritt in der Akklimatisierung verwendet. Wenn die Maus befreit sich aus dem Griff, legen Sie die Maus wieder auf den Käfig oben und re-Griff. Wiederholen Sie die re-grip, wenn nötig, Sondern überwachen den Stress der Maus aus und senden es an den Käfig, wenn nötig. Ein weiterer Faktor, der eine Rolle in dem Verlust der Haftung an dieser Stelle in der Akklimatisierung Prozess spielen können, ist Unerfahrenheit der Tierpfleger mit dem intranasale Verabreichung Technik.
- Halten Sie die Maus mit der intranasalen Griff, invertieren, kurz legen Sie eine Pipette mit einem leeren Spitze über jedes Nasenloch, und halten Sie die Tiere Position für 30 Sekunden. Wiederholen Sie diesen Vorgang nach einer ein-minütige Pause.
- Halten Sie die Maus mit der intranasalen Griff, invertieren, und intranasal administrieren 6 ul Kochsalzlösung in den linken und rechten nare, wie in Abschnitt 3 (bis Schritt 3,7) beschrieben.
- Halten Sie die Maus mit der intranasalen Griff, invertieren, und intranasal administrieren 6 ul Kochsalzlösung in den linken und rechten nare zweimal indem das Tier wieder auf den Käfig oben dazwischen, wie in Kapitel 3 beschrieben.
2. Die intranasale Grip zu Awake Mäuse Unbeweglichkeitseffekt
- Platzieren Sie die Maus on der Käfig oben.
- Mit dem Daumen und Zeigefinger der dominanten Hand, halten Sie die Maus durch den Schwanz. Verwenden Sie Ihre Mittelfinger, Ringfinger und kleinen Finger Finger, leicht Pin den unteren Teil des Körpers, um den Käfig nach oben (Abbildung 1A). Lassen Sie die Maus auf die Stangen zu greifen, wie Sie strecken leicht die Maus aus und besser greifen die scruff.
- Mit dem Daumen und Mittelfinger auf dem nicht-dominanten Hand, kneifen Sie die Maus fest im Genick (überschüssige Haut) hinter dem Nacken und Schultern. Ziehen Sie die lose Haut, um ein Zelt der Haut über den Schulterblättern (Abbildung 1B) zu machen. Nehmen Sie so viel Haut wie möglich, aber seien Sie vorsichtig, nicht zu ziehen up Muskel als dieses Unbehagen an der Maus führt. Vorsicht, um nicht zu viel Druck auf das Tier Brustkorb und Wirbelsäule. Übermäßiger Druck oder Ziehen der Haut kann zu einer Hemmung der Atmung in einigen Fällen führen.
- Schnell stellen Sie den Zeigefinger der nicht-dominanten Hand auf der Maus den Kopf, alsin der Nähe der Nase, wie möglich und ziehen Sie die Haut (1C, 1D). Gleichzeitig schieben den Daumen und Mittelfinger in Richtung des Kopfes zur optimalen Position. Idealerweise sollte die Maus nicht in der Lage, den Kopf vertikal oder horizontal zu bewegen.
- Unter Beibehaltung der Halt auf dem Genick, drehen Sie die Maus auf den Rücken. Die Maus Rücken sollte in der Handfläche von Ihrer Hand. Halten Sie das Mäuseschwanz (in der Nähe des Sockels) gegen Ihre Handfläche mit Ihrem letzten zwei Fingern (Ring-und kleinen Finger), um die Maus zu stabilisieren, oder Sie können Ihre Finger über die untere Körperhälfte (1E, 1F) wickeln.
- An diesem Punkt stellen Sie sicher, dass die Maus den Hals und Kinn flach und parallel zum Boden sind. Das Kinn sollte nahe bei einem 180 °-Winkel mit dem Hals so weit wie möglich mit intranasale Abgabe zu unterstützen. Leichte Veränderungen in Winkel kann das Medikament bis zum Ende in der falschen Stelle. Achten Sie darauf, die Maus ist in der Lage, durch die Beobachtung der Bauch atmen. Die Maus should nicht in der Lage sich zu bewegen, aber sollte bequem sein und keine Schmerzen. Wenn Sie die Maus um den Hals und Kinn, einen "V" zu sehen, dann müssen Sie re-Griff.
3. Intranasale Verabreichung von Drogen an Awake Mäuse
Einführung
Verwendung der intranasalen Griff, wird jede Maus zweimal gehalten und zurückgehalten mit ihrem Hals parallel zu dem Boden, während ein Volumen von 20 bis 30 ul Flüssigkeit verabreicht wird. Dieses Volumen ist sicher und wirksam für kleine-große Mäuse, wir verwenden in der Regel 24 ul, und das ist in diesem Protokoll beschrieben. Die wach intranasale Methode kann bei Mäusen jeden Alters benutzt werden, zum Beispiel in neugeborene Mäuse für Entwicklungsbiologie neurowissenschaftlichen Forschung. Bei neugeborenen Mäusen, sollte ein kleineres Gesamtvolumen (8 ul) und Tröpfchengröße (1 ul) verwendet, um die kleineren Volumen der Nasenhöhle unterzubringen. Drug wird in der Regel zwei Mäuse in einer Zeit geliefert, abwechselnd Ruhezeiten, um die effizienteste Nutzung der Zeit machen und zu halten on Zeitplan. Set-up wird ein wenig anders, je nachdem ob Sie Dosierungsgruppe untergebracht Mäusen oder einzeln untergebracht Mäusen sein. Mit den einzeln untergebracht Mäuse, ist es hilfreich, alle Ihre Materialien zwischen den Käfigen, Mäuse vor der Kreuzung auf die andere Käfig oben zu verhindern platzieren. Mit der Gruppe gehaltenen Mäusen, die Dosis von diesem Käfig nur. Es ist wichtig, dass jede Maus in einer Gruppe-Käfig untergebracht dieselbe intranasale Behandlung erhält, als Potenzial für eine Kreuzkontamination von zwei unterschiedlichen Behandlungen besteht aufgrund Medikament Austreibevorrichtung in die Luft oder mit Hautkontakt. Es wird dringend empfohlen, dass eine Dosierung Blatt im Voraus gedruckt werden, um Technikern der Behandlung Aufgaben zu erinnern, keine Noten verpasst Tropfen aufzunehmen, um die allgemeine Gesundheit eines jeden Tieres, etc. beachten
Treppe
- Richten Sie Käfigen, in denen sie für die Dosierung sein, und sollte ein Dosierstation (Abbildung 2).
- Entfernen Sie mit der Maus aus dem Käfig und halten auf Käfig oben während der Dosierung.
- Pick-up mit der Maus über die intranasale Griff in Abschnitt 2 beschrieben.
- Mit Ihrer dominanten Hand, laden Sie die Pipette mit 6 ul von Drogen-oder Fahrzeug. Setzen Sie die Spitze des gefüllten Pipette in der Nähe der Maus linke Nasenloch, in der Regel in einem 45-Grad-Winkel (Abb. 1G, 1H). Wenn Sie eine viskose Lösung zu haben, müssen Sie möglicherweise Ihren Winkel bis 90 Grad zu erhöhen, weil das Medikament laufen an der Seite der Pipettenspitze anstatt einen Rückgang. Wenn sehr viskos ist, kann das Abwischen der Pipettenspitze mit einem Taschentuch vor dem Ausstoßen von Flüssigkeit zu helfen. Langsam wirft die Droge ein kleines Tröpfchen mit etwa der Hälfte des Volumens (3 ul) zu bilden.
- Der Tropfen sollte so nah an der Maus das Nasenloch werden, so dass die Maus das Tröpfchen einatmen kann. Unmittelbar nachdem die Maus diesen kleinen Tropfen inhaliert, werfen den Rest der Droge in der Pipettenspitze ein weiteres kleines Tröpfchen für die Maus zu bilden durch das gleiche Nasenloch ca. 2-3 sec später inhalieren. Achten Sie darauf, den Mund zu schauen. Wenn es is jede Flüssigkeit im Mund, hat der Tropfen nicht ganz in die Nase und dies sollte vermerkt werden.
- Halten Sie die Maustaste in dieser Position für 15 Sekunden. Es wird dringend empfohlen, dass ein Timer verwendet, um dieses 15 sec hold standardisieren.
- Wiederholen Sie die Schritte von 3,3 bis 3,6 für das rechte Nasenloch. Wenn irgendwelche Tropfen geschnupft werden sollte, dass Drop ersetzt und beachtet werden.
- Platzieren Sie die Maus wieder an der Spitze seines Käfigs für 2 min. Wiederholen Sie den gesamten Vorgang ab 2 min. nach Lieferung der ersten Tropfen. Dies gibt die Maus vier Tropfen 6 ul jeder insgesamt 24 ul Lösung. Eine Probe Zeitplan zum Dosieren einer oder zwei Mäuse auf einmal in Tabelle 2 ersichtlich.
- Nachdem die Maus alle Tropfen erhalten hat, zurück mit der Maus in seinen Käfig.
4. Allgemeine Tier Handhabung Techniken zur Akklimatisierung und intranasale Verabreichung von Drogen an Awake Mäuse
Nach jedem Akklimatisierung oder intranasale Verabreichung Sitzung sollte Mäusen werden gebenna behandeln, wie eine Cheerio oder geschält Sonnenblumensaat als positive Verstärkung. Leckereien als Belohnung und sie vor Kratzern ihre Nasen abzulenken, was möglicherweise zu Verletzungen selbst gegeben. Bei der Arbeit mit Gruppen gehalten werden Mäuse, sollte genug Leckereien für jede Maus abgelegt werden. Vor der Rückkehr Tiere in ihre Käfige sicher sein, Nester in ihre ursprünglichen Zustände wiederherstellen, um den Stress zu reduzieren. Bei der Dosierung von Gruppen gehalten Tieren müssen Handschuhe zwischen Dosierung von Käfigen, um nicht Duft von Käfig zu Käfig Kolonie Kolonie übertragen, wie sie sein wird gegeneinander aggressive geändert werden.
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Representative Results
Es gibt mehrere Möglichkeiten, um die Wirksamkeit der Arzneimittelzuführung zu bestimmen. Die erste ist, intranasal verwalten ein Farbstoff wie Tusche oder Methylenblau und um den Farbstoff zu visualisieren nach Euthanasie des Tieres innerhalb des olfaktorischen Epithel und nachdem das Gehirn entnommen wird, die Eingabe der ZNS durch die Siebplatte. Die zweite ist, um das Medikament entweder durch Verwendung einer radioaktiv markierten Tag oder mittels ELISA Nachweis des unmarkierten Molekül geliefert messen. Ein gutes Beispiel der Verteilung des Arzneimittels im ZNS nach Verabreichung an wachen Mäusen kann an Hanson et al. 2012 7. Wir erwarten, dass die Riechkolben und Trigeminus eine hohe Konzentration des Medikaments geliefert enthalten. Bei 30 min nach intranasaler Verabreichung von 3,65 mmol Deferoxamin, waren die Konzentrationen in den Trigeminus-Nerv und olfaktorischen Nerv 29 uM und 13 uM jeweils. Wirkstoffkonzentrationen wird in allen Hirnregionen ersichtlich (in diesem Beispiel ein klingeltee von 0,6 bis 4,1 uM uM wurde gemessen) bei höheren Konzentrationen in Gebieten Empfangen einer Eingabe von den olfaktorischen und Trigeminus. Zum Beispiel wird rostralen Regionen der Hirnrinde enthalten höheren Konzentrationen als kaudalen Cortex und Pons werden höhere Konzentrationen als Mittelhirn oder Medulla enthalten. Im Rückenmark eine absteigende Konzentrationsgradient von zervikal nach Lendenwirbelsäule wird allgemein beobachtet (in diesem Beispiel ein Gradient von 1,5 um bis 2,0 um). Intranasale Verabreichung führt auch zu hohen Konzentrationen von Drogen Erreichen der Hirnhäute und zervikalen Lymphknoten. Der dritte Weg, um die Wirksamkeit der Lieferung zeigen, ist eine Verhaltens-oder biochemische Reaktion auf das Medikament verabreicht zu messen. Zum Beispiel resultierte intranasale Deferoxamin Behandlung von transgenem Alzheimer Mäusen zu einer verbesserten Leistung in einem räumlichen Gedächtnisaufgabe 7 und Phosphorylierung von Glykogen-Synthase-Kinase-3 beta 9.
| Tag | Aktion | |
| 1 | M | Halten Sie für ~ 2-3 min |
| 2 | Tu | Halten Sie für ~ 2-3 min |
| 3 | W | Halten und Haustier ~ 2-3 min |
| 4 | Th | Halten und Haustier ~ 2-3 min |
| 5 | F | Leicht und Zuziehen oder scruff |
| 6 | M | Leicht und Zuziehen oder scruff |
| 7 | Tu | Scruff und Aufzug |
| 8 | W | Scruff und Aufzug |
| 9 | Th | Intranasale Grip |
| 10 | F | Intranasale Grip |
| 11 | M </ Td> | Intranasale (IN) Grip und Invertieren |
| 12 | Tu | Intranasale (IN) Grip und Invertieren |
| 13 | W | IN Grip, Umkehren, platzieren Pipettenspitze Nähe Nase |
| 14 | Th | IN Grip, Umkehren, platzieren Pipettenspitze Nähe Nase |
| 15 | F | IN Grip, Umkehren, liefern 1 Runde Kochsalzlösung jedem nare |
| 16 | M | IN Grip, Umkehren, liefern 1 Runde Kochsalzlösung jedem nare |
| 17 | Tu | IN Grip, Umkehren, liefern 2 Runden Kochsalzlösung jedem nare |
| 18 | W | IN Grip, Umkehren, liefern 2 Runden Kochsalzlösung jedem nare |
Tabelle 1. Beispiel Zeitplan für Gewöhnung an die Handhabung für intranasaler Gabe zu Awake Mäuse.
* Die Pipette wird einmal mit 6 ul geladen, sondern verwaltet die Maus als 2 x 3 ul Tropfen.
Tabelle 2. Beispiel Timeline für Dosiereinheit Ein oder Zwei Mäuse.
Abbildung 1. Fotos von verschiedenen Stufen und Winkeln, die eine Maus für wach intranasale Verabreichung von Medikamenten. 1A) Halten Sie die Maustaste fest auf dem Käfig oben mit der dominanten Hand verlassen die Schultern ausgesetzt, um die Haut zu greifen. 1B) Verwenden Sie die Daumen und Mittelfingerder nicht-dominanten Hand zu greifen und hochziehen Haut hinter den Schulterblättern. 1C) Verwenden Sie den Zeigefinger auf der Haut zurück zu ziehen von zwischen den Augen auf den Daumen und Mittelfinger (Frontansicht). 1D) Wie 1C (Seite view). 1E) Halten Sie die Maus auf den Kopf mit dem Ringfinger und / oder pinky, um die Basis des Schwanzes auf die Handfläche der Hand zu sichern. Der Hals der Maus sollte horizontal sein. 1F) Wie E, von der anderen Seite. 1G) verwalten Medikament mit einem 20 ul Pipette und Gelbeladung Pipettenspitze. 1H) Wie 1G, close-up view.
Abbildung 2. Ein Foto von einer kompletten Dosierstation für 2 einzeln untergebracht Mäusen. Eingeschlossen sind die beiden Mäusekäfige mit genügend Abstand zwischen zu halten die Mäuse separate, eine Pipettetor mit Tipps, einem Behälter für gebrauchte Tipps, ein Timer, Dosieren Blatt, ein post-Dosierung behandeln (wie Sonnenblumenkerne oder cheerios), Sanitär-Tücher, ein P20 (oder P10) Pipette, und das Medikament geliefert werden.
