Summary
שיטת intranasally מנת להחדיר תרופות לעכברים ערים לצורך מיקוד המוח מתוארת. שיטה זו מאפשרת למינון חוזר לאורך תקופות ארוכות באמצעות ממשל אפי של תרופה ללא הרדמה, ומשלוח אף למוח עם חשיפה מינימאלית מערכתית.
Abstract
אפי ממשל הוא שיטה של מתן סוכנים טיפוליים למערכת העצבים המרכזית (CNS). זה אינו פולשני ומאפשר מולקולות גדולות שאינו חוצות את גישת מחסום דם המוח למערכת העצבים המרכזיים. תרופות ממוקדות ישירות למערכת העצבים המרכזיים עם משלוח אפי, הפחתת חשיפה מערכתית ותופעות לוואי מערכתיות ובכך לא רצויות 1. משלוח מהאף למערכת העצבים המרכזיים מתרחש בתוך דקות לאורך שני המסלולים העצביים הריח וtrigeminal באמצעות מסלול תאי ואינו דורש תרופה להיקשר לכל קולט או תחבורת אקסונלית 2. משלוח אפי הוא שיטה זכתה לפרסום נרחב, וכיום הוא משמש בניסויים קליניים בבני אדם 3.
משלוח אפי של תרופות במודלים של בעלי חיים מאפשר הערכה ראשונית של הפצה ויעילות פרמוקוקינטיים. בעכברים, ניתן להחדיר תרופות לבעלי חיים ערים (לא מורדם) על בסיס קבוע באמצעות specialized אחיזה אפי. משלוח ער מועיל משום שהוא מאפשר למינון כרוני לטווח ארוך ללא הרדמה, זה לוקח פחות זמן מאשר עם הרדמה, וניתן ללמוד ונעשה על ידי אנשים רבים, כך שצוותות של טכנאים מספרים גדולים יכולים מינון של עכברים בפרקי זמן קצרים. יעילות של תרופות מנוהלות intranasally בדרך זו לעכברים הודגמה במספר המחקרים כוללים אינסולין במודלים של עכברים סוכרתיים 4-6 וdeferoxamine מודלי עכבר אלצהיימר. 7,8
האחיזה אפי לעכברים ניתן ללמוד, אבל זה לא קל ודורשת תרגול, מיומנות, ואחיזה מדויקת בצורה יעילה כדי לספק תרופות למוח ולהימנע מניקוז לריאות וקיבה. עכברים הם מרוסנים בעבודת יד בעורף שונה ביד הלא הדומיננטית בצוואר שהתקיים במקביל לרצפה, ואילו סמים מועברים עם pipettor שימוש ביד הדומיננטית. בדרך כלל לוקח 3-4 שבועות של הסתגלות לטיפול לפני העכבריםניתן לערוך את אחיזה זה ללא תגובת לחץ. הכנו וידאו יופיטר זה לעשות טכניקת מסירה אפי זה לנגיש יותר.
Protocol
1. הסתגלות לטיפול למינון אפי לעכברי Awake
מבוא
עכברים יש התאקלמו לטיפול לתקופה של 2-4 שבועות לפני תחילת המינון אפי. הסתגלות לטיפול היא חשובה, שכן היא מסייעת להבטיח תנוחת גוף נכונה ליעילות מקסימלית של אספקת סמים אפי ערה. בנוסף, עכברים שלא היה מורגלים היטב לתהליך זה יכול להיות תגובת חרדה קשה לאחר מינון. עכברים צריכים להשקיע כ 2-3 ימים על כל אחד מתשעה שלבים לפני שממשיך לשלב הבא, בהתאם לנוחותו של בעל החיים לטיפול. רמת הלחץ של העכבר צריכה לשמש כמדד להתקדמות. משמעות הדבר הוא ניטור התנועות של העכבר, את הכמות / תדירות מתן שתן, צואה, רועד, ולנשוך. אם יש עכבר בתגובה ללחץ גבוהה, להישאר באותו שלב לפני שממשיך הבא עד לתגובה מופחתת. מדגם SCH ההסתגלותedule ניתן לראות בטבלה 1. התאקלמות של העכברים צריכה להתקדם דרך השלבים הבאים של פעם ביום. ביצוע פעולות אלה יותר מפעם אחת ביום, בניסיון להאיץ את ההסתגלות, אינו מומלץ.
- הנח את העכבר בכף היד, לתקופה של שתיים עד שלוש דקות, לא יותר מרגל אחת מעל לראש הכלוב, כחיות לעתים קרובות לקפוץ במהלך שלב מקדים זה. אם העכבר מנסה לזחול החוצה של היד ואת זרועו של אחד, פשוט להרים את העכבר בבסיס הזנב ולמקם אותו בחזרה ביד אחת.
- הנח את העכבר בכף היד לשלוש דקות וללטף את החיה בעדינות. חיות מחמד עכבר directionally מהראש ועד הזנב, תוך מתן אפשרות לבעלי החיים לנוע בחופשיות.
- הנח את העכבר בכף היד לשלוש דקות בזמן שמעסה מאחורי האוזניים (קל צובט יחד את העור בחלק האחורי של הצוואר באמצעות האגודל ואצבע מצביע).
- החזק / liFT העכבר בעורף שלה למשך 30 שניות, ומאפשר מנוחת העכבר על גבי הכלוב למשך 30 שניות לפני חזרה את האחיזה שוב.
- החזק את העכבר באמצעות אחיזה אפי, אשר מתוארת בסעיף 2, אבל לא להפוך את החיה (להשלים עד השלב 2.4). להחזיק בעלי החיים כמו זה לתקופה של 30 שניות ולשחרר חזרה לראש הכלוב. חזור פעם שנייה לאחר תקופת מנוחה של דקה אחת.
- החזק את העכבר עם האחיזה אפי כאמור בסעיף 2, כולל היפוך חיה כל כך צד הגחון שלה פונה כלפי מעלה לכיוון התקרה. ודא שצווארו של בעל החיים הוא מקביל לרצפה. תחזיק עמדה זו במשך 30 שניות. חזור על פעולה זו פעם שנייה, לאחר תקופת מנוחה של דקה אחת. עכברים מסוימים יתנגדו האחיזה אפי יותר מאחרים, במיוחד כאשר משתמשים בו בפעם הראשונה עם היפוך בשלב זה בהסתגלות. אם העכבר משחרר את עצמו מהלפיתה, שם את העכבר לאחור בחלק העליון כלוב ומחדש את האחיזה. חזור מחדש את האחיזה במידת צורך, אבל לפקח על רמת הלחץ של העכבר ולהחזיר אותו לכלוב במידת צורך. גורם נוסף שיכול לשחק תפקיד באובדן האחיזה בנקודה זו בתהליך ההתאקלמות הוא חוסר הניסיון של המטפלים בבעלי החיים עם טכניקת המסירה אפי.
- החזק את העכבר עם האחיזה אפי, להפוך, לזמן קצר למקם pipettor עם טיפ ריק מעל כל נחיר, ותחזיק בעמדת בעלי החיים למשך 30 שניות. חזור על פעולה זו אחרי תקופת מנוחה של דקה אחת.
- החזק את העכבר עם האחיזה אפי, להפוך אותו, ולנהל intranasally 6 μl של מי מלח לתוך n האם השמאל וימין כאמור בסעיף 3 (עד שלב 3.7).
- החזק את העכבר עם האחיזה אפי, היפוכו, ולנהל intranasally 6 μl של מי מלח לתוך n האם השמאל וימין הצבת פעמי החיה לאחור בחלק העליון הכלוב באמצע, כפי שתואר בסעיף 3.
2. גריפ אפי לשתק עכברי Awake
- הנח את עכבר on ראש הכלוב.
- עם האגודל ואצבע המורה של היד הדומיננטית שלך, להחזיק את העכבר בזנבו. שימוש באמצע שלך, הטבעת, ואצבעות זרת, קל להצמיד את החלק התחתון של הגוף לחלק העליון הכלוב (איור 1 א). בואו לתפוס את העכבר על גבי המוטות כמו שאתה קל למתוח את העכבר החוצה וכדאי לתפוס את עורפו.
