逆行性冠灌流によってブタ心臓の脱細胞化するための手順
Summary
迅速かつ完全に逆行灌流を通して無傷ブタ心臓から細胞成分を除去するための方法が記載されている。この方法は、複数の臨床アプリケーションで使用するための可能性を秘めているサイト固有心筋細胞外マトリックス足場が得られます。
Abstract
主に足場のネイティブアーキテクチャを維持しながら、灌流ベースの全臓器の脱細胞化は最近、サイト固有の細胞外マトリックスの足場を作成するための手段として、組織工学の分野で関心を集めています。現在までに、このアプローチは、心臓、肺、肝臓1月5日を含めて、臓器の様々なシステムで利用されている。簡単にアクセスできる血管網なしで組織のための前の脱細胞化法は、界面活性剤、酸、または周囲の細胞外環境6月8日から細胞および核成分を除去するための手段として、酵素処理のソリューションに対する組織の長期の暴露に依存してきた。しかし、拡散を介して組織に浸透するソリューションの能力に応じてこれらの方法ヒンジ式の有効性。 decellularizatiのとは対照的に、自然の血管系による臓器の血流を効果的に拡散距離を減少させ、促進輸送組織のうち、組織および細胞成分にエージェント上。ここで、我々は完全に冠状逆行灌流を通して無傷ブタの心臓をdecellularizeする方法について述べる。プロトコルは、無傷の心臓の3次元構造を完全に脱細胞化された心臓の細胞外マトリックス（C-ECM）の足場を得た。我々の方法は、酵素、界面活性剤、および細胞の溶解および除去を助けるため高張低張とリンスと相まって酸のシリーズを使用していました。プロトコルは、細胞物質の除去を助けるためにTriton X-100およびデオキシコール酸ナトリウム溶液に続くマトリックスから細胞を分離するためにトリプシン溶液を使用していました。説明されたプロトコルはまた、長時間の2リットル/ min以上の灌流速度を使用します。細胞破片の汚染なし、組織への薬剤の輸送許可ソリューションの変更と相まって、高流量、および組織のリンス効果を確実にした。記載された方法はNATIからすべての核物質を除去様々なアプリケーションに使用することができ、サイト固有の心臓ECMの足場を作成VEブタ心臓組織、。
Protocol
Representative Results
Discussion
現在の研究では、ブタの心臓の一貫性のある効率的な脱細胞化するための方法論を説明した。プロトコルは、以前に発表した報告書1への変更であり、再現性の高い結果が得られた流量と圧力の上昇に長い露出が含まれていました。結果として脱細胞化組織は、組織2が正常細胞化のために発行基準のすべてを満たした。頻繁なソリューションの変更は組織に細胞物質の再導入?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者はブローガンゲスト、ミシェル·ウィーバー、そしてクリステンリッペルトを承認したいと思います。この研究のための資金は、NIHグラントR03EB009237ならびにNIHの訓練助成生体イメージングとバイオの国立研究所からT32EB001026-06とT32HL076124-05によって提供されました。
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| Trypsin | Gibco | 15090 | |
| EDTA | Fisher | BP120-500 | |
| NaN3 | Sigma | S2002-500G | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-1L | |
| 10X PBS | Fisher | BP399-20 | |
| Sodium Deoxycholate | Sigma | D6750-500G | |
| Peracetic Acid | Pfaltz and Bauer | P05020 | 35% CAS# 79-21-0 |
| Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
| Masterflex Pump Drive | Cole Parmer | SI-07524-50 | |
| Masterflex Tubing | Cole Parmer | 96400-18 | Size 18 |
| Barbed Reducer | Cole Parmer | EW-30612-20 | |
| 4L Beaker | Fisher Scientific | 02-540T |
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