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Discussion
Dieses Verfahren zeigt, wie Mäusen Dosen von regelmäßigen intranasale Arzneimittel, das Gehirn, ohne den Einsatz von Anästhesie gezielt gegeben werden kann. Intranasale Arzneimittel können zu großen Gruppen von Mäusen über längere Zeit mit minimalem Aufwand verschickt werden. Eine einzelne Gruppe von bis zu 20 Mäuse intranasal von einer einzigen Person in weniger als einer Stunde behandelt werden. Eine Vielzahl von Molekülen, die von kleinen Eisenchelatoren Wachstumsfaktoren mesenchymale Stammzellen, haben nachgewiesen, dass sie schnell zielen auf die ZNS und haben gezeigt, Wirksamkeit bei Nagern Modelle. Vorgeschlagene Mechanismen der direkten Lieferung von der Nase zum Gehirn gehören extrazellulären Transport entlang der Geruchs-und Trigeminus-und Bulk-Strömung innerhalb der perivaskulären Räume 1,10. Intranasale Verabreichung des ZNS ist eine besonders nützliche Technik, weil es ist nicht nur schnell, sondern zielt auf die CNS Reduzierung der systemischen Exposition. Beispielsweise führte die intranasale Verabreichung von Deferoxamin an Ratten in 3-19 mal höher concentrations in Hirnregionen mit 28 Mal niedriger Konzentrationen im Blut 11. In einem anderen Beispiel, verbessert intranasal verabreichtem Insulin Speicher bei Alzheimer-Patienten innerhalb von 15 min ohne Änderung der Plasmaspiegel von Insulin oder Glukose 12. Ein zusätzlicher Vorteil ist die nicht-Invasivität des intranasale Abgabe Technik.
Es gibt einige Einschränkungen auf dieses Verfahren. Zunächst wird Drug-Delivery auf etwa 20-30 ul in einer einzigen Verabreichung beschränkt, so Löslichkeit des therapeutischen eine Rolle bei der Bestimmung der Dosisgrenzwerte spielen. Auch ist der Arzneimittelformulierung als wichtige Faktoren wie pH und Salzgehalt können die Zustellung zu beeinträchtigen. Große Abweichungen vom natürlichen Bedingungen, wie extreme pH-Wert und Salzgehalt, kann zur Beschädigung der Atemwege und des olfaktorischen Epithel von Mäusen. 13,14 Weitere, intranasale Verabreichung von narkotisierten Mäusen kann schwierig sein, zu meistern, und kann mehrere Wochen Training für die intranasale "Dosierer nehmen "erkennen können minimize "head-Spielraum" und eine optimale intranasale Verabreichung von Medikamenten. Bei falscher Dosierung Technik kann das Medikament in der Lunge oder im Magen, die Variabilität in der Medikamentenentwicklung das Gehirn nicht erreichen können einzuführen abtropfen lassen. Anzeichen dafür, dass dies geschehen sind Atembeschwerden oder Visualisierung von Flüssigkeit in den Mund nach der Verabreichung. Wenn möglich, ist es ratsam, neue intranasale "Dosierer" zu liefern Kochsalzlösung / Fahrzeug Gruppen für mehrere Wochen oder Monate zu kontrollieren, bevor sie zu dosieren Medikament von erfahrenen Trainern zugelassen sind zu begrenzen. Schließlich wird dieses Verfahren wach intranasale an Mäuse begrenzt, wie Ratten und wach größere Tiere nicht so leicht gegriffen und kann übermäßig belastet werden, wenn auf den Kopf gehalten.
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Disclosures
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Acknowledgments
Die Autoren möchten die HealthPartners Institutional Animal Care danken und Verwenden Ausschuss Regionen Hospital.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| P20 pipettor set at 6 μl | |||
| Gel loading pipette tips | |||
| Timer | |||
| Waste receptacle for tips | |||
| Dosing sheet for notes | |||
| Pen | |||
| Drug and vehicle | |||
| Container to hold drug vials | |||
| Animals to be dosed | |||
| Spare gloves | |||
| Paper towels to wipe urine | |||
| Table 3. Materials Needed | |||
References
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