- שימוש באגודל והאצבע אמצעית ביד הלא הדומיננטית, לצבוט את העכבר בחוזקה בעורפו (עודף עור) מאחורי הצוואר והכתפיים. מושך את העור הרפוי כדי להפוך את אוהל של עור לרוחב הכתפיים (1B איור). קח כמה שיותר עור שאפשר, אבל להיזהר לא למשוך את שריר שזה יגרום אי נוחות לעכבר. נהגתי בזהירות על מנת שלא תחול יותר מדי לחץ לבית החזה או בעמוד השדרה של בעל החיים. לחץ מוגזם או משייכת העור עשוי להוביל לעיכוב של נשימה במקרים מסוימים.
- עד מהרה את מקום האצבע ביד הלא הדומיננטית שלך על ראשו של העכבר כקרוב לאף ככל האפשר ולמשוך בחזרה על העור (האיור 1C, 1D). במקביל, חלק את האגודל והאצבע אמצעית לכיוון הראש למצב אופטימלי. באופן אידיאלי, העכבר לא צריך להיות מסוגל להזיז את ראשו אנכי או אופקי.
- תוך שמירה על האחיזה בעורף, הפך את העכבר על גבה. הגב של העכבר צריך להיות בכף היד שלך. בתקיפות לשמור על הזנב של העכבר (בסמוך לבסיס) על כף היד שלך עם שתי האצבעות האחרונות שלך (טבעת וזרת) על מנת לייצב את העכבר, או שאתה יכול לעטוף את האצבעות על פני הגוף התחתון (האיור 1E, 1F).
- בשלב זה לוודא שהצוואר וסנטרו של העכבר הם שטוחים ומקבילים לרצפה. הסנטר אמור להיות קרוב לזווית 180 מעלות עם הצוואר ככל האפשר כדי לסייע באספקה אפי. שינויים קלים בזווית עלולים לגרום תרופה לסופו באתר הלא הנכון. ודא את העכבר הוא מסוגל לנשום על ידי צפייה בבטן. העכבר should לא תוכל לזוז, אבל צריך להיות נוח ולא בשום כאב. אם אתה רואה את הצוואר וסנטרו של העכבר עושה "וי", אז אתה צריך מחדש את האחיזה.
3. משלוח אפי של תרופות לעכברי Awake
מבוא
באמצעות אחיזה אפי, כל עכבר רסן פעמים והחזיק בצוואר במקביל לרצפה שלהם בזמן נפח של 20-30 μl של נוזל מנוהל. כרך זה הוא בטוח ויעיל לעכברים קטנים גדולים, אנחנו משתמשים בדרך כלל 24 μl, ומתוארים בפרוטוקול זה. השיטה אפי הערה ניתן להשתמש בעכברים בכל גיל, למשל בעכברים ילודים למחקר מדעי המוח התפתחותית. בעכברים ילודים, הכולל נפח קטן (8 μl) וגודל טיפה (μl 1) יש להשתמש כדי להכיל את הנפח הקטן יותר של חלל האף. תרופות מועברות בדרך כלל לשני עכברים בכל פעם, לסירוגין תקופות מנוחה על מנת להפוך את השימוש היעיל ביותר של זמן ולשמור על oלוח זמנים של n. ההגדרה תהיה בהתאם אם אתה מינון עכברי קבוצה שוכנו או עכברים שוכנו בנפרד קצת שונה. עם העכברים שוכנו בנפרד, כדאי למקם את כל החומרים שלך שבבין הכלובים כדי למנוע מעכברים מעבר מעל לראש הכלוב האחר. עם הקבוצה שוכן עכברים, מינון שמכלוב בלבד. זה חשוב שכל עכבר בכלוב קבוצה שוכנה מקבל את אותו טיפול אפי, כפוטנציאל לזיהום צולב של שני טיפולים שונים קיים בשל גירוש סמים באוויר או במגע עם עור. מומלץ מאוד שגיליון מינון יודפס מראש, כדי להזכיר לטכנאים של מטלות טיפול, להקליט הערות של טיפין שלא נענו, לציין בריאות כללית של כל בעלי חיים, וכו '
צעדים
- הגדר את הכלובים שבם הם צריכים להיות למינון, והקימו תחנת מינון (איור 2).
