Vi visar en minimalinvasiv teknik kallas neonatal subventrikulära zonen elektroporering. Tekniken består av injicera plasmid-DNA i de laterala ventriklarna hos neonatala valpar och applicera elektrisk ström för att leverera och genetiskt manipulera neurala stamceller
Neurala stamceller (NSC) linje den postnatala laterala ventriklarna och ger upphov till flera celltyper som inkluderar neuroner, astrocyter och ependymala celler 1. Kunskap om de molekylära vägar som är ansvariga för NSC självförnyelse, engagemang och differentiering är avgörande för att utnyttja deras unika möjligheter att reparera hjärnan och bättre förstå centrala nervsystemet. Tidigare metoder för manipulering av däggdjurssystem krävde tidsödande och dyr strävan av genteknik på hela djuret nivå 2. Sålunda har de allra flesta studier undersökte funktioner NSC molekyler in vitro eller i ryggradslösa djur.
Här visar vi de enkelt och snabbt teknik för att manipulera neonatala NPC som kallas neonatal subventrikulära zonen (SVZ) elektroporering. Liknande tekniker utvecklades för tio år sedan för att studera embryonala NSCs och har hjälpt studier om corticaL utveckling 3,4. Mer nyligen detta tillämpades för att studera den postnatala gnagare framhjärnan 5-7. Denna teknik resulterar i robusta märkning av SVZ NSCs och deras avkomma. Således ger födsel SVZ elektroporering en kostnads-och tidseffektivt alternativ för däggdjur NSC genteknik.
Här vi detalj tekniken av neonatal SVZ elektroporering, en teknik för att snabbt och robust märka och manipulera SVZ stamceller och deras avkomma. Det finns flera fördelar som elektroporering har i jämförelse med andra tekniker. Först, med tanke på fokus märkning av celler, är en möjlighet att urskilja celler autonoma och icke-cells autonoma effekter. Det andra, genetisk manipulering med inducerbara system gör att man kan jämföra effekter före eller efter synaptisk integrering. Vidare kan man kringgå anv…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete har finansierats med bidrag från Department of Defense (idéutveckling utmärkelse, W81XWH-10-1-0041, AB), CT stamceller bidrag (AB), och en National Institute of Health NRSA 10.668.225 (DMF). Den nuvarande Materialet baseras på arbete delvis stöds av staten Connecticut under Connecticut stamcellsforskning Grants. Dess innehåll är helt och hållet av författarna och inte nödvändigtvis representerar officiella ståndpunkter i staten Connecticut, Institutionen för folkhälsovetenskap i delstaten Connecticut eller CT Innovations hade Inc. finansiärer ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |