Метод для быстрого и полного удаления клеточных компонентов из сердца свиньи нетронутым через ретроградной перфузии описано. Этот метод дает конкретного участка сердечной внеклеточного матрикса леса, который имеет потенциал для использования в различных клинических применений.
Перфузии на основе целого decellularization орган недавно получил интерес в области тканевой инженерии в качестве средства для создания конкретных участков леса внеклеточной матрицы, в то время как в значительной степени сохранение родного архитектуры на эшафот. На сегодняшний день, данный подход был использован в различных системах органов, включая сердце, легкие, печень и 1-5. Предыдущие методы decellularization для тканей, не легко доступны сосудистой сети, сделали ставку на длительном воздействии ткани для решения моющих средств, кислот, или ферментативного лечения в качестве средства для удаления клеточных и ядерных компонентов из окружающей внеклеточной среды 6-8. Однако эффективность этих методов навесной на способность решения проникать в ткани с помощью диффузии. В отличие от перфузии органов через естественные сосудистой системы эффективно уменьшить расстояние диффузии и способствовали перевозки decellularizatiна веществ в тканях и клеточных компонентов из ткани. Здесь мы опишем метод, чтобы полностью decellularize нетронутыми сердца свиньи через коронарные ретроградной перфузии. Протокол дали полностью decellularized сердечной внеклеточного матрикса (С-ECM) эшафот с трехмерной структурой сердце нетронутой. Наш метод использовался ряд ферментов, моющих средств, и кислоты в сочетании с гипертонической и гипотонической полоскания, чтобы помочь в лизис и удаление клеток. Протокол, используемый раствор трипсина чтобы отделить клетки от матрицы следует Triton X-100 и натрий решения дезоксихолата, чтобы помочь в удалении клеточного материала. Описанный протокол также использует перфузии скоростью более 2 л / мин в течение длительных периодов времени. Высокая скорость потока, в сочетании с решением изменения позволили транспортных агентов в тканях без загрязнения клеточных обломков и обеспечить эффективное полоскание тканей. Описанный способ удалить все ядерные материалы от Нативе свиного сердечной ткани, создавая сайт-специфической сердечной ECM эшафот, которые могут быть использованы для различных применений.
Данное исследование описано методология последовательной и эффективной decellularization из свиного сердца. Протокол был модификацией ранее опубликованного отчета 1, и включить больше воздействием потока и повышения давления, в котором содержится более воспроизводимые результаты. Пол…
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы выразить признательность Броган гостей, Мишель Уивер и Кристен Липперт. Финансирование для этого исследования был предоставлен грант NIH R03EB009237, а также обучение грантов NIH T32EB001026-06 от Национального Института биомедицинской визуализации и биоинженерии и T32HL076124-05.
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
Trypsin | Gibco | 15090 | |
EDTA | Fisher | BP120-500 | |
NaN3 | Sigma | S2002-500G | |
Triton X-100 | Sigma | X100-1L | |
10X PBS | Fisher | BP399-20 | |
Sodium Deoxycholate | Sigma | D6750-500G | |
Peracetic Acid | Pfaltz and Bauer | P05020 | 35% CAS# 79-21-0 |
Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
Masterflex Pump Drive | Cole Parmer | SI-07524-50 | |
Masterflex Tubing | Cole Parmer | 96400-18 | Size 18 |
Barbed Reducer | Cole Parmer | EW-30612-20 | |
4L Beaker | Fisher Scientific | 02-540T |