- הסר עכבר מכלוב ולשמור על כלוב במינון.
- להרים את העכבר באמצעות אחיזה אפי תוארה בסעיף 2.
- שימוש ביד הדומיננטית שלך, טען את pipettor עם 6 μl של סמים או כלי רכב. הנח את קצה pipettor מלא ליד הנחיר השמאלי של העכבר, בדרך כלל בזווית של 45 מעלות (האיור 1G, 1H). אם יש לך פתרון צמיג ייתכן שתצטרך להגדיל את הזווית שלך ל -90 מעלות כי התרופה עשויה להפעיל את הצד של קצה פיפטה במקום לגרום לירידה. אם צמיג מאוד, מנגב את קצה פיפטה עם רקמה לפני גירוש נוזלי עשויים לעזור. לאט להוציא את התרופה בצורת טיפה קטנה כבמחצית מההיקף (3 μl).
- הטיפה צריכה להיות ממוקמת קרוב מספיק לנחיר של העכבר כך שהעכבר יכול לשאוף טיפה. מייד אחרי העכבר שואף הטיפה הקטנה הזה, להוציא את השארית של התרופה בקצה פיפטה כדי ליצור עוד טיפה קטנה לעכבר לשאוף דרך נחירו על 2-3 שניות מאוחר יותר. הקפד להתבונן בפה. אם יש לישל כל נוזל בפה, הירידה לא להפוך אותו במלואו לתוך האף וזה יש לציין.
- החזק את העכבר בתפקיד זה במשך 15 שניות. מומלץ מאוד שטיימר לשמש כדי לתקן את אחיזת סעיף 15 זה.
- חזור על שלבים 3.3-3.6 לנחיר הימני. אם כל טיפין בבוז, שהירידה צריכה להיות מוחלפת וציינה.
- הנח את העכבר על גב העליון של הכלוב שלו למשך 2 דקות. חזור על התהליך כולו מתחיל 2 דקות. אחרי הלידה בטיפה הראשונה. זה נותן את העכבר 4 טיפין של 6 μl כל בהיקף של 24 μl של פתרון. לוח זמנים לדוגמה עבור מינון עכברים אחד או שניים בו זמנית ניתן לראות בטבלה 2.
- אחרי העכבר קבל את כל הטיפין, תחזיר את העכבר לכלוב שלו.
4. טכניקות כלליות בעלי חי טיפול לאקלום ומשלוח של תרופות אפי לעכברי Awake
לאחר כל פגישה או הסתגלות מינון אפי, עכברים צריכים להיות לינה טיפול, כגון דגני בוקר או זרעי חמניות קלופות כחיזוק חיובי. פינוקים ניתנים כפרס וכדי להסיח את הדעה מלגרד את אפם, שעלול לגרום ניזק לעצמם. כאשר עובד עם קבוצות עכברים שוכנו, מספיק פינוקים צריכים להיות ירד לכל עכבר. לפני החזרת חיות לכלוביהן להיות בטוח כדי לשחזר קינים למדינות המקוריות שלהם כדי להפחית את הלחץ. כאשר מינון חי קבוצה שוכנו, כפפות חייבות להיות שונות בין המינון של כלובים כדי לא להעביר ריח ממושבה למושבת כלוב כלוב, כפי שהם יהפכו לאגרסיביים אחד כלפי שניים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ישנן מספר דרכים כדי לקבוע את היעילות של מתן תרופה. הראשון הוא intranasally לנהל צבע, כגון הודו או דיו כחול תילן ולדמיין את הצבע לאחר המתת חסד של החיה בתוך אפיתל ההרחה ואחרי המוח מוסר, נכנס מערכת העצבים המרכזיים דרך צלחת cribriform. השני הוא למדוד את התרופה נמסרה גם על ידי שימוש בתג כותרת רדיו או באמצעות זיהוי ELISA של המולקולה ללא תווית. דוגמה טובה להפצת סמים במערכת עצבים מרכזיים לאחר מתן לעכברים ערים ניתן למצוא בנסון et al. 2012 7. אנו מצפים נורת חוש הריח ועצב trigeminal להכיל ריכוז גבוה של התרופה נמסרה. ב30 דקות לאחר מתן אפי של deferoxamine 3.65 μmol, ריכוזיות בעצב trigeminal ועצב הרחה היו 29 מיקרומטר ו13 מיקרומטר בהתאמה. ריכוז תרופה יהיה ניכר לאורך כל האזורים של המוח (בדוגמה זו צלצלהדואר של 0.6 מיקרומטר ל 4.1 מיקרומטר שנמדד) בריכוזים גבוהים יותר באזורים המקבלים קלט מן עצבי ריח ומשולשים. לדוגמה, אזורים מקוריים של הקליפה יכילו ריכוזים גבוהים יותר מאשר זנב קליפה ופונס יכילו ריכוזים גבוהים יותר מאשר המוח התיכון או הלשד. בחוט שדרת מפל ריכוזים יורד מצוואר הרחם לעמוד שדרה המותני הוא ציין בדרך כלל (שיפוע של 1.5 מיקרומטר עד 2.0 מיקרומטר בדוגמה זו). אפי ממשל גם תוצאות בריכוזים גבוהים של תרופה מגיעים לקרומי המוח ואת בלוטות הלימפה בצוואר רחם. הדרך השלישית להפגין יעילות של משלוח היא למדוד תגובה התנהגותית או הביוכימי לתרופה המנוהלת. לדוגמה, טיפול deferoxamine אפי של העכברים המהונדס של אלצהיימר הביא ביצועים משופרים במשימה מרחבית זיכרון 7 וזירחון של קינאז synthase הגליקוגן 3 9 בטא.
| היום | פעולה | |
| 1 | M | חזק למשך 2-3 דקות ~ |
| 2 | ט"ו | חזק למשך 2-3 דקות ~ |
| 3 | W | החזק וחיות מחמד ~ 2-3 דקות |
| 4 | ה | החזק וחיות מחמד ~ 2-3 דקות |
| 5 | F | קל קמצוץ או עורף |
| 6 | M | קל קמצוץ או עורף |
| 7 | ט"ו | עורף ומעלית |
| 8 | W | עורף ומעלית |
| 9 | ה | גריפ אפי |
| 10 | F | גריפ אפי |
| 11 | M < / Td> | אפי גריפ (IN) והפוך |
| 12 | ט"ו | אפי גריפ (IN) והפוך |
| 13 | W | באחיזה, הפוך, הנח קצה פיפטה ליד האף |
| 14 | ה | באחיזה, הפוך, הנח קצה פיפטה ליד האף |
| 15 | F | באחיזה, הפוך, לספק סיבוב 1 מליח לכל n האם |
| 16 | M | באחיזה, הפוך, לספק סיבוב 1 מליח לכל n האם |
| 17 | ט"ו | באחיזה, הפוך, לספק 2 סיבובים מלוחים לכל n האם |
| 18 | W | באחיזה, הפוך, לספק 2 סיבובים מלוחים לכל n האם |
טבלת 1. לוח זמנים לדוגמה להסתגלות לטיפול למינון אפי לעכברים ערים.
| זמן (דקות: שניות) | עכבר # | פעולה |
| 0:00 | 1 | סט של 1 * טיפין בנחיר שמאלי |
| 0:15 | סט של 2 * טיפין בנחיר ימני | |
| 0:30 | מקום על גבי כלוב | |
| 1:00 | 2 | סט של 1 * טיפין בנחיר שמאלי |
| 1:15 | סט של 2 * טיפין בנחיר ימני | |
| 1:30 | מקום על גבי כלוב | |
| 2:00 | 1 | סט 3 של * טיפין בנחיר שמאלי |
| 2:15 | סט 4 מ* טיפין בנחיר ימני | |
| 2:30 | מקום בכלוב עם פינוק | |
| 3:00 | 2 | סט 3 של * טיפין בנחיר שמאלי |
| 3:15 | סט 4 מ* טיפין בנחיר ימני | |
| 3:30 | מקום בכלוב עם פינוק |
* Pipettor נטען פעם אחת עם 6 μl, אך מנוהלת על העכבר כ2 3 טיפי μl x.
טבלה 2. ציר זמן לדוגמה למינון אחד או שני עכברים.
איור 1. תמונות של שלבים וזוויות של החזקת עכבר למסירה אפי ערה של סמים שונים. 1A) החזיקו את העכבר כלפי מטה בחוזקה בראש הכלוב עם היד הדומיננטית עוזבת את הכתפיים החשופות לאחוז עור. 1B) השתמש באגודל ואצבע אמצעיתשל היד הלא הדומיננטית לאחיזה ולמשוך את העור ממש מאחורי השכמות. 1C) השתמש באצבע כדי למשוך את העור בחזרה מבין העיניים לכיוון האגודל והאצבע אמצעית (תצוגה מקדימה). 1D) הזהה 1C (צד נוף). 1E) להחזיק את העכבר במהופך באמצעות אצבע הטבעת ו / או זרת כדי לאבטח את בסיס הזנב לכף היד. הצוואר של עכבר צריך להיות אופקי. 1F) בדיוק כמו אי, מהצד השני. 1G) Administer תרופה עם pipettor 20 μl וקצה ג'ל טעינת פיפטה. 1H) הזהה 1G, מבט מקרוב.
איור 2. תמונה של תחנת מינון מלאה ל 2 עכברים שוכנו בנפרד. הם כללו את שני כלובי עכברים עם מספיק מרחק בין לשמור את העכברים נפרדים, pipetטור עם עצות, טיפים למכולה המשמשים, טיימר, גיליון מינון, פינוק שלאחר מינון (כמו גרעיני חמניות או צ'יריוס), מגבונים סניטריים, P20 pipettor (או P10), וסמים כדי להיות מועבר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
שיטה זו מראה כיצד עכברים ניתן לתת מינונים רגילים של תרופה אפי כדי למקד את המוח ללא שימוש בהרדמה. תרופה אפי יכולה להיות מועברת לקבוצות גדולות של עכברים לפרקי זמן ממושכים עם מינימום מאמץ. קבוצה אחת של עד 20 עכברים ניתן לטפל intranasally על ידי אדם יחיד בפחות משעה אחת. מגוון רחב של מולקולות, הנע בין chelators ברזל הקטן לגורמי גדילה לתאי גזע mesenchymal, הוכח במהירות כדי למקד את מערכת העצבים המרכזיים והראה יעילות במודלים של מכרסמים. מנגנונים מוצעים של מסירה ישירה מהאף למוח כוללים הובלה תאית לאורך עצבי הריח וtrigeminal וזרימה בתפזורת בתוך חללי perivascular 1,10. משלוח אפי למערכת העצבים המרכזיים הוא טכניקה שימושית במיוחד משום שזה לא רק מהיר, אבל זה מתמקד במערכת העצבים המרכזיים הפחתת חשיפה מערכתית. לדוגמה, מנהל של אפי deferoxamine לחולדות הביא 3-19 פעמים conce הגבוהntrations באזורי מוח עם 28 פעמי ריכוזים נמוכים יותר בדם 11. בדוגמה אחרת, אינסולין מנוהל intranasally משפר את הזיכרון בחולי אלצהיימר בתוך 15 דקות מבלי לשנות את רמות הפלזמה של אינסולין או גלוקוז 12. יתרון נוסף הוא, שאינה הפולשנות של טכניקת המסירה אפי.
ישנן מספר מגבלות לשיטה זו. ראשית, משלוח סמים מוגבל לכ 20-30 μl בממשל יחיד, כך מסיסות של טיפולי תשחק תפקיד בקביעת גבולות המינון. כמו כן, ניסוח התרופה חשוב כגורמים כמו חומציות ומליחות יכולה להשפיע על הלידה. סטיות גדולות מתנאים טבעיים, כגון pH ומליחות קיצוניות, עלולות לגרום הניזק לepithelia נשימה וחוש הריח של עכברים. 13,14 יתר על כן, מינון אפי של עכברים ללא הרדמה יכול להיות קשה לשליטה, ויכולות להימשך מספר שבועות של אימונים לdosers אפי " "כדי להיות מסוגל 'מיניםize "חדר הראש לכשכש" ולהשיג מינון אופטימלי של תרופה אפי. בעזרת טכניקת מינון נכונה, התרופה יכולה לנקז לתוך הריאות או הקיבה, שיכול להציג את השונות בסמים להגיע למוח. סימנים לכך שזה אירעו אירועי קשיי נשימה או הדמיה של נוזל בפה לאחר מתן. אם אפשר, רצוי להגביל "dosers" אפי החדש לאספקה מלוחה / רכב לשלוט קבוצות במשך כמה שבועות או חודשים לפני שהם מאושרים לתרופת מינון על ידי מאמני מומחים. לבסוף, שיטה אפי ערה זה מוגבל לעכברים, חולדות וערות ובעלי חיים גדולים יותר הם לא אחזו בקלות, ויכול להדגיש יתר על מידה כאשר במהופך.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות לטיפול בבעלי חי HealthPartners המוסדי והשתמש ועדה בבית חולי אזורים.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| P20 pipettor set at 6 μl | |||
| Gel loading pipette tips | |||
| Timer | |||
| Waste receptacle for tips | |||
| Dosing sheet for notes | |||
| Pen | |||
| Drug and vehicle | |||
| Container to hold drug vials | |||
| Animals to be dosed | |||
| Spare gloves | |||
| Paper towels to wipe urine | |||
| Table 3. Materials Needed | |||
References
- Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. J. Pharm Sci. 99, 1654-1673 (2010).
- Thorne, R. G., Pronk, G. J., Padmanabhan, V., Frey, W. H. 2nd Delivery of insulin-like growth factor-I to the rat brain and spinal cord along olfactory and trigeminal pathways following intranasal administration. Neuroscience. , 127-481 (2004).
- Benedict, C., et al. Intranasal insulin as a therapeutic option in the treatment of cognitive impairments. Exp. Gerontol. 46, 112-115 (2011).
- Francis, G. J., et al. Intranasal insulin prevents cognitive decline, cerebral atrophy and white matter changes in murine type I diabetic encephalopathy. Brain. 131, 3311-3334 (2008).
- Francis, G., et al. Intranasal insulin ameliorates experimental diabetic neuropathy. Diabetes. 58, 934-945 (2009).
- Marks, D. R., Tucker, K., Cavallin, M. A., Mast, T. G., Fadool, D. A. Awake intranasal insulin delivery modifies protein complexes and alters memory, anxiety, and olfactory behaviors. J. Neurosci. 29, 6734-6751 (2009).
- Hanson, L., et al. Intranasal delivery of deferoxamine reduces spatial memory loss in APP/PS1 mice. Drug Delivery and Translational Research. 2, 160-168 (2012).
- Danielyan, L., et al. Protective effects of intranasal losartan in the APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer disease. Rejuvenation Research. 13, 195-201 (2010).
- Fine, J. M., et al. Intranasal deferoxamine improves performance in radial arm water maze, stabilizes HIF-1alpha, and phosphorylates GSK3beta in P301L tau transgenic mice. Exp. Brain Res. 219, 381-390 (2012).
- Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Adv. Drug Deliv. Rev. 64 (11), 614-628 (2012).
- Hanson, L. R., et al. Intranasal deferoxamine provides increased brain exposure and significant protection in rat ischemic stroke. J. Pharmacol. Exp Ther. 330, 679-686 (2009).
- Reger, M. A., et al. Effects of intranasal insulin on cognition in memory-impaired older adults: modulation by APOE genotype. Neurobiol. Aging. 27, 451-458 (2006).
- Kim, C. H., Song, H. yun, M, E. unA. hn, Lee, Y., G, J., Yoon, J. H. Effect of hypo-, iso- and hypertonic saline irrigation on secretory mucins and morphology of cultured human nasal epithelial cells. Acta Otolaryngol. 125, 1296-1300 (2005).
- Greiff, L., Andersson, M., Wollmer, P., Persson, C. G. Hypertonic saline increases secretory and exudative responsiveness of human nasal airway in vivo. Eur. Respir. J. 21, 308-312 (2003).
